E-鈣黏蛋白、β-連環(huán)蛋白及Ki-67在不同級別腦膜瘤組織中的表達(dá)

王冬梅，梁 婷，李慧娟，雷先華，李 榮，劉長樂

(贛州市腫瘤醫(yī)院病理科，江西 贛州 341000)

腦膜瘤為高發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，在顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤中占13%～26%[1]。由于惡性、復(fù)發(fā)腫瘤患者面臨著較高的死亡風(fēng)險(xiǎn)[2]，所以早期鑒別該腫瘤對于治療效果和預(yù)后的改善具有重要意義。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)為鈣依賴性跨膜糖蛋白，是上皮細(xì)胞間重要的黏附分子，也是一種腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移抑制因子，只有黏附在β-連環(huán)蛋白(β-catenin)等細(xì)胞骨架上才能發(fā)揮作用，當(dāng)β-catenin發(fā)生突變或異常時(shí)將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分散、侵襲行為的出現(xiàn)。Ki-67蛋白是與細(xì)胞周期相關(guān)的增殖細(xì)胞核抗原，在細(xì)胞的有絲分裂、增殖、分化中起重要作用。國內(nèi)外已有研究[3-5]證實(shí)E-cadherin、β-catenin及Ki-67與部分腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性。本研究旨在通過觀察E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同級別腦膜瘤組織中的表達(dá)，分析三者與腦膜瘤惡變及復(fù)發(fā)的關(guān)系，以期為腦膜瘤的臨床診治方案選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2015年6月至2018年6月期間贛州市腫瘤醫(yī)院收治的82例腦膜瘤患者的臨床資料。男35例，女47例；年齡18～74(46.82±8.73)歲；WHO(2007)腦膜瘤病理分級標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級41例，Ⅱ級26例，Ⅲ級15例[6]。入選標(biāo)準(zhǔn)：符合《神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤》中腦膜瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，經(jīng)顱腦核磁共振成像與術(shù)后病理診斷證實(shí)；在我院接受首次手術(shù)治療，術(shù)后未進(jìn)行放化療；可獲取可用組織蠟塊；可完成隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受放化療；合并其他腫瘤；預(yù)計(jì)生存期<1 a；臨床資料缺失。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑免疫組化試劑盒，兔抗人E-cadherin單克隆抗體，兔抗人β-catenin單克隆抗體，兔抗人Ki-67單克隆抗體，葡聚糖酶復(fù)合物廣譜二抗，二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒，蘇木素染色劑，二喹啉甲酸蛋白定量試劑盒，均購自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.3 檢測方法所有標(biāo)本經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛固定目標(biāo)組織標(biāo)本，石蠟包埋后切成4 μm薄片，HE染色。將組織切片脫蠟、水化，加入磷酸鹽緩沖溶液，微波加熱20 min修復(fù)抗原；放置在體積分?jǐn)?shù)3%過氧化氫中孵育10 min，加入E-cadherin、β-catenin、Ki-67單克隆抗體，4 ℃孵育過夜；磷酸鹽緩沖溶液沖洗，加入二抗室溫下孵育15 min，磷酸鹽溶液沖洗，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺顯色，2～5 min后行蘇木素復(fù)染，25 s后自來水沖洗，烘干后經(jīng)中性樹膠封片。

