玉米基因組提取方法的比較研究

承佳佳，王 琪，魏曉通，徐亞維

（吉林農(nóng)業(yè)科技學院 生物與制藥工程學院，吉林 吉林 132101）

高純度DNA的取得是植物分子生物學研究中的關鍵，因此，探索快速、經(jīng)濟有效的DNA提取方法尤為重要[1]。本研究以玉米為材料，通過比較改良十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrimethylammonium Ammonium Bromide，CTAB）法、十二烷基苯磺酸鈉（Sodium dodecyl sulfate，SDS）法、N-月桂酰胺法及植物基因組DNA快速提取試劑盒四種方法，探索最佳提取方法，為玉米的分子研究提供有效手段。

1 材料

1.1 試驗材料

玉米種子，購自大潤發(fā)超市。

1.2 主要試劑

Dzup（植物）基因組DNA快速抽提試劑盒購于上海生工生物有限公司；DL15000 DNA Marker 購于寶生物大連生物工程公司；其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 改良CTAB法

0.2g玉米葉研至粉狀，加入改良CTAB提取液（50 mmol/L EDTA、1 mol/L NaCl、2.5 g/100 ml CTAB、0.1 g/100 ml NSL、1 ml/100 ml β-巰基乙醇）800 μl，65℃水浴30 min；4 ℃，12000 rpm離心15min，取酚：氯仿：異戊醇700 μl與上清混合，4℃離心5 min。加入冷異丙醇1 ml，4 ℃靜置30 min。12000 rpm離心5 min，70 μl TE與1 μl RNase溶解沉淀[2]。

2.2 SDS法

0.2 g玉米葉研磨后加入SDS提取液（10 mmol/L Tris-HCl，pH值為8.0；25 mmol/L EDTA，pH值為8.0；100 mmol/L NaCl；0.5% SDS）800 μl，56℃水浴20 min。12000 rpm離心，上清加酚：氯仿：異戊醇700 μl，4℃靜置20 min后12000 rpm離心，上清加1 ml冷異丙醇，4℃靜置30min。12000 rpm離心10 min，70 μl TE溶解[1]。

2.3 Dzup（植物）DNA抽提試劑盒

0.2 g玉米葉研至粉狀，加入0.4 ml裂解液1，65 ℃裂解30 min，加130 μl裂解液2，4℃放置8 ～10 min，15000 rpm離心10 min。取500 μl上清液加入1.5 ml裂解液AP3/E混勻后移至吸附柱中，離心60sec。加600 μl漂洗液，離心1 min。13000 rpm空離心2 min，50μl EB溶解[1]。

2.4 N-月桂酰肌氨酸鈉法

0.2 g玉米葉研至粉狀，加600 μl緩沖液（500 ml含N-月桂酰肌氨酸鈉5 g，氯化鈉2.925 g，1 mol/L

Tris-HCl；0.5 mol/L的EDTA 20 ml；pH8.0），裂解5 min，上清加氯仿：異戊醇600 μl，離心10 min，上清加500μl冷異丙醇，4℃靜置30 min后離心5 min，70 μl TE溶解沉淀[2]。取四種方法提取的DNA進行紫外和電泳鑒定。

3 結果分析

3.1 紫外鑒定

理想DNA其A260/A280的比值在1.80和1.90間，但改良CTAB法提的DNA濃度最高，為471.38 ng/ml，SDS法最低，從經(jīng)濟和簡單的角度來講，改良CTAB法效果最佳。

3.2 凝膠電泳鑒定

四種方法均獲得了一定量純DNA，其中SDS法條帶亮度最淺，說明提取效果差；第2泳道雖然相對于第1和第3泳道，提取效果差不多，但試劑盒法價格高，因此，改良CTAB法條帶最度且無雜帶，提取效果最佳。

4 結論

本研究對傳統(tǒng)方法進行了改良，結果表明改良CTAB法提取的基因組純度和濃度都較高，證明此法對植物中小分子雜質、多糖、酚類等雜志的去除效果較好[2]。盡管植物提取試劑盒和N-月桂酰肌氨酸鈉法也能獲得高質量的基因組，但由于試劑盒造價高，N-月桂酰肌氨酸鈉試劑不常用，因此，作為次選。