羊胚胎移植研究進(jìn)展

劉芳歆 秦劍平 郭小軍 李增輝 楊超超 吳儀凡 艾需 宋曉越,3*

（1，陜西省神木市畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站 719300；2，榆林學(xué)院 719000；3，陜西省“四主體一聯(lián)合”肉羊工程技術(shù)校企聯(lián)合研究中心 719300）

1 胚胎移植概述

動(dòng)物胚胎移植（Embryo Transfer,ET）是采用超數(shù)排卵技術(shù)促使優(yōu)良生產(chǎn)性能的母畜大量排卵，通過(guò)配種獲得早期胚胎，再將早期胚胎分別移植入其它母畜子宮內(nèi)的技術(shù)。其目標(biāo)是對(duì)優(yōu)良生產(chǎn)性能個(gè)體的快速擴(kuò)繁，從而提高生產(chǎn)效率，滿足市場(chǎng)需要，增加養(yǎng)殖收入。

目前，羊等家畜的胚胎移植技術(shù)已經(jīng)達(dá)到了商業(yè)化的應(yīng)用水平，同時(shí)，還帶動(dòng)了相關(guān)的胚胎工程、品系培育等方面的技術(shù)發(fā)展，對(duì)推動(dòng)我國(guó)畜牧業(yè)的高效發(fā)展提供了有力的技術(shù)支持。

2 羊胚胎移植的操作方法

2.1 供、受體羊及試情種公羊的選擇

2.1.1 供體羊的選擇

選擇品種優(yōu)良、生產(chǎn)性能好、具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值的成年種羊作為供體羊。具體要求其系譜清楚、遺傳性能穩(wěn)定、繁殖性能好、沒(méi)有疾病。

供體母羊選擇2.5～6 歲以內(nèi)的最為合適，應(yīng)具有詳細(xì)的產(chǎn)羔記錄以供參考，應(yīng)保證至少經(jīng)過(guò)兩個(gè)以上正常發(fā)情周期，并且其產(chǎn)羔在60d 以上。

供體公羊應(yīng)完成精液質(zhì)量的檢測(cè)與評(píng)定，應(yīng)選取精液品質(zhì)好（精子活率高，精液濃度大）、遺傳性能穩(wěn)定、沒(méi)有疾病的公羊。

2.1.2 受體羊的選擇受體母羊應(yīng)選擇經(jīng)濟(jì)價(jià)值較低、但發(fā)情周期、繁殖性能及營(yíng)養(yǎng)狀況正常的經(jīng)產(chǎn)母羊。

2.1.3 試情公羊的選擇

應(yīng)當(dāng)選擇健康、體格強(qiáng)壯、性欲旺盛的成年公羊。在試情時(shí)對(duì)公羊應(yīng)當(dāng)配戴試情布，或通過(guò)手術(shù)法使其陰莖偏離，以避免發(fā)生自主交配。

2.2 同期發(fā)情

同期發(fā)情技術(shù)，又稱同步發(fā)情，指利用激素控制和調(diào)節(jié)母畜集中發(fā)情。

2.2.1 同期發(fā)情的機(jī)理

羊的發(fā)情周期可劃分為卵泡期和黃體期。當(dāng)黃體發(fā)生退化后，孕酮的含量明顯下降，然后卵泡會(huì)迅速發(fā)育，并最終成熟，完成排卵。如果用合成激素制劑代替母羊體內(nèi)激素在發(fā)情周期中的作用，就會(huì)針對(duì)性地對(duì)發(fā)情過(guò)程進(jìn)行控制，從而使多個(gè)母羊的發(fā)情周期保持一致。

2.2.2 藥物選擇

目前用于羊同期發(fā)情的藥物有兩類，一是孕激素類，屬于延長(zhǎng)黃體期的藥物，常見(jiàn)的有孕酮、甲孕酮等，能抑制卵泡的生長(zhǎng)。另一類藥物是縮短黃體期的，例如前列腺素（PG），用于降低孕激素水平，使母畜進(jìn)入卵泡期，提前發(fā)情。

2.2.3 同期發(fā)情技術(shù)流程

羊的同期發(fā)情一般使用孕酮栓結(jié)合孕馬血清促性腺激素（PMSG）的方法。首先，將孕酮海綿栓植入母羊陰道，12～14天后取出，然后肌肉注射300～350IU 的PMSG、以及1ml 的卵泡刺激素（FSH），72h 后發(fā)情率能達(dá)到85%。

2.3 超數(shù)排卵

利用外源性促性腺激素誘導(dǎo)多卵泡同時(shí)發(fā)育，排出多個(gè)卵母細(xì)胞的方法稱為超數(shù)排卵，簡(jiǎn)稱超排。

2.3.1 超數(shù)排卵機(jī)理

正常狀態(tài)下的母羊卵巢上有大量的有腔卵泡，由于FSH 含量的不足會(huì)導(dǎo)致其退化，只有少數(shù)卵泡能發(fā)育成熟并排卵。因此，如果使母羊體內(nèi)外源性的促卵泡激素水平增加，能促進(jìn)有腔卵泡的發(fā)育成熟，并大量排卵。

2.3.2 超數(shù)排卵方案

一般在發(fā)情周期的第11～13 天注射600～1100 單位的PMSG，出現(xiàn)發(fā)情后開(kāi)始配種，并注射500～750 單位的人絨毛膜促性腺激素（HCG）。

