川椒炮制前后生物堿含量的變化

王 孟 石 鈺 董林娟

（陜西服裝工程學院 健康學院，陜西 咸陽712046）

花椒為蕓香科植物青椒或花椒的干燥成熟果皮[1]。花椒產地遍及全國，山西、陜西、甘肅、河北、河南、青海等地，其道地藥材產地位于四川省漢源、茂縣?；ń芬砸吧鸀橹鳎斯ぴ耘嗥贩N有紅花椒和青花椒，不同產地品種花椒品質，色澤，香氣差異較大。道地產地漢源一帶的川椒品質最佳，顆粒略小而圓、色澤鮮艷、香味濃郁。川椒抗旱，適合生長在高溫、土壤貧瘠的地區，因此漢源一帶山區是川椒的適宜生長地。川椒生溫、有毒，外紫里白、氣味辛烈，濃厚。具有溫中止痛，祛濕止瀉，殺蟲止癢的功效。對于蛔蟲病、腳氣、皮膚瘙癢等疾病治療效果顯著。川椒具有很大的研究價值。通過一定的炮制方法，可以降低其毒副作用，增加療效，或產生新的治療作用[2]。通過查閱文獻和古書籍，發現花椒有清炒、醋制、鹽制、酒制等不同的炮制方法[3-4]。

川椒的主要有效成分為揮發油，川椒相對于一般花椒，香味更濃郁，其特殊的香味主要來源于揮發油，果皮中揮發油含量較高，川椒籽與川椒葉都是可利用的資源。川椒揮發油具有祛濕抗炎、抗菌、局麻止痛等藥理作用[6]，主要治療濕疹引起的皮膚瘙癢，另外還有蟲積腹痛、殺菌消炎等疾病。除了揮發油，還有生物堿、酞胺，以及木脂素等化學成分[5]。川椒中的生物堿成分主要是白屈菜紅堿，是川椒中的另一主要活性成分[7]，具有鎮痛、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用[8]，治療疥瘡、腹痛、胃寒冷痛等疾病，可見川椒中的生物堿具有較好的開發前景。本文通過對川椒炮制前后生物堿含量變化的研究，為花椒炮制前后生物堿成分的差異提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

表1 儀器設備

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1.2 試藥

表2 試藥

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2 方法

2.1 花椒的炮制

2.1.1 清炒法。取川椒放入炒鍋內，用小火炒，直到出汗，滲油，呈現油亮光澤，顏色加深，有香氣逸出時，取出晾干晾涼，保存于干燥容器。

2.1.2 酒制法。取川椒置于盆中，加適量黃酒攪拌均勻，悶潤30min 后用紗布包裹蒸2h，放冷無氣后取出，在無風的條件下晾干，即得花椒酒制品。

2.1.3 鹽制法。取川椒置于盆內，置于炒鍋內，用煤氣灶小火加熱，炒到有響聲時，再噴淋鹽水，繼續炒直至炒干，然后倒入盤內放涼，再裝自封袋備用?；ń放c食鹽比例為1：0.02。

2.1.4 醋制法。取川椒置炒鍋內，使用燃氣灶文火炒，加熱后噴淋醋液，炒至醋干，取出并悶放，使其發汗，再曬干，裝自封袋備用?；ń放c食鹽比例為1：0.12。

2.2 酸提堿沉法提取總生物堿

取川花椒果皮500g，50℃低溫干燥后粉碎成粗粉，加入95%乙醇，用稀鹽酸調節PH（PH=3），60℃超聲提取45min，提取3 次，濾過后合并濾液，減壓抽濾，去掉濾渣，在濾液中加氨水調節PH 至中性，所得溶液為總生物堿提取液。

2.3 花椒中總生物含量的測定

2.3.1 光譜條件。采用紫外分光光度計進行檢測，標準品為白屈菜紅堿波長：425nm。

2.3.2 標準溶液的配制。精密稱取5mg 白屈菜紅堿對照品放置于25ml 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻線，搖勻，白屈菜紅堿對照品的儲備液制備成。

