全自動陰道分泌物檢測工作站性能驗證方案的建立及應用

趙運轉，趙 暉，宋 蓓，劉 揚，張國軍

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心，北京 100070)

保證檢驗結果的質量是實驗室的立命之本。按照《醫療機構臨床實驗室管理辦法》[1]和ISO15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》[2]規定，在開展新的檢測項目，更換檢測系統或改變試劑盒廠商時，實驗室需要對其相關方法學分析性能予以驗證。因此，本實驗室需要對新引進的HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站進行性能驗證，以確保其各項指標滿足廠家聲明的分析性能或國際公認的質量目標后再用于常規檢測，滿足臨床需求，但目前國內少見該類檢測系統性能驗證的相關文獻，也沒有規范化文件可供參考。本實驗室根據CNAS-CL02-A02：2018《醫學實驗室質量和能力認可準則在體液學檢驗領域的應用說明》[3]要求、中華人民共和國醫藥行業標準(YY/T-0996-2015)尿液有形成分分析儀(數字成像自動識別)[4]、國家干化學尿液分析儀行業標準YY/T 0475-2011[5]、定性測定評價指南中華人民共和國衛生行業標準：WS/T-505-2017[6],參考本中心全自動尿液干化學分析儀流水線性能驗證方案及關于全自動尿液分析儀或其他全自動分析儀性能驗證相關文獻[7-11]，結合儀器特性及實際情況從形態學和酶學2個方面進行驗證，建立了一套全面、簡便、實用的性能驗證方案，希望能為其他實驗室對此類儀器的性能驗證提供參考。

1 材料與方法

1.1標本來源 陰道分泌物標本來自臨床用于陰道分泌物檢測的標本，包括陰性和陽性標本。

1.2儀器與試劑 儀器為青島華晶生物技術有限公司生產的HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站，試劑為儀器配套試劑及陰性和陽性質控品，所有試劑均在有效期內，且未受污染。采用日本Olympus CH 型光學顯微鏡對分泌物進行觀察。

1.3方法 本研究參照人工鏡檢相關標準[3-6]和文獻[7-11]，結合實際情況，對HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站的鏡檢識別率、假陰性率、重復性、攜帶污染率、干化學檢出限、干化學6項陰性和陽性符合率及室間比對結果進行檢驗，完成對陰道分泌物檢測工作站形態學部分和功能學部分各指標的驗證。

1.3.1儀器鏡檢識別率驗證 選取陰道分泌物標本100例(陽性標本不低于50%)，儀器檢測后，回收儀器鏡檢玻片，交由人工嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》[12]進行鏡檢。統計儀器鏡檢結果與人工鏡檢結果的符合率。觀察項目包括滴蟲、真菌、上皮細胞、白細胞、乳酸桿菌、線索細胞、清潔度。評價標準：儀器鏡檢結果與人工鏡檢結果的滴蟲總符合率、真菌總符合率、線索細胞總符合率、清潔度符合率均≥90%，假陰性率均≤5%。

1.3.2陰道分泌物檢測工作站重復性驗證 將多例患者陰道分泌物標本[包括真菌陽性及細菌性陰道病(BV)陽性患者標本]充分混勻，分裝到20個標本管中，連續測試20次。判斷儀器鏡檢結果及干化學結果的重復性。鏡檢結果重復性評價標準：相關病原體(真菌、滴蟲、線索細胞)的檢出，重復性結果應無差異。其他有形成分(上皮細胞、乳酸桿菌、白細胞)的檢出，重復性結果應無差異或浮動不超過一個梯度(近似)，且陰性不可為陽性，陽性不可為陰性。干化學指標重復性評價標準：結果應無差異。酸堿度重復性結果變異系數(CV)≤5%。

1.3.3攜帶污染率驗證 10例隨機標本與空白標本(稀釋液)交替做，記錄結果。評價標準：空白標本檢測結果應不被污染。

1.3.4干化學檢出限驗證 將陰道炎六聯檢試劑盒的陽性質控品進行稀釋，終濃度等于或略高于陰道炎六聯檢試劑盒所描述的靈敏度，進行六聯檢測卡靈敏度測定，重復4次。評價標準：陽性質控品稀釋至說明書要求的檢出限后，檢測卡應顯色或顏色較淺。

1.3.5干化學6項陰性和陽性符合率驗證 根據陰道炎六聯檢質控品試劑盒說明書要求，在開機穩定后進行陰性和陽性質控品檢測，各檢測20次，評價每個結果之間的差異。評價標準：陰性和陽性質控品檢測結果均應無差異。

1.3.6室間比對結果評價 首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心與北京中醫藥大學東直門醫院檢驗科2臺陰道分泌物檢測工作站型號相同，2個醫院在同一天內檢測10例(陽性標本≥50%)患者陰道分泌物標本，記錄檢測結果并評價檢測結果的一致性。評價標準：真菌、滴蟲、線索細胞等相關病原體及其相應的干化學指標應完全相符，其他項目上下浮動應不超過一個梯度。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析處理。計數資料以例數或百分率表示，采用χ2檢驗進行比較。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1儀器鏡檢識別率驗證結果 各項指標符合率及假陰性率見表1。滴蟲總符合率為100%，假陰性率為0%；真菌總符合率為99%，假陰性率為1%；線索細胞總符合率為97%，假陰性率為0%；清潔度總符合率為100%，假陰性率為0%。儀器鏡檢識別率驗證合格。

2.2陰道分泌物檢測工作站重復性驗證結果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復性驗證結果見表2。儀器鏡檢中真菌、滴蟲、線索細胞等相關病原體結果無差異；清潔度及乳酸桿菌結果無差異；白細胞、上皮細胞重復儀器鏡檢結果近似，浮動不超過一個梯度。干化學指標重復性無差異；酸堿度結果隨滴加稀釋液的量略有浮動，CV=1.58%<5%。重復性驗證結果合格。

