聯合檢測EB 病毒不同抗體及其DNA 診斷鼻咽癌的價值

李旌

鼻咽癌屬于腫瘤科臨床常見的一種惡性腫瘤疾病,是危害人類身體健康的重要疾病之一,其發病率在頭頸部腫瘤疾病中居于首位［1,2］。另外,鼻咽癌的轉移性與侵襲性比較強,目前在世界各地均呈現出廣泛流行趨勢［3］。為了分析血清EB 病毒Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 以及EBV-DNA 聯合檢測對鼻咽癌的診斷價值,現將本院2017 年12 月～2019 年12 月收治的50 例鼻咽癌患者納為研究樣本,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017 年12 月～2019 年12 月本院收治的50 例鼻咽癌患者作為研究組,其中男27 例,女23 例；年齡30～78 歲,平均年齡(48.45±10.74)歲；疾病類型：根據TNM 分期將Ⅰ期和Ⅱ期作為早期鼻咽癌,Ⅲ期和Ⅳ期作為晚期鼻咽癌,其中Ⅰ期鼻咽癌4 例,Ⅱ期鼻咽癌6 例,Ⅲ期鼻咽癌21 例,Ⅳ鼻咽癌19 例。同期選擇49 例鼻咽相關疾病患者作為觀察組,其中男25 例,女24 例；年齡30～79 歲,平均年齡(48.66±10.34)歲；疾病類型：鼻息肉14 例,鼻出血1 例,耳鳴1 例,慢性耳源性眩暈1 例,耳炎3 例,淋巴瘤9 例,鼻炎12 例,頭頸部腫瘤8 例。同期選取52 例健康體檢人員作為對照組,其中男28 例,女24 例；年齡30～79 歲,平均年齡(48.57±10.62)歲；52 例健康體檢人員均無鼻咽癌或鼻咽相關疾病。三組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 檢測Rta-IgG 選擇北京同昕生物技術有限公司生產的試劑盒,檢測EA-IgA 與VCA-IgA 選擇德國歐蒙實驗診斷有限公司生產的試劑盒,儀器采用TECAN 全自動酶免分析儀。檢測EBV-DNA 選用美國的ABI7500 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)儀和EB 病毒核酸PCR 擴增試劑盒。在檢測過程中將3 ml靜脈血在EDTA 抗凝真空管與分離膠促凝管靜置30 min,然后2500×g 離心5 min,對血清和血漿進行分離,保存-20℃待檢［4］。采用酶聯免疫吸附劑測定(ELISA)法檢測,所有操作均根據試劑說明書進行。

1.3 觀察指標及判定標準 比較三組檢測結果及研究組不同分期、不同療效檢測結果。陽性診斷標準：Rta-IgG 試劑檢測標本吸光度A 值/臨界值≥1［5］；EA-IgA 與VCA-IgA 試劑檢測標本吸光度A 值/臨界值≥1.1［6］。臨界值按照說明書提供的算法CO(Cut Off)=0.05+陰性對照的讀數平均值,若陰性對照＜0.05,則按0.05 計算［7］。結果采用rA 值(相對A 值)。采用熒光定量PCR 檢測血漿EBV-DNA,擴增與檢測等相關操作都嚴格按照試劑說明書完成［8］。陽性標準：采用自動分析軟件對PCR 擴增結果進行分析,EBVDNA＞5×102copies/ml 為陽性［9,10］。研究組全部患者療效評價按照PR 和CR 動態觀察其相關指標。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差()表示,采用t 檢驗；不符合正態分布的計量資料以中位數表示,采用秩和檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三組VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 與EBV-DNA檢測結果比較 研究組VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG的rA 值和EBV-DNA 中位數分別為(2.41±3.44)S/CO、(2.65±3.38)S/CO、(4.23±5.81)S/CO、7500 copies/ml,觀察組分別為(0.87±1.21)S/CO、(0.35±0.54)S/CO、(0.51±1.32)S/CO、82 copies/ml,對照組分別為(0.46±0.55)S/CO、(0.37±0.84)S/CO、(0.36±1.02)S/CO、66 copies/ml。研究組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值和EBV-DNA 中位數均高于觀察組、對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)；觀察組VCA-IgA 的rA值高于對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)；觀察組Rta-IgG、EA-IgA 的rA 值和EBV-DNA 中位數與對照組比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。研究組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 和EBV-DNA 檢測陽性率均高于觀察組、對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)；觀察組VCA-IgA 檢測陽性率高于對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)；觀察組Rta-IgG、EA-IgA、EBV-DNA 檢測陽性率比較差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCAIgA 與EBV-DNA 檢測結果比較 Ⅰ期、Ⅱ期患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值與EBV-DNA 中位數均低于Ⅲ期、Ⅳ期,差異具有統計學意義(P＜0.05)；Ⅰ期、Ⅱ期患者Rta-IgG 與EBV-DNA 檢測陽性率均低于Ⅲ期、Ⅳ期,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

