黃檗葉提取物的體外抗氧化活性研究

黃宇志

（海南熱帶海洋學院，海南三亞 572022）

黃檗經常被稱為黃菠蘿，屬于一種我國特有的物種。臨床研究表明該物質具有良好的瀉火除蒸、解毒療瘡和抗菌抗炎效果，生物堿類屬于黃檗中的主要藥用成分，小檗堿所發揮出來的藥理作用對于臨床治療高血壓、癌癥和糖尿病等有著積極意義，由此直接影響到人類個體的壽命。抗氧化劑應用期間能夠和自由基發生一些化學反應，有利于降低機體可能發生的損害，所以在臨床和醫療界廣泛應用。然而，人工合成的抗氧化劑如果長期用于人體治療的話，帶給人們的毒副作用會極大影響人們的身體健康，這和當前人們所倡導的養生、保健等觀念相沖突。因此人們在氧化劑制作期間便逐漸把目光轉向具有低毒性和高效性特點的天然植物，經過研究顯示，黃檗在抗氧化劑制作期間屬于一種優質的植物原料。本研究主要在于分析黃檗葉提取物在實際應用期間所具有的抗氧化活性，由此判斷黃檗提取物所擁有的抗氧化價值。

1 材料和方法

1.1 實驗材料與試劑選擇

本次實驗所選用的黃檗葉全部由某林業大學示范基地生產，且所有黃檗植物生產年限均在40a 以上，所有黃檗葉都保存放置在陰暗、通風的位置，在自然曬干之后使用粉碎機對備用材料進行粉碎。

本次實驗所選試劑包括抗壞血酸、DPPH、2，4，6-三吡啶三嗪等主要試劑，其余藥品和試劑均為分析純。

1.2 實驗設備與儀器選擇

選擇上海精科公司和天美公司生產的可見分光光度計和紫外可見光光度計，亞榮生化儀器廠生產的RE52A 型旋轉蒸發儀，循環式樣多用真空泵等。

1.3 實驗方法概述

1.3.1 針對黃檗葉處理與提取方法

準確稱量1kg 經過粉碎后的黃檗葉，采用1:15的料液比，使用70%濃度的乙醇溶液，對黃檗葉進行超聲浸提處理，每次處理時間持續180s，設置超聲功率為100W，并將其置放在40℃的實驗環境之下，經過兩次浸提之后合并浸提液，之后再對制作出來的浸提液進行高度壓縮，依照著水相、石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相的順序依次實施萃取處理，之后再將所有獲取到的有機萃取溶劑和水相進行干燥處理，最后將實驗所需要的各種萃取相以干物質的形式得到，得到實驗所需的各萃取相干物。

1.3.2 測定DPPH自由基清除作用的方法

取1.5mL 上述提前制備出來的各個濃度提取液，分別與濃度為0.1mmol/L DPPH 溶液混合，隨后將混合液震蕩均勻，在室溫條件之下將所有備用提取液放在光線較暗的位置30min，并在517nm 環境下對樣品所具有的吸光度加以測試，選擇A0管裝取。將A0管中的DPPH 溶液替代成1.5mL 無水乙醇，將該管標記成A1管；再將A0管內的樣品液體用劑量相同的蒸餾水進行代替，將該管標記為A2管。分別對各管的吸光度進行測定，并對其所具有的清除率進行計算。

1.3.3 測定羥自由基消除能力的方法

試管中取1mL 濃度為8.8mol/L 的硫化鐵，向其中依次加入水楊酸溶液、樣品溶液和蒸餾水，加入量分別為1mL、1mL和5mL，其中水楊酸溶液的濃度為9.1mmol/L。在將其震蕩均勻之后向其中加入1mL 0.06%過氧化氫，繼續震蕩，在達到均勻混合效果之后放置到黑暗條件之下，在37℃環境下持續30min 水浴。在510nm 的波長環境測定其所具有的吸光度，將該管標記為A 管；對A 管內的過氧化氫使用劑量相同的蒸餾水進行替代，隨后將這個試管標記成A1管；將A 管中的樣品溶液用劑量相同的蒸餾水進行替代，將該管標記為A0管。