2.3攜帶污染驗證結果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站攜帶污染驗證結果見表3。經驗證陽性標本和陰性標本均不會影響下一個空白標本的結果，10例空白標本結果完全一致，攜帶污染驗證合格。

表1 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站鏡檢識別率驗證結果

表2 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復性驗證結果

續表2 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復性驗證結果

表3 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站攜帶污染率驗證結果

2.4干化學檢出限驗證結果 將干化學4種酶及過氧化氫的陽性質控液分別稀釋到各自的檢出限附近進行檢出限驗證，結果見表4。4種酶及過氧化氫質控品濃度在等于或略高于臨界值時均顯色，干化學檢出限驗證合格。

2.5干化學陰性和陽性符合率驗證結果 六聯檢檢測卡檢測陰性和陽性質控品，各檢測20次，6個項目的陰性和陽性符合率均為100%。

2.6室間比對結果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站室間比對結果見表5。結果顯示，10例標本中，真菌、滴蟲、線索細胞，以及干化學指標過氧化氫、唾液酸苷酶、 白細胞酯酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶結果差異均無統計學意義(P>0.05)；清潔度、上皮細胞、白細胞、乳酸桿菌上下浮動不超過一個梯度；pH值經配對t檢驗，差異無統計學意義(t=-0.896,P=0.394)。室間比對結果合格。

表4 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站干化學檢出限驗證結果

表5 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站室間比對結果(n=10)

3 討 論

陰道分泌物檢測是婦科術前評估、孕期檢查及陰道炎診斷常用的檢測項目[13]。陰道微生態評價可以更好地評估陰道的微環境及治療效果，更好地為臨床提供參考[14-15]。全自動陰道分泌物檢測儀器包括形態學和功能學2個部分，可以全面評估陰道微生態，取代人工鏡檢，降低由于經驗原因導致的人員之間的差異，還可以檢測干化學指標，輔助診斷，提高檢測的準確性，自動化的檢測設備還可提高檢測效率。目前，市場上該類儀器多在標本量較大的大型醫院應用，品牌較多，形態學部分檢測原理不同，有數字成像自動識別法和流式細胞法等；功能學部分即干化學法檢測，原理大致相同。對該類儀器的性能評價包括形態學評價和功能學評價2個部分。各項指標均應符合相關標準要求，保證該系統檢測的可行性。本研究對HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站7個形態學項目(滴蟲、真菌、線索細胞、上皮細胞、白細胞、乳酸桿菌、清潔度)的儀器鏡檢識別率、重復性、攜帶污染率和6個干化學項目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白細胞酯酶、唾液酸苷酶、過氧化氫)的重復性、檢出限、攜帶污染率、陰性符合率、陽性符合率等性能進行了評價，并與東直門醫院檢驗科同款儀器進行室間比對，評價HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站共13個項目的一致性。各項目指標均符合相關標準要求。

形態學部分參考了尿液有形成分分析儀(數字成像自動識別)中華人民共和國醫藥行業標準(YY/T-0996-2015)，包括識別率、重復性、攜帶污染率，但略有不同。因為陰道分泌物檢測主要側重病原體的檢出，如真菌、滴蟲、線索細胞，而不是紅細胞和白細胞。因此，沒有做白細胞和紅細胞的檢出限評估，因為陰道分泌物檢測屬于定性檢測而不是定量分析,沒有做病原體檢出限的評估。由于沒有病原體的標準質控品，所以無法評估穩定性，但標本一般均可在半小時內完成檢測，而且數十日內100例臨床標本儀器鏡檢與人工鏡檢結果比對的高符合率可以間接證明該儀器形態學檢測部分性能的穩定性。本次性能評估試驗中識別率評估的評價標準為90%，高于中華人民共和國醫藥行業標準(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析儀(數字成像自動識別)對尿液中識別率要求最高的白細胞評估標準(≥80%)。由于清潔度Ⅰ和Ⅱ表示正常，Ⅲ和Ⅳ表示陰道炎癥程度，所以將Ⅰ和Ⅱ合并，Ⅲ和Ⅳ合并。將陰道清潔度分為正常和炎癥進行評估。由于是定性項目，對重復性的評估無法執行中華人民共和國醫藥行業標準(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析儀(數字成像自動識別)標準，只需保證病原體(真菌、滴蟲、線索細胞)的檢出無差異，其他有形成分(上皮細胞、乳酸桿菌、白細胞)的重復性結果應無差異或上下浮動不超過一個梯度即可。對于功能學評價部分，參考國家行業標準YY/T 0475-2011文件，包括重復性、攜帶污染率、檢出限、陰性符合率和陽性符合率，與尿干化學法性能評估相似，性能指標均符合要求。

由于沒有室間質評，因此，需要通過室間比對評估實驗室結果的準確性。與東直門醫院進行比對的10例標本中有3例真菌陽性標本和3例線索細胞陽性標本。標本由天壇醫院先檢測，然后1 h內低溫轉運至東直門醫院檢測，保證從標本采集到檢測結束的時間不超過4 h，并注意在比對試驗前應加足稀釋液，保證室間比對的標本一致。

4 結 論

本研究初步建立了一套用于評估全自動陰道分泌物檢測工作站性能驗證的方案。HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站7個形態學項目(滴蟲、真菌、線索細胞、上皮細胞、白細胞、乳酸桿菌、清潔度) 的儀器鏡檢識別率、重復性、攜帶污染率及6 個干化學項目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白細胞酯酶、唾液酸苷酶、過氧化氫)的重復性、攜帶污染率、檢出限、陰性符合率、陽性符合率等性能均符合要求。