2.4 胚胎回收

2.4.1 胚胎回收技術(shù)

將早期胚胎在特定時(shí)間從供體子宮或輸卵管內(nèi)取出的過(guò)程，稱為胚胎回收。沖胚方法包括：輸卵管沖胚法（在供體羊配種后2～3d 沖胚）、子宮角沖胚法（供體羊發(fā)情后6～8d 沖胚）。但輸卵管沖胚法易導(dǎo)致輸卵管和傘部粘連，影響母羊繁殖，因此，最常用的為子宮角沖胚。胚胎的回收過(guò)程要特別注意減少對(duì)供體母羊的損傷，促進(jìn)供體母羊快速恢復(fù)[1]。

2.4.2 胚胎評(píng)定

依據(jù)顯微鏡下胚胎的細(xì)胞形態(tài)、透明帶的完整性、發(fā)育的階段以及細(xì)胞在透明帶中的占比綜合確定胚胎等級(jí)。一般將胚胎可分A、B、C、D 四個(gè)等級(jí)。正常的胚胎有卵裂球，其外形整齊、清晰，在分布上較均勻、緊密、大小一致，同時(shí)，發(fā)育情況應(yīng)當(dāng)和胚胎日齡一致。

2.4.3 胚胎移植

選擇與供體母羊同步發(fā)情的受體母羊進(jìn)行胚胎移植。將回收的高品質(zhì)胚胎移植到其黃體側(cè)子宮角，依據(jù)受體母羊黃體的具體情況可移植1～2 枚胚胎。一般取A 級(jí)胚胎用于移植。

2.4.4 術(shù)后護(hù)理

術(shù)后應(yīng)逐步恢復(fù)手術(shù)羊只的采食量，手術(shù)當(dāng)天應(yīng)飼喂優(yōu)質(zhì)飼草，從術(shù)后第2 天起添加少量精飼料，第3 天可進(jìn)行正常飼喂。

2.4.5 妊娠鑒定

術(shù)后應(yīng)及時(shí)開(kāi)展妊娠鑒定工作，減少空懷母羊數(shù)量，保證經(jīng)濟(jì)效益的最大化。可采用B 超儀在胚胎移植后45～50d 診斷是否妊娠。對(duì)已妊娠母羊應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，最好采用分圈飼養(yǎng)，為生產(chǎn)羔羊做好準(zhǔn)備[2]。

3 影響胚胎移植效率的因素

3.1 品種及個(gè)體差異

研究發(fā)現(xiàn)，綿羊的超排效果普遍比山羊差，而不同綿羊品種間的超排效果差異也較大，同時(shí)，一個(gè)品種內(nèi)個(gè)體間的超排差異也較大。唐大偉[3]等的研究表明，陶賽特的超排效果與薩福克、德克賽爾羊相比較好，平均可達(dá)8.36 枚。

3.2 激素作用

目前，超排常用激素是FSH 和PMSG。其中，PMSG 的效果較平緩，卵巢體積不會(huì)劇烈的增大，易恢復(fù)正常，排卵率較高。但其半衰期長(zhǎng)，容易導(dǎo)致大卵泡和卵巢囊腫，引發(fā)雌激素水平升高，從而對(duì)卵子成熟、受精和胚胎發(fā)育有負(fù)面影響。

3.3 手術(shù)影響

如果供體母羊多次被利用，由于手術(shù)損傷、出血等因素會(huì)造成生殖道粘連，影響超排效果。研究表明，用PMSG 對(duì)同一母羊重復(fù)超排會(huì)使降低卵巢的反應(yīng)，所發(fā)育的卵泡數(shù)和排卵數(shù)也將下降，甚至導(dǎo)致不產(chǎn)生成熟卵泡或不排卵。雖然FSH 沒(méi)有發(fā)現(xiàn)此缺點(diǎn)，但兩次超排間應(yīng)隔幾個(gè)情期，若能在中間妊娠一次更好，從而可有效消除生殖器官粘連等問(wèn)題。在胚胎移植手術(shù)方式的選擇上，腹腔鏡輸精不通過(guò)子宮頸，而直接輸入至子宮角，雖然輸精量少，但受精率高，因此，應(yīng)當(dāng)通過(guò)運(yùn)用有效的技術(shù)手段，避免胚胎移植術(shù)后發(fā)生粘連，并提高供體和受體母羊的利用率，從而提高胚胎移植的效率。

3.4 環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)水平

研究發(fā)現(xiàn)，綿羊的繁殖對(duì)季節(jié)有較高依賴性，秋季是綿羊最佳繁殖季節(jié)，因此，在秋季安排胚胎移植的效果較好，其妊娠率較高。

另外，供體母羊的營(yíng)養(yǎng)狀況也對(duì)超排和移植成功率有一定影響，特別是超排前后的營(yíng)養(yǎng)水平，對(duì)發(fā)情、排卵和受精作用都有比較顯著的影響。

4 總結(jié)

胚胎移植技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)中重要的一項(xiàng)應(yīng)用技術(shù)，已日趨成熟。該技術(shù)能擴(kuò)繁優(yōu)良種畜，減少生產(chǎn)成本，增加雙胎率，充分發(fā)揮優(yōu)良個(gè)體的遺傳和繁殖潛力，對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展有重大意義。目前，體外生產(chǎn)胚胎的商業(yè)化應(yīng)用也在逐步提高，有力的推動(dòng)著我國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展，前景廣闊。