保肺顆粒祛痰、平喘、止咳、抗炎作用的藥效學研究

張婷婷 李展 張軍霞

摘要 目的：研究保肺顆粒的止咳、平喘、祛痰、抗炎作用。方法：通過小鼠酚紅分泌實驗觀察其祛痰作用、通過磷酸組胺引起豚鼠的哮喘反應，觀察其平喘作用、通過SO2引起的小鼠咳嗽反應，觀察其止咳作用、通過二甲苯致小鼠耳廓腫法，觀察其抗炎作用、通過角叉菜膠致大鼠足趾腫脹法，觀察其抗炎作用。結果：對小鼠耳廓腫炎性反應模型的實驗表明：保肺顆粒高、中、低劑量均能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹，其腫脹度、腫脹率顯著降低。對小鼠的祛痰（氣管段酚紅法）實驗表明：保肺顆粒高、中、低劑量均能增加小鼠酚紅排出量。對豚鼠的平喘（噴霧致喘法）實驗表明：保肺顆粒高劑量能明顯提高磷酸組胺引起的豚鼠哮喘潛伏期延長率，中、低劑量也可提高豚鼠哮喘潛伏期延長率，但差異無統計學意義。對小鼠的止咳（二氧化硫引咳法）實驗表明：保肺顆粒高、中、低劑量均能明顯延長SO2引起的小鼠咳嗽潛伏期;高、中劑量能明顯減少2 min內咳嗽次數;保肺顆粒高、低劑量能明顯延長枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽潛伏期，能明顯減少5 min內咳嗽次數，潛伏期延長率有明顯提高。結論：保肺顆粒具有較好的祛痰、平喘、止咳、抗炎作用。

關鍵詞 保肺顆粒;藥效學研究;祛痰;平喘;止咳;抗炎

Abstract Objective：To study the expectorant， antiasthmatic， antitussive， and antiinflammatory effects of Baofei Granules. Methods：The mice phenolsulfonphthalein excretion method was used to observe the expectorant effects. The guinea pigs asthma induced by histamine phosphate method was used to observe the antiasthmatic effects. The antitussive effects of the cough reaction in mice caused by SO2， and the anti-inflammatory effects of the auricle swelling caused by xylene， and the anti-inflammatory effects of the rat toe swell method induced by carrageenan were observed. Results：Experiments on mice auricular swelling inflammation model showed the high， medium and low dose groups of Baofei Granules could significantly inhibit the swelling of mice ears caused by xylene， and its swelling degree and swelling rate were significantly reduced; the expectorant（tracheal phenol red method）experiments on mice showed that Baofei Granules can increase the excretion of phenol red in high， medium and low doses. Anti-asthmatic（guinea-spray method）experiments on guinea pigs showed that high doses of Baofei Granules can significantly increase the prolongation rate of guinea pig asthma caused by histamine phosphate， and low and medium doses can also increase the prolongation rate of guinea pig asthma latency， but there was no statistical difference. The relieving cough（sulfur dioxide cough method）experiment on mice showed that high， medium and low doses of Baofei Granule can significantly prolong the incubation period of cough caused by SO2 in mice; high and medium doses can significantly reduce the number of coughs in 2 minutes; high and low Baofei Granules can significantly prolong the incubation period of guinea pig cough caused by citrate， can significantly reduce the number of coughs within 5 minutes， and the prolongation rate of incubation period has been significantly improved. Conclusion：Baofei Granules has significant expectorant， antiasthmatic， antitussive， and antiinflammatory effects.

Keywords Baofei Granules; Pharmacodynamics research; Expectorant; Antiasthmatic; Antitussive; Anti-inflammatory

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.12.011

大氣污染是目前廣受重視的問題，PM2.5細小顆粒可直接入侵呼吸系統，造成起到和肺內的炎性反應及慢性損傷[1]，并能誘發出現呼吸衰竭等多系統疾病危及生命，是高發病率、高病死率疾病，極為兇險[2-3]。大量研究證明中藥對慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）有明顯的改善作用[4-6]。保肺顆粒處方為多年臨床經驗方，由浙貝母、炙黃芪、酒黃精、黨參、炒白術、茯苓、地龍、姜厚樸、陳皮等制成，具有補肺健脾、止咳化痰平喘，用于治療肺脾氣虛癥的COPD，為了進一步驗證其臨床藥理作用，本研究分別對其進行了祛痰、平喘、止咳和抗炎的藥效作用研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 KM小鼠，SPF級，雌雄各半，體質量18～20 g，動物質量合格證號：41003100002168;SD大鼠，SPF級，雄，體質量130～150 g，200～300 g，動物質量合格證號：No.41003100001797。均購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK（豫）2015-0004。幼年豚鼠，雌雄各半，體質量小于200 g，成年豚鼠，雌雄兼用，體質量400 g左右，購自華蘭生物疫苗有限公司，許可證號：SCXK（豫）2010-0001，動物質量合格證號：No.41001700001651。受試動物引進后在河南省食品藥品檢驗所SPF級動物房適應性生長1周，許可證號：SYXK（豫）2015-0009。飼養環境：河南省食品藥品檢驗所SPF級動物房，許可證號：SYXK（豫）2015-0009。環境溫度（23±2）℃，濕度50%～65%，12 h光照明暗交替，良好通風。動物分籠飼養于消毒塑料盒內，每籠3～4只，自由飲水。飼料：實驗動物全價營養飼料，購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK（豫）2010-0002，飼料營養質量檢測報告證明為合格。經121 ℃、15 min濕熱滅菌，干燥后備用。飲水：純化水，當日自制。