2 結果和分析

2.1 黃檗葉各個相對DPPH自由基的消除能力

分析圖1中各項數據，黃檗葉中所提取出來的4種不同溶劑提取物都擁有一定的消除能力，各個提取物表現出一定的量效關系。在溶劑提取物不同的情況之下各個提取物對于DPPH所能表達出來的消除能力也會存在一定的差異。在溶劑提取物相同的情況下，濃度不斷上升之后所擁有的抗氧化能力也比較強。相同濃度下，對于DPPH 所擁有的消除率從小到大依次是石油醚相提取物、水相提取物、正丁醇相提取物和乙酸乙酯相提取物。在濃度為1.0mg/mL 情況下，石油醚相可以達到65.1%的清除率，=乙酸乙酯相提取物可以達到81.31%的清除率，正丁醇相提取物能夠達到76.59%清除率，水相提取物可以達到70.26%清除率。

圖1 黃檗葉各相提取物對DPPH的清除能力

2.2 黃檗葉提取物對羥自由基的清除效果

如圖2所示，各個黃檗葉提取物對羥自由基大部分擁有一定的消除能力，一般都有較為明顯的量效關系。在相同低濃度的情況之下，石油醚相相比于乙酸乙酯和水相提取物對于羥自由基所表現出來的清除率較低，但是存在的差異并不顯著。在濃度為1.0mg/mL 的環境之下，正丁醇相提取物和乙酸乙酯相提取物對于羥自由基所能表現出來的清除率更為理想，但是相互之間并不存在明顯的差異。當處在2.0mg/mL 環境下時，對于羥自由基表現出來的清除率依然是正丁醇相提取物和乙酸乙酯相提取物更加理想。

圖2 黃檗葉各相提取物對羥自由基的清除作用

2.3 黃檗葉提取物對ABTS+的清除能力

黃檗葉各個不同相提取物對ABTS+都能表現出一定程度的清除能力，并且也都擁有一定的劑量關系。在較低濃度環境下各相提取物對于ABTS+所表現出來的消除能力較弱，而且并不存在顯著的差異。濃度不斷增加之后會逐漸表現出一定的差異性，當達到2.0mg/mL 濃度時，正丁醇相和乙酸乙酯相所表現出來的消除能力最強，隨后依次是水相提取物和石油醚，4相提取物所表現出來的差異較為明顯。在1.0mg/mL 濃度下，石油醚所具有的清除率為85.23%，乙酸乙酯所能達到的清除率為80.61%，石油醚所能達到的消除率為41.67%，水相提取物消除率為55.22%。通過表1數據驗證了它們各自的IC50值。

表1 黃檗葉各相提取物的清除能力和對鐵離子還原能力的IC50值

3 結論

抗氧化作用對于維持人體健康有著非常重要的意義，一旦人體之中產生的自由基數量過多，或者發生抗氧化方面問題，極有可能導致體內細胞遭受損害，便有可能導致人體發生衰老，甚至引發心臟病或者癌癥等嚴重危害生命健康的疾病。人類正常生命活動過程都會有一定的自由基活性因子出現，如果是正常的新陳代謝情況，體內抗氧化物質能夠經由生理反應清除掉體內產生的過多自由基，由此對于保護細胞和人體組織不遭受損害有著較大裨益。

除了人體清除系統能夠起到清除過多自由基效果之外，還可以考慮應用補充抗氧化劑的方法將產生的過多自由基消除掉。但是，如果人體之中長期補充一些經由化學方法所合成出來的抗氧化劑必然會產生一定的毒副作用。因此人們在對抗氧化劑進行制作期間便逐漸把目光轉向具有低毒性和高效性特點的天然植物，該類抗氧化劑對減輕和預防與人體相關的疾病時可以起到積極作用，結合相關研究，很多植物之中所能提取出來的天然物質都能表現出較好的抗氧化活性。

結合相關研究顯示，黃檗葉的正丁醇相提取物和乙酸乙酯相提取物具有良好的抗氧化活性，這可能是因為黃檗葉提取物結構和其中所含抗氧化成分存有差異。而且這兩相提取物所具有的提取率也都較高。所以可以在抗氧化活性提取期間當成良好的植物材料。