不同產(chǎn)地當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾阿魏酸含量比較研究

巢蕾 曹雨誕 嚴(yán)輝 陳佩東

[摘要] 目的 比較不同產(chǎn)地的當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾中阿魏酸的含量。 方法 應(yīng)用高效液相色譜法測定阿魏酸含量。以Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，應(yīng)用乙腈和0.085%磷酸（17∶83）洗脫，檢測波長為316 nm，流速設(shè)定為1.0 mL/min，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20 μL。 結(jié)果 阿魏酸在19.52～31.20 μg/mL（r = 0.9999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，阿魏酸的平均回收率為99.70%，RSD為2.40%。 結(jié)論 建立的含量測定方法簡便，重現(xiàn)性好，云南鶴慶縣樣品比其他產(chǎn)地樣品含量高，當(dāng)歸尾中阿魏酸含量高于當(dāng)歸身。

[關(guān)鍵詞] 當(dāng)歸身;當(dāng)歸尾;含量;阿魏酸

[中圖分類號] R284.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2020）09（c）-0120-03

A comparative study of ferulic acid content in taproot and rootlet of Radix Angelicae Sinensis from different regions

CHAO Lei1? ?CAO Yudan2? ?YAN Hui2? ?CHEN Peidong2

1.Department of Pharmacy， Jiangsu Province Hospital of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing? ?210029， China; 2.College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing? ?210046， China

[Abstract] Objective To compare the content of ferulic acid in taproot and rootlet of Radix Angelicae Sinensis from different regions. Methods The content of ferulic acid was measured by high performance liquid chromatography. Kromasil C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） was used in this study. The mobile phase was acetonitrile and 0.085% phosphoric acid （17∶83）， the detection wavelength was set at 316 nm， the flow rate was set at 1.0 mL/min， the column temperature was 35℃， and the sample size was 20 μL. Results The ferulic acid showed a good linear relationship in the range of 19.52-31.20 μg/mL （r = 0.9999）， and the average recovery was 99.70%， RSD was 2.40%. Conclusion The method is simple and reproducible. The content of ferulic acid sample from Heqing County of Yunnan Province is higher than those in other regions， and the content in the rootlet of Radix Angelicae Sinensis is higher than that in taproot of the plant.

[Key words] Taproot of Radix Angelicae Sinensis; Rrootlet of Radix Angelicae Sinensis; Content; Ferulic acid

當(dāng)歸為傘形科植物Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。當(dāng)歸藥性甘、辛、溫，具有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、活血止痛的功效，主治月經(jīng)不調(diào)等血虛諸癥[1-3]。當(dāng)歸是重要的藥物，中醫(yī)有“歸字頭，草字尾”之說，稱當(dāng)歸為藥王，歸肝、心、脾及胃經(jīng)[4]。現(xiàn)代研究表明，當(dāng)歸及其藥對或復(fù)方具有緩解免疫抑制劑所致的骨髓抑制[5]、抗缺氧、保護(hù)缺血腦細(xì)胞、促進(jìn)缺血區(qū)神經(jīng)功能恢復(fù)、降低缺血性腦損傷[6]的作用，對血虛及原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠體征及相關(guān)指標(biāo)均有較顯著的改善作用[7]。通過抑制核因子p65、磷脂酰肌醇激酶-3催化亞單位α和絲裂原活化蛋白激酶等環(huán)節(jié)起到平喘等作用[8]。當(dāng)歸的主要化學(xué)成分為有機(jī)酸、香豆素、揮發(fā)油及多糖類[9-11]。歷代醫(yī)家將當(dāng)歸分為當(dāng)歸頭、當(dāng)歸身、當(dāng)歸尾、全當(dāng)歸等不同部位入藥[12]。有研究表明，在當(dāng)歸的不同部位中，阿魏酸含量存在差異[13]。為進(jìn)一步研究當(dāng)歸不同藥用部位中化學(xué)成分的差異，筆者對不同產(chǎn)地的當(dāng)歸身及當(dāng)歸尾中阿魏酸的含量進(jìn)行了測定，以期為中醫(yī)臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國Waters公司2695高效液相色譜儀;上海精密科學(xué)儀器有限公司FA1104N型電子分析天平（萬分之一）;Kromasil C18色譜柱，規(guī)格：250 mm×4.6 mm，5 μm。

1.2 試藥

當(dāng)歸采購自甘肅岷縣十里鄉(xiāng)十三里鋪（161001）、西寨鎮(zhèn)雪地河村（170724）、甘肅定西渭源縣祁家廟鎮(zhèn)（151126）和云南省鶴慶縣東甸村（181102）。經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)嚴(yán)輝副教授鑒定，測試用飲片為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels。阿魏酸對照品購自成都曼斯特生物科技有限公司（批號：MUST-15082904、MUST-15091605）。流動相乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

當(dāng)歸干燥后，搶水洗凈，潤軟，切薄片或段，低溫干燥。分揀當(dāng)歸的主干為當(dāng)歸身，枝干為當(dāng)歸尾。當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾分別進(jìn)行粉碎，過3號篩。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品及對照品溶液制備方法

