正交實驗優選醋制當歸炮制工藝*

楊宋一莎，聶詩明，劉藝瑩，余晗，劉艷菊，宋天寶

(1.湖北中醫藥大學藥學院，武漢 430061；2.武漢大學基礎醫學院，武漢 430071)

當歸為傘形科植物當歸[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根，具有補血活血、調經止痛、潤腸滑腸功效，為臨床使用頻率最高的中藥之一。醋當歸僅見于名老中醫用藥及古籍記載，醋制的意圖在清代《本草述鉤元》中記載：“如吐衄崩下藥中，須醋炒過，少少用之，多則反能動血[1]。”清《本草必用》：“酒洗去節，入止血藥中醋炒。”古人認為醋制緩當歸辛烈之性而專于止血，為止血崩或治吐血可醋炒用之。醋當歸飲片并未列入《中華人民共和國藥典》，筆者未見炮制工藝研究及相關現代研究，基于古代用藥經驗及中醫處方用藥需求，有必要對其探討開展相關研究，以更好地傳承祖國醫學。筆者在本實驗通過正交實驗法，以鞣質、阿魏酸和揮發油含量為考察指標，研究醋當歸炮制工藝，以期為醋當歸飲片生產企業提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫1260液相色譜儀(美國 Agilent公司，UV檢測器)；HP色譜工作站 (美國Agilent公司)；BP121S分析天平(德國Sartorius公司，感量：0.1 mg)；BP211D分析天平(德國Sartorius公司，感量：0.01 mg)；PM PLUS 型紅外測溫儀 (美國 Raytek 公司) ；C18色譜柱(Thermo，4.6 mm×250 mm，5 μm)；圓底燒瓶；電熱恒溫鼓風干燥箱(SFG-02.500)；PTHW型普通恒溫電熱套；KQ-400KDB 型高功率數控超聲波清洗器 (江蘇昆山市超聲儀器有限公司)；CY-640型炒藥機(周口制藥機械廠有限公司，設備參數：50～180 kg·h-1，28 kW)。

1.2試藥 當歸藥材{湖北天濟中藥飲片有限公司，經湖北中醫藥大學中藥鑒定教研室楊紅兵教授鑒定為傘形科植物當歸[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根}。老陳醋[山西水塔醋業股份有限公司，濃度：6 g·(100 mL)-1]，阿魏酸對照品(上海源葉生物科技有限公司，批號：H27J7L16718)，沒食子酸對照品(上海源葉生物科技有限公司，批號： YA0505YA14，20 mg，含量≥98%)，乙腈(色譜純，Thermo)，磷酸，超純水(優普超純水器制備，UPCII-20T)，其余試劑均為分析純級別。

2 方法與結果

2.1因素水平的設計 根據預試驗與相關文獻并結合實際，針對炮制工藝對飲片質量的影響，主要因素為輔料用量、炮制時間、炮制溫度，因此選取醋用量、炒制溫度、炒制時間3個因素，進行L9(34)正交設計實驗考察，以確定其合理炮制工藝條件參數。其因素水平設計見表1。

表1 因素水平

2.2實驗方法 取凈當歸片9 份，每份400 g，按表1設定組合條件，均用電熱炒藥機炒制，炒制溫度通過紅外測溫儀監測控制鍋底溫度。具體操作方法如下： 取凈當歸400 g，加醋拌勻，悶潤1 h，炒制，取出，放涼，篩去碎屑，封口袋密封，即得1～9號樣品。

2.3檢測項目 根據中藥炮制存性的基本要求，當歸為調血之要藥，現代研究表明其活血化瘀主要活性成分為阿魏酸、揮發油等，所含鞣質則具有較確切的止血功能，因此，將阿魏酸、揮發油、鞣質作為考察指標，分析不同炮制條件的影響。

2.3.1鞣質含量測定 將醋當歸樣品粉碎，過三號篩(篩孔內徑297 μm)，取粉末適量，精密稱定，按《中華人民共和國藥典》2015年版(四部)通則2202測定鞣質含量，同時進行干酪素吸附空白實驗，計算扣除空白值。結果見表 2。

2.3.2阿魏酸含量測定 將醋當歸樣品粉碎，過三號篩(篩孔內徑297 μm)，取粉末適量，精密稱定，按《中華人民共和國藥典》2015年版(一部)當歸項下含量測定法測定樣品阿魏酸含量。

2.3.3揮發油含量測定 將經不同炮制方法處理的醋當歸樣品粉碎，使能通過二號至三號篩(篩孔內徑297 μm)，取粉末適量，稱定質量，按《中華人民共和國藥典》2015年版(四部)通則2204揮發油測定法乙法測定，讀取揮發油量，并計算醋當歸中揮發油的含量(%)。