2.3.3 樣品溶液的配制。吸取“2.2”項下的待測樣品1ml 于試管中，加入2ml 溴甲酚綠緩沖液和lOml 氯仿，振搖2min 充分反應后，轉移至分液漏斗中靜置1h，待其完全分層，取氯仿層置于錐形瓶中，加少量無水Na2SO4，充分振搖1 min，待氯仿層澄清后，在425nm 處測定其吸光度值。

2.3.4 標準曲線的繪制。吸取白屈菜紅堿標準品溶液，在425nm 處測定吸光度，繪制濃度- 吸光度曲線圖。以濃度C 對吸光度A 進行線性回歸，得回歸方程為C=1.01A+0.114，相關系數R2=0.9993。線性范圍為0.2～0.6mg/mL，結果見表3 及圖1。

表3 不同濃度白屈菜紅堿對照品吸光度值

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圖1 白屈菜紅堿對照品標準曲線圖

2.3.5 精密度實驗。配制低、中、高三個濃度的白屈菜紅堿對照品，采用紫外分光法，設定檢測波長值為425nm，測定三種不同濃度溶液的吸光度A 值，代入上述線性回歸方程計算濃度值。三種濃度樣品每天測定3 次，計算相對標準偏差RSD，作為日內變異；連續測定3 天，計算相對標準偏差RSD，作為日間變異，結果發現日內和日間相對標準偏差均低于2%，符合方法學要求。

2.3.6 重復性實驗。精密稱取白屈菜紅堿適量, 按照上述紫外分光法測定其含量。制備不同濃度供試品溶液三份，1 天內分別測5 次樣品；每天各測1 次，連續測5 天。結果顯示阿卡波糖原料藥RSD 均值為0.39%，可見建立的方法具有良好的重復性。

2.3.7 穩定性實驗。配制濃度為0.2mg/mL 的白屈菜紅堿標準溶液，于室溫下放置24h，分別在0，2，4，6，8，10，12 和24h 測定其吸光度，考察標準品溶液穩定性，通過數據分析，可見RSD=0.88%，小于2%，表明白屈菜紅堿對照品溶液在24h 內穩定性符合要求。

2.4 川椒生品與炮制品生物堿含量的測定

根據“2.2”項下方法提取川椒中的生物堿，采用UV 法測定川椒生品及炮制品中生物堿的吸光度。川椒中總生物堿主要活性成分為白屈菜紅堿，白屈菜紅堿在乙醇中溶解度高，且具有抗菌、抑菌、驅蟲的等藥理活性[9]。以白屈菜紅堿為標志物，測定生物堿的含量。根據“2.3”項下方法測定吸光度值，將吸光度A值帶入上述線性回歸方程中，計算各樣品的白屈菜紅堿的含量及白屈菜紅堿得率（%）。

表4 川椒不同炮制品中白屈菜紅堿的含量

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根據以上數據發現川椒生品與其他炮制品中白屈菜紅堿的含量變化，酒制品中白屈菜紅堿的含量最高，其次是清炒品和醋制品，鹽制品和生品中白屈菜紅堿的含量較低，生品中白屈菜紅堿的含量低于鹽制品，說明炮制品中生物堿的含量變化與炮制所用輔料關系密切，由于白屈菜紅堿易溶于乙醇中，因此酒制法能夠增加白屈菜紅堿的溶出，而鹽制法使川椒細胞縮水，不利于白屈菜紅堿的溶解與溶出，反而降低了其含量。

3 討論

花椒炮制前后生物堿含量變化明顯，表明炮制方法以及輔料的選擇，對于川椒中生物堿的溶出度有較大的影響。酒制法、醋制法、鹽制法以及清炒法這幾種炮制方法，在其炮制過程中，由于炮制方法和輔料的不同，使川椒的生物堿含量發生了改變。其中酒制法中，加入黃酒以及炒制加熱的原因，增加了白屈菜紅堿的溶出，這是由于白屈菜紅堿在乙醇能夠完成溶解。鹽制品的生物堿含量降低，這與鹽抑制生物堿的溶出關系密切。清炒品因加熱促進了有效成分溶出，其含量略高于而醋制品，而醋的加入降低藥物pH 值，反而阻礙了白屈菜紅堿的溶出。