1.4 結(jié)果判斷使用雙盲法，在400倍顯微鏡下對結(jié)果進(jìn)行記錄與審核。每張切片圖像均隨機(jī)選取5個(gè)視野，其中陽性細(xì)胞百分率<5.00%、5.00%～<25.00%、25.00%～<50.00%、50.00%～<75.00%，≥75.00%者分別記為0分、1分、2分、3分、4分。陽性細(xì)胞無染色、淡黃色、黃色或褐色、深褐色分別記為0分、1分、2分、3分。陽性細(xì)胞百分比評分+染色評分0分、1～2分、3～5分、>5分分別為陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性，其中<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.5 觀察指標(biāo)1)E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同級別腦膜瘤組織中表達(dá)情況；2)E-cadherin、β-catenin及Ki-67在復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中表達(dá)情況；3)不同腦膜瘤患者的1 a生存情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 26.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同級別腦膜瘤組織中表達(dá)的比較E-cadherin、β-catenin在Ⅰ級腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率高于Ⅱ級、Ⅲ級，在Ⅱ級腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率高于Ⅲ級；Ki-67在Ⅰ級腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率低于Ⅱ級、Ⅲ級，在Ⅱ級腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率低于Ⅲ級；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在不同級別腦膜瘤組織中表達(dá)的比較 n(%)

2.2 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中表達(dá)的比較E-cadherin、β-catenin在未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率高于復(fù)發(fā)腦膜瘤，Ki-67在未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率低于復(fù)發(fā)腦膜瘤，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 E-cadherin、β-catenin及Ki-67在復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中表達(dá)的比較 n(%)

3 討論

腦膜瘤起源于腦膜、腦膜間隙衍生物，為常見顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤，大部分為良性，臨床表現(xiàn)不明顯，小部分為惡性，侵襲性明顯[8-9]。腦膜瘤經(jīng)手術(shù)切除后大多數(shù)可痊愈，但仍存在一定的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，腫瘤級別越高，惡性程度越高，侵襲性越強(qiáng)，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)也越大[10]。有研究[11]顯示，腦膜瘤Ⅲ級復(fù)發(fā)率達(dá)到50.00%。因此，探究有效的病情判斷、預(yù)后評估方法對于腦膜瘤的診治具有積極意義。

本研究中，E-cadherin、β-catenin在腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率隨著腫瘤級別的升高而增加，且在未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率高于復(fù)發(fā)腦膜瘤。在腫瘤的侵襲過程中，需先自原發(fā)灶黏附位置脫離，因此，黏附具有重要作用，黏附力降低是腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的前提[12]。E-cadherin廣泛分布于上皮細(xì)胞，可黏附鈣依賴性同型細(xì)胞，在維持組織正常形態(tài)、連接細(xì)胞中發(fā)揮著重要作用[13]。β-catenin兩端分別與E-cadherin、其他β-catenin相連，再連接肌動(dòng)蛋白，組建成黏附細(xì)胞的復(fù)合體。E-cadherin、β-catenin陽性表達(dá)對腫瘤轉(zhuǎn)移具有抑制作用，表達(dá)缺失或減少將降低細(xì)胞間黏附力，導(dǎo)致細(xì)胞分散，進(jìn)而向外浸潤、繁殖，最終誘發(fā)轉(zhuǎn)移。兩者在腦膜瘤組織中表達(dá)水平越低，細(xì)胞與細(xì)胞間連接能力越弱，血腦屏障越容易被破壞，腦膜瘤向腦組織侵襲的能力越強(qiáng)，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)也越高。

本研究結(jié)果還顯示，Ki-67在腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率隨著腫瘤級別的升高而降低，且在未復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中陽性表達(dá)率低于復(fù)發(fā)腦膜瘤。Ki-67通常存在于細(xì)胞核中，隨著細(xì)胞周期的變化其表達(dá)也發(fā)生變化，最初出現(xiàn)于G1后期，S期與G2期表達(dá)逐漸增加，M期最高，其容易被降解，且很難被生長因子誘導(dǎo)，可準(zhǔn)確反映細(xì)胞增殖活性，陽性表達(dá)越高，細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)[14]。因此，推測Ki-67可作為腦膜瘤預(yù)后效果的預(yù)測指標(biāo)。

綜上所述，高級別、復(fù)發(fā)腦膜瘤組織中E-cadherin、β-catenin低表達(dá)，而Ki-67高表達(dá)，三者聯(lián)合檢測可為腦膜瘤鑒別、預(yù)后判斷提供參考。