2.4評分標準 筆者在本實驗采用多指標加權評分法處理試驗數據：對應每個成分以含量最高的樣品定為100分，其余各次的試驗依次換算成相應的指標分數(計算公式為a/b×100%，其中a為實際值，b為9個值中最大值)。權重的分配，鞣質易與蛋白質結合，使創傷組織表面形成痂膜，減少分泌與血漿滲出，其藥理作用表現為能在血管破損處形成硬塊而止血。鞣質在內服或外用時，均具有止血和收斂的功效[2]。研究報道止血功效與炮制后鞣質含量增加呈正相關[3]。因此，將醋當歸中鞣質含量的權重設為60%；阿魏酸和揮發油作為當歸的主要有效成分，且2015年版《中華人民共和國藥典》規定其為評價當歸質量的指標性成分，其作用與當歸主要功效一致：阿魏酸具有抗炎、止痛、抗血栓形成等藥理作用[4-5]；當歸揮發油的主要成分藁本內酯，具有抗血栓、抑制血小板聚集、抗貧血、緩解平滑肌痙攣等作用[6-8]。因此各給予20%權重。

綜合質量評分=(各樣品中揮發油含量/9個樣品中揮發油最高含量)×20%+ (各樣品中阿魏酸含量/9個樣品中阿魏酸最高含量)×20%+(各樣品中鞣質含量/9個樣品中鞣質最高含量)×60%。

2.5結果 揮發油、阿魏酸、鞣質含量正交實驗成分測定和評分結果見表2，正交綜合評分方差分析表見表3。

方差分析表明，3個影響因素順序為B>A>C，在給定的水平條件下，即炒制溫度>醋用量>炒制時間，其中炒制溫度對炮制工藝的影響有顯著差異。結合直觀分析，優選工藝可定為A3B1C2，即15%醋，在進藥鍋溫為120 ℃下炒制6.5 min。

2.6驗證實驗 按優選的炮制工藝條件制備3批醋當歸樣品，對其進行揮發油、阿魏酸和鞣質含量測定。綜合評分均值為95.33，且各指標的RSD<0.5%(n=3)，說明制備出的醋當歸質量穩定，優選出的工藝穩定、可行、合理。實驗結果見表4。

2.7中試驗證 取3批生當歸各1.7 kg，按優選的炮制工藝進行中試試驗，由于參數放大，藥材炒制效率降低，根據實際中試炒制情況，因已達到工廠所用儀器生產的批量要求，故將炒制時間延長至13.5 min。結果見表5，綜合評分均值為96.21，且各指標的RSD<1%(n=3)，說明優選的工藝能適合于工業化生產。見表5。

3 討論

鞣質、阿魏酸和揮發油為當歸理血功效的活性成分，且含量受炮制條件的影響。因此，筆者在正交實驗中選擇鞣質、阿魏酸和揮發油含量(均以干燥品計算)作為正交實驗的主要評價指標。評分采用各指標當次實驗實際值占9次實驗最高值的比值按百分制進行打分，再通過不同權重進行統合計分，經統計得到優選工藝，即醋當歸的炮制工藝，確定為用15%醋，在120 ℃下炒制6.5 min。驗證實驗和中試實驗數據表明，優選的炮制工藝條件制備的醋當歸質量穩定，說明優選出的工藝穩定、合理、可行。

表2 揮發油、阿魏酸、鞣質含量正交實驗成分測定和評分結果

表3 正交綜合評分方差分析

表4 揮發油、阿魏酸、鞣質含量和綜合評分結果

表5 揮發油、阿魏酸、鞣質中試含量和綜合評分結果

研究顯示，影響當歸醋制效果的因素順序為炒制溫度>醋用量>炒制時間，其中醋當歸的炒制溫度對炮制品質量有顯著性影響，應給予重視。炒制溫度導致揮發性成分散失、阿魏酸含量減少、鞣質類成分增加，與文獻報道一致[9-10]。

本實驗以鞣質、阿魏酸和揮發油3項指標加權評分醋當歸的質量，能較好地體現醋當歸的質量內涵，評級方法合理，實驗結果可靠。優選的工藝為產業化生產提供了科學依據。

醋當歸的處方應用已有較長的歷史，但當今僅見于少數名中醫的用藥經驗，現行中藥飲片缺乏該品種，更無醋當歸的炮制方法和飲片標準。我國傳統炮制中藥特點就是通過炮制，從而達到改變藥性、擴大用藥范圍的目的。鑒于目前對于醋制當歸的炮制方法、炮制原理、臨床應用等方面的研究不足，總結歷史用藥經驗，結合現代科學技術，開展相關研究和探討，對傳承祖國醫學、傳承我國古代炮制經驗、炮制理論及豐富中醫臨床用藥具有重要意義。