2.3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測結果比較 CR、PR 患者治療前后Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值組間及組內比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。CR、PR患者治療前EBV-DNA 中位數比較差異無統計學意義(P＞0.05)；CR、PR 患者治療后EBV-DNA 中位數均低于治療前,差異具有統計學意義(P＜0.05)；CR 患者治療后EBV-DNA 中位數低于PR 患者,差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表1 三組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測陽性情況比較［n(%)］

表2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測結果比較［,n(%)］

表2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測結果比較［,n(%)］

注：與Ⅰ期比較,aP＜0.05；與Ⅱ期比較,bP＜0.05

表3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測結果比較(,M)

表3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測結果比較(,M)

注：與治療前比較,aP＜0.05；與PR 比較,bP＜0.05

3 討論

鼻咽癌的病理機制與EB 病毒存在密切聯系,針對高危人群早期篩查鼻咽癌能夠有效提高患者的預后效果與治愈率［11］。鼻咽癌患者的血漿中能夠檢測出腫瘤來源的EBV-DNA,其含量變化和患者病情、復發、療效、轉移密切相關［12］。EA-IgA 與VCA-IgA 抗體檢測在鼻咽癌輔助診斷和篩查當中應用較多,而EB 病毒裂解期的基因編碼Rta 蛋白是目前更受關注的新分子靶標［13,14］。EB 病毒裂解復制的情況下,病毒增殖過程中受染機體Rta 蛋白含量的高低能夠準確反映病毒復制的活躍性［15］。

本研究結果顯示：①鼻咽癌患者三種EB 病毒抗體表達和EBV-DNA 中位水平均顯著高于健康體檢人員和鼻咽相關疾病患者,而且鼻咽相關疾病患者的VCA-IgA 抗體表達和陽性率與健康體檢人員也有差異,說明鼻咽癌患者血清中含有高濃度EB 病毒抗體,而且健康體檢人員和鼻咽相關疾病患者也存在一定的陽性率,單項檢查容易干擾血清學診斷結果或出現誤診,因而三種EB 病毒抗體和EBV-DNA 聯合檢測在鼻咽癌早期篩查與診斷當中有較高的臨床診斷價值；②臨床癥狀較輕和早期鼻咽癌患者的EA-IgA 與VCAIgA 抗體表達相對較低,在病灶增大或浸潤范圍擴散后抗體表達有一定的增高,但Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的陽性率比較,差異無統計學意義(P＞0.05)；晚期鼻咽癌患者EBV-DNA 與Rta-IgG 抗體表達顯著高于早期患者,說明根據淋巴結轉移程度和臨床分期的增高EB 病毒會出現高表達,引起相應抗體和Rta 蛋白出現明顯的增多,Ⅲ期、Ⅳ期患者的陽性率也相對更高,因而Rta 蛋白抗體檢測在鼻咽癌篩查診斷當中作用顯著；③CR 患者治療前EBV-DNA 中位數稍高于PR 患者,治療后PR 患者的EBV-DNA 中位數顯著高于CR患者,說明鼻咽癌分期與血漿中EBV-DNA 的含量相一致,由于病情變化后腫瘤細胞釋放到外周血引起患者血漿中EBV-DNA 含量出現增高,因此血漿中EBVDNA 含量與腫瘤負荷屬于正相關性。

綜上所述,三種EB 病毒抗體和EBV-DNA 聯合檢測在鼻咽癌診斷中作用顯著,建議推廣應用。