殺菌劑對浙貝母灰霉病菌室內毒力的測定

阮若昕，羅秀俊，王明爽，王慧中

(1.杭州市農業科學研究院，浙江 杭州 310024； 2.杭州師范大學 浙江省藥用植物種質改良與質量控制技術重點實驗室，浙江 杭州 311121)

浙貝母(FritillariathunbergiiMiq.)是浙江傳統中藥材“浙八味”之一，以地下鱗莖入藥，有清熱散結、化痰止咳等功效。浙江是全國浙貝母主要種植地區，種植面積約過0.3萬hm2，年產量約0.5萬t。浙貝母是浙江省磐安、東陽和鄞州等地區農民增收致富的主要產業之一[1]。由灰葡萄孢菌(BotrytiscinereaPers.)引起的灰霉病是浙貝母生產中主要病害之一，如不及時防治，會造成超過80%的植株發病，不僅會造成產量的損失而且會影響浙貝母的藥效品質，進而導致商品性和銷售價格下降，嚴重影響浙貝母產業的發展[2]。單一化學農藥長期反復施用不僅會增加生產成本，而且會造成產品農藥殘留超標，嚴重影響浙貝母的藥用安全性。為了篩選出能有效防治浙貝母灰霉病的殺菌劑，選擇了6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌進行室內毒力的測定，以期為田間防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥劑共6種：25 g·L-1咯菌腈懸浮種衣劑(瑞士先正達作物保護有限公司)，25%吡唑醚菌酯懸浮劑(江蘇東臺東南化工有限公司)，40%嘧霉胺懸浮劑(廣東中迅龍科股份有限公司)，75%百菌清可濕性粉劑(威海韓孚生化藥業有限公司)，10%苯醚甲環唑水分散粒劑(廣東中迅農科股份有限公司)，40%百可得可濕性粉劑(日本曹達株式會社)。

供試浙貝母灰霉病菌菌株來源于浙江省磐安縣的浙貝母帶病花器，用組織分離法[3]進行分離純化，獲得菌株PAG3-1。經形態學和分子生物學鑒定，確定菌株PAG3-1為灰葡萄孢菌(B.cinerea)，菌株保存于4 ℃備用。

1.2 毒力測定

采用菌絲生長速率法在室內測定6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌株PAG3-1的毒力，用無菌水將供試藥劑稀釋成5個梯度濃度后配制含藥PDA平板。各藥劑的濃度分別為：咯菌腈0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 μg·mL-1；吡唑醚菌酯100、50、25、12.5、6.25 μg·mL-1；嘧霉胺20、10、5、2.5、1.25 μg·mL-1；百菌清8、4、2、1、0.5 μg·mL-1；苯醚甲環唑10、5、2.5、1.25、0.625 μg·mL-1；百可得10、5、2.5、1.25、0.625 μg·mL-1。以加入無菌水的培養基作為對照。重復3次。用打孔器打取5 mm的菌餅，接種于含有不同濃度殺菌劑的PDA平板中央。25 ℃培養5 d，十字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。

1.3 數據處理

用SPSS Statistics 20軟件進行計算分析，計算出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關系數。根據EC50值評價殺菌劑毒力大小。

2 結果與分析

通過室內毒力測定，獲得了6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌菌絲生長的EC50值和毒力回歸方程(表1)。經EC50值比較，殺菌劑毒力從大到小依次為咯菌腈>百菌清>苯醚甲環唑>百可得>嘧霉胺>吡唑醚菌酯?？┚鎸φ阖惸富颐共【z生長的抑制作用最強，EC50值為0.05 μg·mL-1；百菌清也有較好的抑菌效果，EC50值為1.51 μg·mL-1；苯醚甲環唑和百可得的抑制作用較弱，EC50值分別為3.15和4.56 μg·mL-1；嘧霉胺和吡唑醚菌酯的抑制作用最弱，EC50值分別為10.06和30.33 μg·mL-1。

表1 6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌的室內毒力測定結果

3 小結與討論

室內毒力測定結果表明，6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌的菌絲生長有不同程度的抑制作用，其中25 g·L-1咯菌腈懸浮種衣劑對浙貝母灰霉病菌絲生長的抑制作用最佳?？┚媸且环N新型的非內吸性苯基吡咯類殺菌劑，屬假單胞細菌產生的抗生素硝吡咯的衍生物。據近期報道，長三角地區果蔬灰霉病病菌對咯菌腈仍然敏感[4]。

灰霉病菌寄主范圍廣，培育抗病新品種難度大，目前主要還是以化學防治措施為主。但同一化學藥劑的連續使用易導致灰霉病菌產生抗藥性的問題。在其他作物上，灰霉病菌已對苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、N-苯氨基甲酸酯類和苯胺基嘧啶類等殺菌劑產生了不同程度的抗性[5-6]。針對浙貝母灰霉病，除了強調預防為主的田間措施，篩選新的不同類型的殺菌劑作為替代品或者進行輪換使用，也是提高防治效果的一種重要手段。田間試驗表明，異菌脲(二甲酰亞胺類)、氟菌·肟菌酯(甲氧基丙烯酸酯類)和唑醚·氟酰胺(芳酰胺類)對防治浙貝母灰霉病均有一定效果[7]。通過室內毒力測定，咯菌腈對浙貝母灰霉病菌有顯著的抑制效果，可以開展進一步田間防效試驗，以確定咯菌腈在環境條件更復雜的大田的應用效果。