精密稱取阿魏酸對照品適量，置于棕色量瓶中，用70%甲醇溶液制成12 μg/mL的溶液，即得對照品溶液。取本品粉末約0.2 g，過3號篩，精密稱定后置于具塞錐形瓶中，精密加入70%的甲醇20 mL，密塞后稱定重量。回流加熱30 min，放冷后再稱定重量，以70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，靜置后取上清液，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2 當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾中阿魏酸的含量測定

2.2.1 色譜條件? 采用Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為等度乙腈和0.085%磷酸（17∶83），檢測波長為316 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20 μL。

2.2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)? 分別吸取供試品及對照品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，供試品溶液色譜峰中，與對照品溶液色譜峰相同位置出峰，理論板數(shù)以阿魏酸峰計(jì)算不低于3000，且分離度較好，表明沒有其他組分的干擾。見圖1。

2.2.3 線性關(guān)系考察? 精密稱取阿魏酸1.56 mg置于10 mL量瓶中，加入70%甲醇溶液定容，制備成濃度為0.156 mg/mL的母液。分別從母液中精密吸取一定量的阿魏酸溶液稀釋成系列濃度。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，每次10 μL，以峰面積為橫坐標(biāo)X，以阿魏酸溶液的濃度為縱坐標(biāo)Y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：Y = 46 795 805.07X-10 354.08，r = 0.9999。結(jié)果顯示阿魏酸在0.001 95～0.031 20 mg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，阿魏酸檢測限為0.074 μg/mL，定量限為0.223 μg/mL。

2.2.4 精密度試驗(yàn)? 取同一供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)測定6次，分別計(jì)算阿魏酸色譜峰面積，結(jié)果RSD為0.98%，提示色譜儀精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)? 取同一批樣品，按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備供試品溶液。進(jìn)樣，測定6次并計(jì)算阿魏酸的峰面積。阿魏酸的含量均值為0.075%，RSD為2.61%，提示此方法重復(fù)性好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 在室溫條件下，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、6、12、24 h時測定樣品進(jìn)樣。計(jì)算阿魏酸峰面積，結(jié)果顯示RSD為0.57%，提示阿魏酸在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn)? 精密稱取6份已知含量的同一批次當(dāng)歸樣品0.1 g，按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，分別加入對照品溶液，平行制成6份供試品溶液。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定回收率，測定結(jié)果見表1。

2.2.8 樣品含量測定? 精密稱取各樣品，按上述供試品溶液制備方法制備，然后按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，對當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾飲片中阿魏酸含量進(jìn)行測定，每批平行測定2次，測定結(jié)果見表2。

3 討論

目前，在當(dāng)歸在臨床應(yīng)用中，有當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、土當(dāng)歸及當(dāng)歸炭等飲片，用于治療各種疾病[14-15]。研究表明，當(dāng)歸身偏于補(bǔ)血，而當(dāng)歸尾偏于活血。在有些省份的中藥飲片炮制規(guī)范中，當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾作為不同的飲片應(yīng)用于臨床[16-17]?，F(xiàn)代研究表明，在當(dāng)歸飲片中，當(dāng)歸身與當(dāng)歸尾所含的化學(xué)成分有較大差異，從而導(dǎo)致當(dāng)歸飲片不同部位藥效的差異[18-19]。研究表明，與當(dāng)歸身相比，當(dāng)歸尾中揮發(fā)油類成分含量較高[20]。當(dāng)歸通常生長于海拔1800～2500 m的高寒陰濕環(huán)境，主產(chǎn)地為甘肅、寧夏、云南、四川等地，尤以甘肅所產(chǎn)當(dāng)歸藥材性狀為佳[21]。由于市場對當(dāng)歸的需求增多，除甘肅省以外，湖北、青海以及云南省的當(dāng)歸藥材種植面積也在不斷擴(kuò)大。通過對全國各產(chǎn)區(qū)樣品的指紋圖譜及聚類分析發(fā)現(xiàn)，岷縣當(dāng)歸藥材穩(wěn)定性較好，具有較高的一致性[22]。對采集于多地當(dāng)歸藥材進(jìn)行含量分析的結(jié)果表明，云南省所產(chǎn)當(dāng)歸藥材中阿魏酸含量較高[23]。當(dāng)歸飲片中所含有的化學(xué)成分除阿魏酸外，還有洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯I、藁本內(nèi)酯等[24]。對當(dāng)歸身、當(dāng)歸尾飲片的質(zhì)量評價，還需對更多化學(xué)成分及藥理活性作進(jìn)一步研究。通過對當(dāng)歸中9種化學(xué)成分的分析表明，岷縣麻子川鄉(xiāng)的當(dāng)歸藥材質(zhì)量優(yōu)于其他產(chǎn)地的藥材[25]。本研究結(jié)果顯示，各產(chǎn)地的當(dāng)歸尾和當(dāng)歸身飲片中，當(dāng)歸尾的阿魏酸含量較高;各產(chǎn)地飲片中，云南省鶴慶縣的當(dāng)歸飲片阿魏酸含量最高，而甘肅省岷縣所采集當(dāng)歸樣品中阿魏酸含量也存在差異。本研究結(jié)果為臨床當(dāng)歸身及當(dāng)歸尾飲片的合理應(yīng)用，以及不同產(chǎn)地的當(dāng)歸飲片質(zhì)量控制，提供了科學(xué)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 何春慧.《中國藥典》2015年版一部收載含當(dāng)歸及其炮制品成方制劑的歸類分析[J].中南藥學(xué)，2019，17（12）：2200-2204.

