TTF-1、Ki67及P63蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義 *

黃花英，劉 洋，周 瑩，魏 溪，陽 韜，張 金

江蘇大學附屬人民醫院：1.呼吸與危重癥醫學科；2.病理科，江蘇鎮江 212002

肺癌是源自支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤。在我國，其發病率居于所有惡性腫瘤的首位，患者被發現時多已處于晚期，預后較差。臨床上將肺癌按病理學表現分為非小細胞肺癌(NSCLC)與小細胞肺癌，其中NSCLC更常見，主要包括鱗狀細胞癌、腺癌等。流行病學研究表明，NSCLC的發病率為23.3/10 000～55.4/10 000[1]。目前，臨床上以外科手術、化療及生物靶向藥物等作為NSCLC的主要治療手段，但部分患者預后較差，易發生遠處轉移。肺癌確診與分型的金標準為病理檢查。對于中-高分化的NSCLC一般不難診斷，但是對于分化差腫瘤的分型,有時十分困難，甚至不能在光鏡下鑒別，特別在CT引導下經皮肺穿刺、經纖維支氣管鏡針吸活檢術或超聲支氣管鏡引導下經支氣管針吸活檢術檢查中，由于標本取材少、組織擠壓、細胞壞死或其他原因導致診斷困難。這就需要尋找適合NSCLC診斷的免疫組化檢測指標。

甲狀腺轉錄因子-1(TTF-1)是一種相對分子質量為40×103的核蛋白，屬于NKX2轉錄基因家族的主要成員，在肺泡上皮細胞和甲狀腺上皮細胞的分化中發揮著重要的作用。其還可調節肺泡表面蛋白A、B和支氣管無纖毛分泌細胞抗原基因表達，在患者病情進展過程中起著至關重要的作用[2]。細胞核相關抗原Ki-67(Ki67)是近年來廣大醫務人員公認的有效評估腫瘤細胞增殖活性的一種標志物，在肺癌中的作用已得到廣泛認可，且隨著肺癌患者病情的不斷加重以及淋巴結轉移，其表達明顯上升[3]。P63蛋白常表達于上皮組織基底層，在正常上皮組織的形成中發揮重要作用。P63蛋白在鱗狀細胞源性的各種良惡性腫瘤組織中表達，尤其在鱗狀細胞癌組織中表達增強，且表達水平及分布與鱗狀細胞癌細胞的癌變程度顯著相關[4]。在正常肺組織中，P63蛋白表達于支氣管儲備細胞中，不表達于肺泡上皮細胞、纖毛細胞或非上皮細胞。為了進一步揭示TTF-1、Ki67和P63蛋白在NSCLC患者中的表達情況以及這3種蛋白同患者臨床病理表現的關系，本研究收集了相關病例進行研究，以期為NSCLC的臨床診斷和預后評價提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇128例經病理檢查確診為NSCLC且于2013年9月至2019年5月在江蘇大學附屬人民醫院接受手術切除的患者，其中男93例，女35例；年齡30～86歲，平均(65.52±70.04)歲；組織學分級：中-高分化56例，低分化72例；遠處轉移78例，無遠處轉移50例；淋巴結轉移73例，無淋巴結轉移55例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期61例，Ⅲ～Ⅳ期67例。術前與術后，每例患者都未行化療、放療干預，且無肺以外的原發腫瘤。

1.2方法 采集研究對象NSCLC組織進行病理檢查，4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續切片(厚度4 μm)后進行免疫組化染色(SP法)。鼠抗人TTF-1單克隆抗體、鼠抗人Ki67單克隆抗體以及鼠抗人P63單克隆抗體均購自南京凱基生物制劑有限公司。

1.3判斷指標 TTF-1、Ki67及P63蛋白均定位于細胞核，陽性表達為棕色或黃色顆粒。在高倍鏡下進行觀察，取5個視野共計數100個細胞，按照染色強度及陽性細胞所占比例進行評分，具體標準如下：染色后細胞無著色或腫瘤細胞陽性表達<10%為陰性；腫瘤細胞陽性表達10%～25%為“+”；腫瘤細胞陽性表達>25%～50%為“++”；腫瘤細胞陽性表達在50%以上為“+++”。

1.4統計學處理 采用SPSS23.0統計軟件進行數據處理和分析。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1TTF-1、P63蛋白與Ki67在NSCLC組織內SP法染色結果 選取3張具有代表性的染色圖片，從圖1中可以觀察到TTF-1、Ki67和P63蛋白均定位于細胞核，呈棕褐色或棕黃色，灶性、片狀或彌漫分布。

