聚葡萄糖對小鼠腹腔巨噬細胞活性的影響

摘要：膳食纖維可以影響機體的免疫系統(tǒng)，通過觀察聚葡萄糖對于小鼠腹腔巨噬細胞的影響，對其調(diào)節(jié)免疫機制效應(yīng)有重要意義。巨噬細胞具有抗原遞呈、吞噬、殺傷等功能，是機體起關(guān)鍵作用的免疫細胞，在機體非特異性防御中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)巨噬細胞被活化后，還能被作為抗原遞呈細胞參與，是先天免疫和后天免疫的橋梁，巨噬細胞的活化在免疫調(diào)節(jié)中起到了關(guān)鍵作用。

關(guān)鍵詞：聚葡萄糖;巨噬細胞;調(diào)控作用

聚葡萄糖（Polydextrose，PDX）為白色或類白色顆粒，以1，6-糖苷鍵結(jié)合為主經(jīng)葡萄糖隨機聚合而成，是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜且高度分支含有多種糖苷鍵的多糖類聚合物平均分子質(zhì)量約3200左右，聚合度約20，屬于可溶性膳食纖維。PDX雖然不能被人體消化，但可在腸道內(nèi)被有益菌分解為SCFA，可以起到改善腸道菌群微環(huán)境以及防治許多腸道疾病的作用。隨著生活條件的改善，人們的飲食中攝入的膳食纖維逐漸減少，所以現(xiàn)在對于膳食纖維的重要作用及合理應(yīng)用也越來越重視。人體攝入PDX后，不僅不會升高血糖，而且還能使縮短胃腸道消化吸收時間，在腸道中經(jīng)過腸道菌群分解后產(chǎn)生SCFA，從而調(diào)整腸道PH，改善腸道菌群微環(huán)境。雖然PDX對肥胖、心血管疾病、便秘、腹瀉以及結(jié)腸癌等多種疾病都具有防治作用，但在臨床上的應(yīng)用尚沒有明確的使用標(biāo)準(zhǔn)，其對于調(diào)控機體免疫功能的作用機制尚需進一步研究。

1.實驗材料與儀器

1.1實驗材料

聚葡萄糖（批號：F2017112053112，廣州匯健生物科技有限公司）、RPMI-1640培養(yǎng)基（Gibco）、胎牛血清（Gibco）、MTT（Sigma）、PBS（上海麥克林生化科技有限公司）、DMSO（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）

1.2實驗儀器

手術(shù)器械、超凈工作臺、TDL-5離心機、電子天平、CO2恒溫培養(yǎng)箱、MCO-17A倒置相差顯微鏡（COICXDS-1B）、酶標(biāo)儀（Multi-skan GO）等。

1.3實驗動物

KM小鼠，體重18-22g，雌雄不限（濟南朋悅實驗動物繁育有限公司），許可證號：SCXK（魯）20140007。

2實驗方法

2.1小鼠腹腔巨噬細胞的制備

小鼠頸椎脫臼處死，75%酒精浸泡5min，腹腔注入5ml1640培養(yǎng)基，輕輕揉腹，剪開皮膚，吸出腹腔液，1500rpm離心5min，棄掉上清液，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基重懸細胞并計數(shù)。將細胞加入96孔細胞板，每孔1×10個，100μl，放入CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h。

2.2 PDX溶液的制備

用RPMI-1640培養(yǎng)基配成0.01mg/ml、0.1mg/ml、1mg/ml儲備液備用，用滅菌后0.22μm濾膜過濾器過濾除菌。

2.3 PDX對小鼠巨噬細胞活性的影響

設(shè)置空白組，實驗組（濃度分別為0.01mg/ml、0.1 mg/ml、1mg/ml），每組設(shè)置30個重復(fù)孔，空白組加入100μlRPMI-1640培養(yǎng)基，實驗組依次加入100μl配好的試劑，分別培養(yǎng)2d，4d，6d，8d，10d，每組取6個重復(fù)孔，每孔加入20μlMTT溶液，培養(yǎng)4h后，棄去上清液，加入150μlDMSO，振蕩10min后，測量490nm波長處OD值。

3.統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，采用IBM SPSS Statistics22.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件進行方差分析，p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

4.實驗結(jié)果與分析

從表1中可以看出，與對照組比較，從第4d至第10d，PDX劑量組OD值對于空白組，均顯著升高（n=6，p<0.01），從表2中可看出，從第4d至第10d，PDX不同劑量組增值率均顯著高于對照組（P<0.01），因此，可推斷PDX能夠提高小鼠腹腔巨噬細胞活性。

5.總結(jié)

巨噬細胞活化后在形態(tài)上有著比較大的差別，但在功能上有許多相似點，比如抗原遞呈功能：能夠特異性結(jié)合T細胞表面的TCRαβ、CD3復(fù)合物分子，或者結(jié)合協(xié)同刺激分子受體CD2和CD28與T細胞相互作用從而調(diào)節(jié)獲得性免疫反應(yīng)。Chaen Y等經(jīng)過研究證明，活化后的巨噬細胞其吞噬能力大大增強，并且能夠分泌多種細胞因子，如TNF-α、ROI等，還能起到殺滅腫瘤細胞的效果，其釋放出的TNF-α、IL-6、IL-12能夠誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，從而起到殺滅病原微生物的作用。而在對于葡聚糖的研究中發(fā)現(xiàn)，樹突細胞dectin-1受體能夠被葡聚糖微顆粒激活從而使糖化血紅蛋白腫瘤壞死因子受體（GITRL）表達增加，通過GITRL通路可使T細胞得到增殖，進而延緩腫瘤細胞的發(fā)展起到明顯效果。經(jīng)過體外研究證明，β-葡聚糖可影響多種免疫受體，如Dectin-1，CR3 和TLR-2/6，從而誘導(dǎo)免疫細胞發(fā)揮作用。

聚葡萄糖具有調(diào)節(jié)機體免疫，預(yù)防結(jié)腸癌等作用，本實驗通過對比不同濃度PDX對于小鼠腹腔巨噬細胞的影響觀察得出，PDX可提高巨噬細胞活性，這一結(jié)果為應(yīng)用于調(diào)節(jié)免疫及防治免疫缺陷疾病奠定了理論基礎(chǔ)，并為進一步開發(fā)含膳食纖維藥品提供了實驗依據(jù)。

參考文獻：

[1]章辰琛.葡萄糖對小鼠腹腔巨噬細胞白介素-18表達的影響及其機制初探[D].蚌埠醫(yī)學(xué)院，2012.

[2]帥小雪.基于甘露糖受體的黑靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及機制研究[D].2015.

作者簡介：王新功（1963.09）男，籍貫：山東省煙臺市，單位：山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，職稱：副主任藥師，研究方向：中藥炮制。