耐除草劑玉米G1105E-823C定性檢測方法

溫洪濤,楊洋,丁一佳,苑冉,張秀杰,張瑞英*

1.黑龍江省農業科學院農產品質量安全研究所， 哈爾濱 150086； 2.農業農村部科技發展中心， 北京 100122

玉米作為單位面積產量最高的糧食作物[1]，盡管近年來播種面積不再大幅增加，但仍是我國播種面積最大的作物。根據國際農業生物技術應用服務組織(International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications，ISAAA)統計，2018年全球轉基因作物種植面積已達1.917億hm2，其中轉基因玉米的種植面積約占30%[2]。我國許多企業和科研機構也正在研發新型轉基因玉米，隨著轉基因玉米新品系的不斷增多[3-4]，為保障對轉基因玉米的有效監管，亟需研發針對轉化體的檢測方法[5]。

轉基因耐除草劑玉米G1105E-823C是由北京奧瑞金種業股份有限公司研發的新型耐除草劑玉米，2012年該公司申請了發明專利[6]。研發單位采用農桿菌轉化法，在保證氨基酸序列不變的前提下對G2-aroA基因進行人工優化改造，將改造過的耐草甘膦mG2-aroA基因轉入目標受體，經過多代篩選獲得對草甘膦除草劑具有抗性的轉基因玉米G1105E-823C轉化體，與轉入原始G2-aroA基因的品種相比，G1105E-823C玉米中G2-aroA蛋白的表達量明顯提高，并且對草甘膦的耐受性也顯著提高[6]。目前G1105E-823C玉米已完成生產性試驗，正在申請安全證書，在我國具有重要的產業化應用前景，但我國當前尚未發布專門針對耐除草劑玉米G1105E-823C及其衍生品種的轉化體特異性檢測方法。基于此，本研究以耐除草劑玉米G1105E-823C的植物基因組與外源插入片段的連接區序列為靶標，對其分別進行普通PCR和實時熒光PCR，并優化相應的反應體系和反應條件，以期建立起精準高效的耐除草劑玉米G1105E-823C的轉化體特異性定性檢測方法，為我國的轉基因安全監管提供相關技術支持。……