1.1.2 藥物 保肺顆粒（河南中醫學院一附院制劑室，批號：131103），每克顆粒相當于生藥3.375 g。保存條件：4 ℃冷藏密閉保存，實驗時放置至室溫備用，生產單位：河南中醫學院一附院制劑室。羧甲基纖維素鈉（上海化學試劑站分裝廠，批號：921224）;羧甲司坦片（白云山湯明東泰藥業有限責任公司，批號：141002）;急支糖漿（太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，批號：141011930371）;氨茶堿片（海南制藥廠有限公司制藥一廠，批號：141201）;咳喘寧口服液（南京先聲東元制藥有限公司，批號：40-140906）;氫溴酸右美沙芬（廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號：T40067）;布洛芬緩釋膠囊（中美天津史克制藥有限公司，批號：14110665）;銀黃口服液（陜西白鹿制藥股份有限公司，批號：141131）。

1.1.3 試劑與儀器 酚紅（天津市光復精細化工研究所，批號：20141028）;氫氧化鈉（天津市風船化學試劑科技有限公司，批號：20121008）;磷酸組胺（中國食品藥品檢定研究院，批號：150510-201313）;二甲苯（天津市風船化學試劑科技有限公司，批號：20120208）;角叉菜膠（Aladdin Industrial Corporation，德國，批號：H1506079）。電子天平（德國Sartorius公司，型號：CP225D），電子天平（瑞士METTLER TOLEDO儀器有限公司，型號：PB4002-S）;UV-1800紫外分光光度計，島津生產;403C壓縮空氣霧化器，江蘇魚躍醫療設備有限公司（出品）;多導生理儀，澳大利亞埃德公司;PSF2000三鍵電子數顯卡尺，桂林廣陸數字測控股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠酚紅分泌量試驗 取SPF級KM小鼠72只，雌雄各半，體質量18～22 g，按體質量隨機分為6組，即空白對照組（0.5%CMCNa）、保肺顆粒高、中、低劑量組（43.8、21.9、11.0 g生藥/kg），羧甲司坦組（1 g/kg）和急支糖漿組（20 mL/kg），每組12只。給藥1次/d，連續給藥7 d，最后1次給藥后30 min，腹腔注射酚紅飽和溶液0.1 mL/10 g，0.5 h后處死動物，分離氣管段（自甲狀軟骨至氣管分支處），放入盛有2 mL生理鹽水的試管中，加入1 mol/L氫氧化鈉0.1 mL，于546 nm處測吸收度。用5%酚紅溶液做出標準曲線，根據標準曲線計算酚紅排出量[7-8]。

1.2.2 對豚鼠平喘作用的影響

1.2.2.1 試驗用動物預選 實驗前1 d選體質量小于200 g豚鼠若干只，分別置容積為約5 L玻璃干燥器內，利用壓縮霧化器噴入1 mg/mL的磷酸組胺30 s，動物在吸入以上藥液后經過一定的潛伏期，即產生哮喘反應，“哮喘”反應按程序可分為四級，Ⅰ級呼吸加速，Ⅱ級呼吸困難，Ⅲ級抽搐，Ⅳ級跌倒。記錄噴霧開始至癥狀出現的時間抽搐為準作為潛伏時間跌倒時間，此為給藥前跌倒時間。多數動物在90 s以內即可出現Ⅲ級或Ⅳ級反應;一般不超過150 s，超過150 s者可以認為不敏感，不予選用。動物一出現抽搐，立即取出動物，必要時輔以人工呼吸，以免動物因窒息而死亡[9]。

1.2.2.2 次日將預選過的豚鼠以跌倒時間隨機分為6組，即空白對照組（0.5%CMCNa），陽性藥組氨茶堿（60 mg/kg），咳喘寧口服液組（5 mL/kg原液），保肺顆粒高、中、低劑量組（21.9、11.0、5.5 g生藥/kg），每組10只，雌雄各半灌胃給藥。連續灌胃給藥7 d，最后1次給藥后30 min，將豚鼠分別放入同預選時條件一致玻璃容器內。記錄噴霧開始至癥狀出現的時間（以抽搐為標準）作為潛伏時間，此為藥后跌倒時間。觀察360 s，不跌倒者潛伏期以360 s計。豚鼠哮喘潛伏期延長率按照公式計算：