2.2不同臨床特征NSCLC患者TTF-1、Ki67和P63蛋白陽性率的比較 這3種蛋白在NSCLC組織中都呈陽性表達。TTF-1表達與TNM分期、分化程度以及遠處轉移均有關(P<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期患者NSCLC組織TTF-1陽性率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，中-高分化患者NSCLC組織TTF-1陽性率明顯低于低分化患者(P<0.05)，有遠處轉移患者NSCLC組織TTF-1陽性率明顯高于無遠處轉移的患者(P<0.05)，而TTF-1陽性率與淋巴結轉移無關患者(P>0.05)。Ki67表達與TNM分期、遠處轉移、淋巴結轉移以及分化程度均有關(P<0.05)。P63蛋白表達與TNM分期、遠處轉移有關(P<0.05)，與淋巴結轉移及分化程度無關(P>0.05)。見表1。

注：A為TTF-1陽性表達；B為Ki67陽性表達；C為P63蛋白陽性表達。

表1 不同臨床特征NSCLC患者TTF-1、Ki67與 P63蛋白陽性率比較[n(%)]

3 討 論

肺癌是常見的惡性腫瘤，其發病率和病死率在惡性腫瘤中較高。雖然肺癌的治療手段不斷更新，患者的生存率有所提高，但總體療效仍不理想，5年生存率并沒有明顯提高。近年來隨著分子生物學技術的發展和對肺癌發生、發展機制認識的不斷深入，分子靶向治療逐漸成為肺癌治療的主要手段，而且也取得了較為滿意的治療效果，但有些靶向治療或聯合治療方案與腫瘤組織學類型密切相關。在實際工作中，有些肺癌的組織學類型僅靠光鏡難以確診，必須借助免疫組化法來確診。隨著免疫組化法在肺癌診斷中的應用，研究表明，多種抗體聯合檢測在肺癌組織學分類中的診斷意義遠遠優于單一抗體[5]。并且肺癌的組織學類型和免疫表型比較復雜，尋找一套簡單而特異的抗體組合顯得尤為重要。本文通過檢測TTF-1、Ki67、P63蛋白在128例NSCLC患者中的表達，發現這3種蛋白對于NSCLC的鑒別診斷具有重要意義。

TTF-1由常染色體14q13的單一位點基因所編碼，能參與調控許多基因的表達，主要分布于甲狀腺、間腦和呼吸道上皮[6]。近年來，TTF-1被認為是肺腺癌中最敏感、特異的標志物，已被廣泛用于原發性肺癌和轉移性肺癌的鑒別診斷。汪潛云等[7]研究發現，在58例NSCLC患者中，TTF-1陽性是一個不良的預后因素，并且與性別、年齡、腫瘤部位、組織分級、淋巴結轉移及TNM分期均無關(P>0.05)。本研究發現，TTF-1表達與TNM分期、分化程度以及遠處轉移均有關(P<0.05)，但是與淋巴結轉移無關(P>0.05)。

Ki67基因定位于第10號染色體，其蛋白質產物定位于細胞核，由相對分子質量為345×103和395×103的兩條多肽鏈組成，其在G1后期開始出現，在S期和G2期逐漸升高，M期達到高峰，有絲分裂結束后迅速降解消失，G0期無表達[8]。研究表明，多種實體惡性腫瘤中Ki67的陽性率要遠遠高于正常組織，并且與腫瘤的發生發展、浸潤轉移及預后有關，Ki67表達的高低，對評價細胞增殖活性，研究腫瘤的生物學行為和預后具有重要意義[9]。紀勇等[10]研究發現，在67例肺癌手術患者中，淋巴結轉移組Ki67的表達高于無淋巴結轉移組;TNM分期Ⅲ期組Ki67的表達高于Ⅰ、Ⅱ期組；低分化組的表達高于高分化組。這提示Ki67的表達可能與腫瘤的浸潤轉移、TNM分期和分化程度有關。本研究發現，Ki67表達與TNM分期、遠處轉移、淋巴結轉移以及分化程度均有關(P<0.05)。這提示Ki67表達越高，腫瘤組織細胞增殖越活躍，分化程度越低，患者預后差。

P63基因是P53基因家族成員之一，在人和鼠的上皮組織(包括表皮、宮頸、泌尿道及前列腺等具有鱗狀上皮分化潛能的基底層細胞、副基底層細胞及肌上皮細胞)中廣泛而有選擇性地表達[11]。P63基因可能對肺鱗狀細胞癌的發生、發展起著特別的作用。在本組128例NSCLC組織內，P63蛋白表達與TNM分期、遠處轉移有關(P<0.05)，與淋巴結轉移及分化程度無關(P>0.05)。GURGUS等[12]研究發現，檢測P63蛋白和TTF-1 的表達可用于區分小細胞肺癌和低分化的NSCLC。因此，TTF-1、Ki67和P63蛋白可能是診斷NSCLC的有效生物標志物，對于判斷NSCLC的惡性程度和預后具有一定的臨床意義。