[2]? 陳二林，李喜香，伍珊娜，等.基于活血生物效價的當(dāng)歸質(zhì)量評價研究中藥材[J].中藥材，2019，42（4）：818-821.

[3]? 蔣亞麗，王輝.當(dāng)歸藥性與功用考證[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2019，25（11）：72-77.

[4]? 李亞南，許二平.當(dāng)歸入胃經(jīng)探討[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2017，23（6）：866-867.

[5]? 姚重華，蘇曉，曲環(huán)汝，等.當(dāng)歸補(bǔ)血湯及其拆方對骨髓抑制模型小鼠Wnt蛋白及其受體的影響[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，41（3）：1-5.

[6]? 吳波，黃盛璟，邢婧，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的復(fù)方當(dāng)歸注射液治療缺血性腦損傷作用機(jī)制分析[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2019，39（23）：2384-2390.

[7]? 朱敏，周閣，劉順，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的當(dāng)歸-白芍藥對作用機(jī)制研究[J].中國藥師，2019，22（12）：2163-2167.

[8]? 姚楠，丁茂鵬，王志旺，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究當(dāng)歸平喘的分子機(jī)制[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2019，35（24）：3250-3253.

[9]? 羅錚，鄧雯，張前亮，等.當(dāng)歸破壁粉制備工藝優(yōu)化及物理指紋圖譜評價研究[J].中草藥，2019，50（24）：5980-5987.

[10]? 文印憲，秦俊，譚揚(yáng)，等.當(dāng)歸多糖組分APS？3c軟骨保護(hù)作用的體外研究[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，40（1）：1-5.

[11]? 雷曉晴，王秀麗，李耿，等.近紅外光譜法快速測定當(dāng)歸中7種成分的含量[J].中草藥，2019，50（16）：3947-3954.

[12]? 吳國霞，楊秀娟，鄧毅，等.當(dāng)歸不同藥用部位水煎液指紋圖譜及成分分析[J].中成藥，2018，40（4）：890-894.

[13]? 秦書芝，袁如文，張瑤，等.當(dāng)歸不同部位中阿魏酸含量的測定[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，20（3）：74-75.

[14]? 焦紅紅，陳杰，白德濤，等.當(dāng)歸藥材及飲片質(zhì)量的影響因素研究[J].西部中醫(yī)藥，2019，32（10）：147-150.

[15]? 張玲.中藥當(dāng)歸經(jīng)不同炮制方法炮制后對其化學(xué)成分的影響分析[J].中國處方藥，2019，17（11）：18-19.

[16]? 吳國霞，鄧毅.當(dāng)歸及其不同入藥部位補(bǔ)血活血相關(guān)作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)研究，2016，20（9）：73-77.

[17]? 浙江省食品藥品監(jiān)督管理局.浙江省中藥炮制規(guī)范[M].北京：中國中醫(yī)藥科技出版社，2015.

[18]? 楊杰，萬斌，姚維一，等.基于UPLC-MS非靶向代謝組技術(shù)研究當(dāng)歸頭與尾功效差異的生物學(xué)途徑[J].華西藥學(xué)雜志，2019，34（6）：617-622.

[19]? 李靜，魏玉海，秦雪梅，等.基于NMR代謝組學(xué)技術(shù)的當(dāng)歸不同部位化學(xué)成分比較[J].中草藥，2017，48（7）：1409-1415.

[20]? 唐文文，李國琴，晉小軍.當(dāng)歸不同藥用部位有效成分研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（12）：58-60.

[21]? 陳方，向陽，朱立彬，等.當(dāng)歸藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究[J].中國藥師，2018，21（10）：1861-1864.

[22]? 胡傳芹，徐嘉良.不同產(chǎn)地當(dāng)歸指紋圖譜及聚類分析[J].中國食品學(xué)報(bào)，2017，17（12）：272-278.

[23]? 謝田朋，柳娜，王雅莉，等.不同產(chǎn)地當(dāng)歸品質(zhì)的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2020，48（1）：72-75.

[24]? 陳健，張?jiān)?，王洪蘭.當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)湯劑HPLC指紋圖譜及多指標(biāo)成分定量研究[J].中草藥，2019，50（20）：4942-4949.

[25]? 楊蕊菁，趙磊，夏鵬飛，等.不同產(chǎn)地當(dāng)歸藥材9種成分的含量測定及主成分分析[J].中藥新藥與臨床藥理，2020， 31（4）：473-477.

（收稿日期：2020-03-26）