潛伏期延長率（%）=給藥后跌倒時間給藥前跌倒時間×100%

1.2.3 對小鼠止咳作用的影響 取小鼠，雌雄各半，體質量18～20 g，按體質量均分為6組，每組14只。按體質量隨機分為6組，即空白對照組（0.5%CMCNa）、保肺顆粒高、中、低劑量組（43.8、21.9、11.0 g生藥/kg）、氫溴酸右美沙芬（20 mg/mL）、急支糖漿（10 mL/kg），給藥1次/d，連續給藥7 d，最后1次給藥1 h后，迅即將小鼠放入充滿SO2燒杯內，觀察并記錄小鼠咳嗽潛伏期（從小鼠放入鐘罩或燒杯到出現第1聲咳嗽的時間）及2 min內的咳嗽次數，比較實驗組與對照組之間的差異。咳嗽潛伏期延長，表明有止咳作用[10]。

止咳率（%）=給藥組咳嗽反應時間對照組咳嗽反應時間×100%

1.2.4 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 取體質量18～22 g雄性SPF級KM小鼠，按體質量隨機分為6組，即空白對照組（0.5%CMCNa）、布洛芬組（180 m/kg）、保肺顆粒高、中、低劑量組（43.8、21.9、11.0 g生藥/kg）、每組13只。各組藥物灌胃，給藥容量0.2 mL/10 g，1次/d，連續給藥7 d。末次給藥1 h后，給小鼠右耳雙面涂以二甲苯0.04 mL/只，左耳對照，4 h后處死動物，用直徑6 mm打孔器將雙耳同部位等面積切下，精確稱重，按下式計算腫脹度、腫脹率及腫脹抑制率[11-12]。

腫脹度=右耳片重-左耳片重

腫脹率（%）=右耳片重（g）-左耳片重（g）左耳片重（g）×100%

抑制率（%）=空白組平均腫脹率（%）-給藥組平均腫脹率（%）空白組平均腫脹率（%）×100%

1.2.5 對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 取SD大鼠，雄，60只，體質量130～150 g，按體質量隨機分為6組，即空白對照組（0.5%CMCNa），陽性藥組布洛芬（100 mg/kg），銀黃口服液組（10 mL/kg原液），保肺顆粒高、中、低劑量組（21.9、11.0、5.5 g生藥/kg），每組10只，灌胃給藥，1次/d，給藥容量1 mL/100 g體質量，連續給藥7 d。末次給藥后30 min，除空白對照組外，其他各組以1%的角叉菜膠為致炎劑，分別在大鼠右后肢足跖皮下注射0.1 mL。致炎前測定各組大鼠右后跖的正常厚度，致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、再測定各組大鼠右后跖的厚度。按下式計算腫脹率及抑制率[13-14]。

腫脹率（%）=致炎后足趾厚度（mm）-致炎前足趾厚度（mm）致炎前足趾厚度（mm）×100%

抑制率（%）=空白組腫脹率（%）-給藥組腫脹率（%）空白組腫脹率（%）×100%

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0統計軟件進行統計學分析，結果以均數±標準差（±s）表示。組間差異用單因素方差分析進行統計學分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對小鼠酚紅分泌量的影響 與空白對照組比較，保肺顆粒高、中、低劑量組、羧甲司坦組、急支糖漿組增加小鼠酚紅排出量差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）。見表1。

2.2 對哮喘豚鼠模型平喘作用的影響 與模型對照組比較，保肺顆粒高劑量組豚鼠給藥后跌倒時間延長，哮喘潛伏期延長率顯著升高（P<0.05）;中劑量組、低劑量組也可延長豚鼠給藥后跌倒時間，提高磷酸組胺引起的豚鼠哮喘潛伏期延長率，但差異無統計學意義;0.06 g/kg氨茶堿和5 mL/kg的咳喘寧口服液可延長豚鼠給藥后跌倒時間，提高磷酸組胺引起的豚鼠哮喘潛伏期延長率，且差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 對小鼠止咳作用的影響 觀察記錄小鼠咳嗽潛伏期（從小鼠放入鐘罩或燒杯到出現第1聲咳嗽的時間）及2 min內的咳嗽次數，并計算止咳率。與模型對照組比較，保肺顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組小鼠咳嗽潛伏期明顯延長，高、中劑量組2 min內咳嗽次數明顯減少（P<0.01）。0.02 g/kg的氫溴酸右美沙芬組和10 mL/kg急支糖漿組小鼠咳嗽潛伏期明顯延長，2 min內咳嗽次數明顯減少（P<0.01）。見表3。

