百合健脾潤肺膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

祁 紅,劉傳統(tǒng)

(湖南省石門縣人民醫(yī)院,湖南 石門 415300)

百合健脾潤肺膠囊是本院制劑室配制的制劑(批號:090824,091020,100224),由黃芩、功勞木、白芍、百合等19味中藥組成,具有滋陰潤肺,化痰止咳之功效。用于浸潤性肺結(jié)核,慢性支氣管炎具有咳嗽,咳痰帶血、哮喘等具有肺腎陰虛表現(xiàn)者。為控制產(chǎn)品質(zhì)量,確保臨床療效,本文建立黃芩、白芍、陳皮、當(dāng)歸、功勞木的薄層色譜鑒別,并采用高效液相色譜法對主要藥味黃芩的主要成分黃芩苷的含量進(jìn)行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10Avp紫外檢測器,SCL-10Avp色譜工作站。Meter AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥 黃芩苷對照品(批號:0751-200212)、鹽酸小檗堿對照品(批號:110713-200609)、芍藥苷對照品(批號:110736-200484),陳皮苷對照品(批號:110721-200211),當(dāng)歸對照藥材(批號:927-200110),均購自中國藥品生物制品檢定所。硅膠G(青島海洋化工廠),甲醇為色譜純,其他均為分析純。百合健脾潤肺膠囊(本院生產(chǎn),批號:090824,091020,100224)。

2 薄層色譜鑒別

2.1 黃芩的鑒別[1]取本品內(nèi)容物2 g,加甲醇20 mL,超聲提取20 min,放冷,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇2 mL使溶解,作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品加乙醇制成每1 mL含黃芩苷1mg的溶液,作為對照品溶液,取去黃芩的樣品,同供試品溶液的制備方法,制成陰性對照液。吸取上述溶液各5 μ L,分別點于同一以4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的主斑點,陰性對照液則無斑點顯示。見圖1。

圖1 黃芩的TLC鑒別

2.2 功勞木的鑒別[1]取本品內(nèi)容物 5 g,加甲醇20 mL,超聲處理 15 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇5 mL溶解,作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。取去功勞木的樣品,同供試品液的制備方法,制成陰性對照液。吸取上述3種溶液各1 μ L,分別點于同一硅膠G板上,以苯-乙酸乙酯—甲醇—異丙醇—濃氨試液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑,置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi),展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的黃色熒光斑點,陰性對照液則無斑點顯示。結(jié)果見圖2。

圖2 功勞木的TLC鑒別

2.3 當(dāng)歸的鑒別[1]取本品內(nèi)容物2 g,加乙醚15 mL放置1 h,時時振搖,濾過,殘渣加丙酮1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.1 g,同法制成對照藥材溶液。取去當(dāng)歸的樣品,同供試品溶液的制備方法,制成陰性對照液。吸取上述3種溶液各5μ L,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的熒光斑點。陰性對照液則無斑點顯示。結(jié)果見圖3。

圖3 當(dāng)歸的TLC鑒別

2.4 白芍的鑒別 取本品內(nèi)容物1 g,加乙醇5 mL,時時振搖,放置 1 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇 0.5 mL溶解,作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品適量,加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作為對照品溶液。取去芍藥的樣品,同供試品溶液的制備方法,制成陰性對照液。吸取上述供試品溶液與陰性溶液各 4 μ L,對照品溶液1 μ L,分別點于同一硅膠G 薄層板上,以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%的香草醛硫酸溶液。結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。陰性對照液則無斑點顯示。結(jié)果見圖4。

圖4 白芍的TLC鑒別

2.5 陳皮的鑒別 取本品內(nèi)容物2 g,加乙醇5 mL,時時振搖,放置1 h,濾過,濾液作為供試品溶液。取陳皮苷對照品適量,加甲醇制成飽和溶液,作為對照品溶液。另取去陳皮的樣品,同供試品溶液的制備方法,制成陰性對照液。吸取上述溶液各2μ L,分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯—甲醇—水(100∶17∶13)為展開劑,展至約3 cm,取出,晾干,再以甲苯—乙酸乙酯—甲酸—水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑,展至約8 cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照液則無斑點顯示。結(jié)果見圖5。

圖5 陳皮的TLC鑒別

2.6 黃芩苷含量測定

2.6.1 對照品的制備 精密稱取黃芩苷對照品適量,置棕色瓶中,加70%的甲醇使溶解,搖勻,制成每1 mL含 78μg的黃芩苷對照品溶液,即得。

2.6.2 供試品溶液的制備 取本品10粒,頃出內(nèi)容物,研細(xì),精密稱定約0.2 g,置100 mL容量瓶中,加70%乙醇溶液50 mL,稱定重量,超聲提取(功率250 w,頻率50 Hz)30 min,冷卻,加70%乙醇至刻度,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.6.3 色譜條件 色譜柱:大連依利特Hypersil ODS-BP(150 mm×4.6 mm,5 μ m);流動相:甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2);流速:1 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:278 nm;理論塔板數(shù)按黃芩苷計算應(yīng)不低于3000。

2.6.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液5,7,10,12,15 μ L,按上述色譜條件進(jìn)樣測定,測得峰面積為1350999、1869232、2683631、3200158、3984690,以峰面積積分值 Y 為縱坐標(biāo),對照品量X(μ g)為橫坐標(biāo),作線性回歸,得回歸方程:

2.6.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μ L,連續(xù)進(jìn)樣5次,按上述色譜條件測定,黃芩苷峰面積積分值的平均值為2683149,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=0.20%。

2.6.6 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品(091020)6份,分別按樣品測定方法測定。結(jié)果:黃芩苷平均含量為4.4mg/粒,RSD=0.19%.

2.6.7 空白試驗 取缺黃芩的陰性對照溶液,按供試品溶液制備方法制備,進(jìn)樣,測定,圖譜表明陰性對照無干擾。見圖6。

2.6.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液,分明于0、1.2、4、6、8 h進(jìn)樣 1次(10 μ L),共進(jìn)樣 6次,按上述色譜條件分別測定,峰面積積分值 RSD=0.35%,表明供試品溶液在 8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6.9 加樣回收率試驗 取已知含量的供試品(批號:091020)6份,精密加入一定量黃芩苷對照品,按供試品溶液制備方法制備,依法測定,計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.6.10 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μ L,注入液相色譜儀,測定,以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果見表 2,色譜圖見圖6。

圖6 百合健脾潤肺膠囊H PLC色譜圖

表2 樣品的含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

黃芩苷的含量測定試驗參考文獻(xiàn)[1]黃芩項下黃芩苷的含量測定方法,采用流動相甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2),流動相乙腈-0.2%磷酸(28∶72),結(jié)果黃芩苷采用流動相甲醇-水—磷酸(47∶53∶0.2)可以基線分離不受其他組分干擾,分離效果好,準(zhǔn)確度高。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:北京化學(xué)工業(yè)出版社,2005:58～539.