液質(zhì)聯(lián)用法測定雞肉中9種激素類藥物殘留

李卿沛，馬雪琴，代春梅，焦紹明

（金昌市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，甘肅 金昌 737100）

激素是生物體內(nèi)產(chǎn)生的一類調(diào)節(jié)機(jī)體代謝及生理功能的微量物質(zhì)，是動物生長發(fā)育過程中的重要物質(zhì)之一[1-2]。人工合成具有類似結(jié)果的類固醇激素，主要有糖皮質(zhì)激素（如可的松、地塞米松、甲基潑尼松龍）、孕激素（如乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、訣諾酮、孕酮）、雄性激素（如乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、訣諾酮、孕酮）等。激素類藥物常用于提高畜禽的飼料轉(zhuǎn)化率，達(dá)到增重的目的，但其在體內(nèi)殘留會導(dǎo)致早熟、致癌等一系列的問題[3-5]。目前，激素類藥物已被大部分國家限制或禁止在養(yǎng)殖業(yè)中使用。本實驗通過對檢測條件和前處理方法的優(yōu)化，建立了一種液質(zhì)聯(lián)用法測定雞肉中的9種激素殘留的分析方法。

1 檢測方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1290-6460液質(zhì)聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；力康23R高速冷凍離心機(jī)（力康公司）；IKA RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（艾卡公司）；IKA VXR渦旋振蕩器（艾卡公司）；力康Smart-N30VF超純水機(jī)（力康公司）；Agilent Bond Elut C18固相萃取柱（500 mg/3 ml，美國Agilent公司）。

9種激素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品：地塞米松（100μg/ml），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；乙酸甲地孕酮（1000μg/ml）；天津阿爾塔科技有限公司；甲基睪酮（50 mg）、乙酸氯地孕酮（50 mg）、可的松（250 mg）、甲基潑尼松龍（250 mg）、諾龍（100 mg）、訣諾酮（100 mg）、孕酮（50 mg），Stanford Chemicals。甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純），美國Fisher公司。其他試劑為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配制 準(zhǔn)確稱取或量取9種激素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于-18℃冰箱中保存。取1 ml標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇定容至10 ml，配制成濃度為1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.2.2 前處理方法 準(zhǔn)確稱取雞肉樣品2 g于50 ml離心管中，加入10 ml乙腈，渦旋振蕩5 min，超聲提取10 min，1 0000 r/min離心10 min，取上清液至雞心瓶，殘渣重復(fù)提取一次，合并上清液于雞心瓶中，40℃減壓旋蒸至干，加入5 ml 30%甲醇水溶液溶解殘余物，待凈化。

C18固相萃取柱依次使用3 ml甲醇、3ml水活化，上述待凈化溶液全部過柱，用2 ml 30%甲醇水溶液淋洗小柱，抽干后使用3 ml 90%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液于40℃下氮氣吹干，加入1 ml 50%甲醇水溶液溶解，過0.22μm微孔有機(jī)濾膜后待檢測。

1.2.3 基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 去空白糜狀雞肉樣品作為基質(zhì)，按前處理步驟處理制備基質(zhì)溶液。取激素類藥物標(biāo)準(zhǔn)中間液，用空白基質(zhì)溶液配置成200 ug/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液，然后用空白基質(zhì)溶液逐級稀釋得到100μg/L、50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.4 色譜條件 色譜柱為Agilent SB-C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8μm）；流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為0.1%甲酸乙腈溶液（梯度洗脫程序見表1）。

1.2.5 質(zhì)譜條件 采用電噴霧正離子模式多反應(yīng)監(jiān)測，9種激素類藥物的保留時間、傳輸電壓、定性離子對、定量離子對、碰撞電壓等質(zhì)譜條件參數(shù)見表2，雞肉中9種激素類藥物混標(biāo)溶液總離子流色譜圖（50μg/L）見圖1。

表1 液相色譜梯度洗脫程序

圖1 雞肉中9種激素類藥物混標(biāo)溶液（50μg/L）總離子流色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取

激素類藥物一般采用甲醇、乙腈、酸化乙腈、乙酸乙酯等作為激素類藥物提取劑，本試驗比較了甲醇、乙腈、1%乙酸乙腈、乙酸乙酯的提取效果，結(jié)果顯示乙腈提取9種激素類藥物回收率較高，故采用乙腈作為提取溶劑。

表2 9種激素類藥物質(zhì)譜條件參數(shù)

2.2 基質(zhì)效應(yīng)的影響

考慮到雞肉基質(zhì)產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)對檢測結(jié)果的影響，本方法采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法降低基質(zhì)效應(yīng)對檢測結(jié)果的影響[6]。

2.3 線性范圍和檢出限、定量限

取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)測試，以各化合物測得的峰面積和相應(yīng)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為5～200μg/L；根據(jù)9種藥物的響應(yīng)值，以3倍信噪比（S/N=3）計算檢出限，以10倍信噪比（S/N=10）計算定量限。9種藥物的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限（LOD）和定量限（LOQ）見表3。

2.4 回收率和精密度

在雞肉中添加9種激素類藥物混標(biāo)進(jìn)行加標(biāo)回收實驗，添加濃度分別為10、20、50μg/kg，重復(fù)檢測6次，檢測結(jié)果見表4。其平均回收率范圍為73.98%～116.42%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于6%，符合實際分析需求。

3 結(jié)論

本試驗建立了雞肉樣品中9種激素類藥物殘留的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法，本分析方法檢出限、定量限、回收率等均符合實際檢測要求，適用于實際樣品中藥物殘留的檢測。

表3 9種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表4 9種藥物的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）