2.4 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 觀察記錄小鼠給藥前及末次給藥前體質量，致炎后小鼠左右耳片重量，計算腫脹度、腫脹率及抑制率。與模型對照組比較，各組給藥前和末次給藥前動物體質量差異無統計學意義（P>0.05）。與模型對照組比較，保肺顆粒高、中、低劑量組和布洛芬組小鼠耳腫脹度、腫脹率顯著降低（P<0.05）;銀黃口服液腫脹度、腫脹率降低，差異無統計學意義（P>0.05）。見表4。

2.5 對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 觀察記錄各組大鼠致炎前和致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h大鼠右后跖腫脹率及抑制率。與模型對照組比較，足跖腫脹炎性反應模型大鼠給藥前及末次給藥前各組體質量差異無統計學意義（P>0.05）。大鼠皮下足跖注射1%的角叉菜膠致炎后，模型對照組逐漸腫脹，至2～4 h腫脹率最高，到6 h腫脹率下降;與模型對照組比較，保肺顆粒高、中、低劑量組和布洛芬組在致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h均能抑制大鼠足跖腫脹，其腫脹率顯著降低（P<0.05或P<0.01）;銀黃口服液對致炎后30 min、1 h、2 h引起的大鼠足跖腫脹抑制不明顯，腫脹率差異無統計學意義，致炎后4 h和6 h腫脹率明顯下降（P<0.05或P<0.01）。見表5、6。

3 討論

隨著人們生存空氣的污染、氣候的變化、吸煙以及人口的老齡化，呼吸系統疾病發病率逐年增高，嚴重威脅我國居民的健康。其中，COPD是一種常見、多發、高致殘率和高致死率的慢性呼吸系統疾病，通常是由于暴露于有毒氣體或顆粒導致的氣道和（或）肺泡異常。常伴有咳嗽、痰多、氣喘、炎性反應等癥狀[15-16]。據世界衛生組織統計，目前慢阻肺為世界第四大致死原因，到2030年可能上升為世界第3大致死原因[17]。中醫認為COPD日久不愈，肺氣虧虛，根據五行相生關系，子病及母，肺氣虛可致中州脾土虛弱，則脾失健運，氣血生化乏源，故日久可致脾肺俱虛，治宜培土生金[18]。因脾氣虛致肺氣虛，出現咳、喘、痰等癥，其標在肺，而其本在脾，應治其本，養護后天之氣[19]。

應用中藥化痰益肺湯治療本病，方中浙貝母、地龍清熱，去久病由瘀化熱之因;酒黃精滋陰潤肺，以防化燥傷陰之癥;浙貝母、陳皮、姜厚樸化痰瀉肺平喘、理氣降逆止嘔;茯苓健脾寧心，炒白術、黨參、酒黃精健脾益氣[20]，以防金病傷及脾土。由幾味主藥的藥效不難發現，多具健脾功效，“脾能助肺益氣”，幾味中藥聯用相互協同，相互資助，則氣得以生，衛表得固，外邪無以入侵，即“正氣存內，邪不可干”，從而起到祛痰、平喘、止咳和抗炎作用。

保肺顆粒高、中、低劑量均能增加小鼠氣管酚紅排出量，表明保肺顆粒具有較好的祛痰作用，高、中劑量尤為顯著。保肺顆粒高、中、低劑量均能有效抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹;保肺顆粒高、中、低劑量均能有效抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹，致炎后0.5～1 h中劑量抑制率顯著，2 h后高、中、低劑量抑制均顯著，表明保肺顆粒具有良好的抗炎作用，表明保肺顆粒具有良好的抗炎作用。保肺顆粒高劑量可延長豚鼠給藥后跌倒時間，提高磷酸組胺引起的豚鼠哮喘的潛伏期延長率，低劑量和中劑量也可較好的延長豚鼠給藥后跌倒時間，提高潛伏期延長率。表明保肺顆粒有較好的平喘作用。保肺顆粒高、中、低劑量均能明顯延長SO2引起的小鼠咳嗽潛伏期;高、中劑量能明顯減少2 min內咳嗽次數;表明保肺顆粒有較好的止咳效果。

上述研究顯示，保肺顆粒具有較好的祛痰、平喘、止咳和抗炎作用，并且藥效由于或等同于陽性化學對照藥，這不僅為保肺顆粒臨床應用提供了藥效學實驗數據支持，同時同時顆粒劑具有劑型優勢，攜帶服用方便，并且可以避免微生物污染，是一種開發前景良好、具有較好的臨床應用價值的中藥復方制劑。

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（2020-03-13收稿 責任編輯：王明）