1%雞紅細胞懸液配制注意事項

趙明娟 崔鴻博 劉乾

（北京市懷柔區動物疫病預防控制中心 101400）

血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗是新城疫和高致病性禽流感診斷技術之一[1，2]，也是新城疫和高致病性禽流感免疫抗體檢測的重要方法。1%雞紅細胞懸液是該項試驗中的重要試劑之一，準確配制是保證試驗結果正確的重要因素。筆者通過多年臨床經驗總結了配制該試劑各個環節需要注意的內容，希望能為從業人員提供參考，不足之處歡迎批評指正。

1 采集血液

根據國標[1，2]要求，需要采集至少3 只SPF 或無禽流感和新城疫抗體的非免疫雞的抗凝血。實際操作中也可采集1 只符合條件的公雞血液。每5ml 的血液能獲得約2ml 的紅細胞。一般采集公雞翅靜脈血，一人保定公雞，一人用5ml 一次性注射器采集血液。采血前需用酒精棉球為采集部位消毒，同時可以起到濕潤羽毛，起暴露血管的作用，便于采血者操作。

2 抗凝處理

2.1 阿氏液處理

將采集的血液與阿氏液以1：1 的比例混合，輕輕地充分搖勻，在4℃環境下可保存兩周。阿氏液的量一定要大于血液量，否則容易造成血液凝固，有結塊，影響血球懸液的制備。實際工作中，若需要的量較小，可將阿氏液放于15ml 或50ml 扣蓋離心管中，再將采集的血液沿管壁緩緩注入與其混合。混勻時切忌劇烈震蕩，避免紅細胞破裂。

2.2 1：9 的枸櫞酸鈉真空貯血管處理

周志民等[3]通過試驗證明，采用1：9 的枸櫞酸鈉真空貯血管可以替代阿氏液。具體做法是將采集的符合要求的公雞血液直接注入抗凝管中，每管不超過2ml，輕輕上下搖動混勻。筆者認為，此種方法適合少量制備紅細胞懸液，操作簡單方便，若大量制備則需要多個抗凝管，反而增加了操作難度。

2.3 玻璃球抗凝處理

將預計采血量10 倍的0.9%生理鹽水或PBS 置于玻璃三角錐形瓶中，加入洗滌干凈的實心透明玻璃珠，以鋪滿瓶底為宜。采集雞血后，沿瓶壁緩緩注入三角瓶，同時朝一個方向快速輕輕搖動，搖動5～10min，直至溶液表面出現泡沫，血液中的纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，完成抗凝處理。

3 洗滌紅細胞

為避免試驗誤差，洗滌紅細胞所用的溶液應與后續開展血凝和血凝抑制試驗所用的溶液一致。即使用0.9%生理鹽水洗滌紅細胞，則HI 和HA 試驗也需要用0.9%生理鹽水；使用PBS洗滌紅細胞，HI 和HA 試驗也要用PBS。

將抗凝處理后的血液移至離心管中進行離心。離心要求2000 轉/min，每次離心5min，離心2～3 次，具體以離心后上清呈無色透明為準。每次離心后，用移液器棄去上清及白細胞，可將多個離心管中的紅細胞向一個離心管中合并，便于最后準確吸取紅細胞。每次洗滌重新加入洗滌液后，可用拇指墊一次性塑料薄膜輕輕上下顛倒混勻，保證充分洗滌。切忌劇烈搖晃，易導致紅細胞破裂。洗滌2～3 次后，若上清清亮，可最后一次離心7min，去掉上清，準確量取紅細胞制備懸液。

4 制備1%紅細胞懸液

為便于操作，可將提前量好99ml 生理鹽水或PBS 加入準備好的容器中，再用一次性移液器吸取1ml 洗滌好的紅細胞加入其中。吸去紅細胞時要把移液器吸頭插入離心管底部緩慢吸取，避免由于吸取速度過快導致氣體進入，造成誤差。量取的紅細胞加入溶液后，要將吸頭在溶液中反復吹吸若干次，將殘留在吸頭內壁的紅細胞洗入溶液。若紅細胞量不足1ml，則按照比例量取溶液配制。

5 保存

將配制完成的紅細胞懸液置4℃冰箱保存，可放置一周，但根據筆者臨床經驗，最好3d 內使用完。為避免反復使用造成污染，可分裝成小份保存，每次試驗取出一份使用。