研究無創產前DNA診斷高齡孕婦異常核型的價值

馬志慧

(河北省承德市中醫院檢驗科， 河北 承德 067000)

高齡孕婦主要是指分娩年齡≥35歲的孕婦，近年來，由于我國二孩政策的全面開放，加之生育年齡的不斷推遲，臨床上高齡孕婦人數日益增多[1]。然而，由于高齡孕婦機體狀態出現顯著的改變，不但會增加妊娠并發癥發生風險，同時亦會導致胎兒染色體非整倍體的發生幾率增加，從而增加了新生兒先天性缺陷疾病的發生風險，不利于我國人口素質的提高[2]。因此，針對高齡孕婦，國內外的專家學者均建議實施產前診斷，以確定胎兒染色體異常情況，避免先天性缺陷兒的出生。羊膜腔穿刺羊水細胞染色體核型分析是全球范圍內所公認的產前診斷有效手段之一，其在胎兒染色體異常檢測方面具有一定的價值。但該檢測方式屬于有創新檢查，可能引發早產、宮內感染以及流產的風險，存在一定的局限性，不利于臨床推廣普及。隨著近年來分子生物學技術以及醫學遺傳學的逐漸發展，無創產前DNA檢測(NIPT)技術開始被應用臨床孕婦產前診斷中。迄今為止，國內關于高齡孕婦NIPT檢測的相關研究并不多見。鑒于此，本文通過探究NIPT診斷高齡孕婦異常核型的價值并進行分析，旨在為NIPT用于高齡孕婦產前診斷中提供理論依據。現作以下報道。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院從2016年1月至2019年1月收治的自愿接受NIPT檢測的高齡孕婦1467例作為研究對象。年齡35～47歲，平均年齡(39.74±2.33)歲。納入標準：①年齡≥35歲；②均自愿接受NIPT檢測；③均為單胎妊娠；④孕周在12～24周之內。已獲得納入對象及其家屬同意，并得到醫院倫理委員會批準。

1.2研究方法:①高齡孕婦外周血采集和處理：通過EDTA-K2管分別采集所有受試者的外周血5mL，于4℃條件下，以4000r/min作為離心條件，進行時長10min的離心處理。隨后在同樣的溫度條件下，以12000r/min作為離心條件，進行時長10min的離心處理。獲取血漿保存在-20℃冰箱中備用，實施后續大規模平行測序。②胎兒游離DNA采集：通過離心柱法提取孕婦外周血血漿游離DNA的提取，具體操作務必以試劑盒說明書進行，相關試劑盒購自華大生物科技有限公司。③文庫的制備及DNA測序：具體方式為半導體測序法，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，相關檢測試劑盒為胎兒染色體非整倍體(T21、T18、T13)檢測試劑盒。嚴格遵循說明書操作完成孕婦外周血血漿游離DNA文庫的構建。④測序結果分析：通過BGISEQ-100完成測序后，將測序數據與人參考基因組進行比對，統計21號、18號以及13號染色體的有效數據占總有效數據的比例。并對上述相關染色體的Z值進行計算。通過基于二元假設的Z-score值對某條染色體是否存在拷貝數目異常進行評價。評價標準：若Z值≥3，提示非整倍體高風險，反之，若Z值<3，提示非整倍體低風險。⑤核型分析：以羊水穿刺檢測完成核型分析確診，具體操作如下：于超聲診斷的引導下，于妊娠18～24周進行羊膜腔穿刺術，采集羊水20mL。穿刺獲得的標本行常規羊水細胞培養、制片以及G帶顯色。通過蔡司全自動染色體核型分析系統采集、保存染色體核型圖。

1.3觀察指標：分析24例行NIPT檢測異常孕婦的結果，對比24例行NIPT檢測結果異常和羊水核型驗證結果，以及不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率。

1.4統計學方法:以SPSS20.0軟件實施數據的分析，計數數據通過n(%)表示，予以χ2檢驗。P<0.05即為差異顯著。

2 結 果

2.124例行NIPT檢測異常孕婦的結果分析：1467例高齡孕婦行NIPT檢測異常人數24例，其中6例提示為21三體高風險，4例提示為18三體高風險，3例提示為13三體高風險，7例提示為性染色體異常，4例提示為其他染色體異常。24例孕婦均行羊水穿刺檢測，確診胎兒染色體異常疾病人數13例，包括21三體6例，18三體3例，13三體1例，性染色體異常2例，其他染色體異常1例。剩余11例羊水驗證核型正常孕婦繼續妊娠，見表1。

表1 24例NIPT檢測異常孕婦的結果分析

表2 24例行NIPT檢測結果異常和羊水核型驗證結果對比

2.224例行NIPT檢測結果異常和羊水核型驗證結果對比:NIPT檢測與羊水核型驗證結果的符合率為54.17%，其中NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、28.57%、25.00%，見表2。

2.3不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率對比:年齡≥40歲高齡孕婦異常核型檢出率為1.82%(9/494)，相較于年齡35～39歲高齡孕婦的0.41%(4/973)，明顯更高(P<0.05)，見表3。

表3 不同年齡高齡孕婦的異常核型檢出率對比

3 討 論

我國屬于出生缺陷兒高發國家之一，相關數據表明，我國出生缺陷兒的發生率約為5.6%，且每年增加的出生缺陷兒例數約為90萬[3]。而染色體異常是引起出生缺陷的最主要因素之一，在新生兒中的發生率可達0.6%。其中21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征的發生率在圍生期常染色體非整體中占比約為95%[4,5]。因此，對孕婦實施染色體異常的篩查顯得尤為重要，亦是產前診斷重要內容之一[6]。羊水穿刺檢測是染色體異常檢測的“金標準”，但作為有創檢測手段之一，羊水穿刺檢測可能對胎兒造成誤傷，甚至引發流產以及宮內感染等，加上該技術檢測所需時間較長，技術要求較高以及工作強度較大等缺陷，導致大部分的高齡孕婦存在不同程度的顧慮，繼而拒絕接受該項檢查，從而可能導致染色體異常胎兒的漏診，最終導致出生缺陷兒的出生，增加了家庭及社會負擔[7]。

本文結果發現，NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、28.57%、25.00%。其中司艷梅等的研究報道表明[8]，NIPT檢測21三體、18三體、13三體、性染色體異常、其他染色體異常與羊水核型驗證結果的符合率分別為100.00%、75.00%、33.33%、37.50%、25.00%。兩項該研究高度一致，這提示了NIPT檢測應用于高齡孕婦中，對21三體、18三體的檢測符合率較高，可能成為高齡孕婦產前染色體異常診斷的有效手段之一。其中NIPT主要是通過大規模平行測序技術深度測序母體外周血中的游離DNA，從而獲取胎兒染色體的信息，并得出染色體數目異常風險程度[9]。然而，NIPT檢測與羊水核型驗證結果的符合率為54.17%，這提示了NIPT當前僅可作為產前染色體非整倍體評估的一種補充檢測手段，尚且無法完全替代細胞遺傳學診斷。分析原因，筆者認為NIPT所篩查的目標疾病相對較少，僅針對胎兒的21/18/13-三體綜合征等非整倍體異常，尚且無法有效對胎兒染色體異位、微缺失等異常疾病進行診斷。與此同時，孕婦若近期接受過異體輸血、細胞治療以及移植手術等，亦或是孕周計算不準確，均可能導致游離胎兒DNA的含量相較檢出量更低，進一步影響檢測結果。此外，染色體三體型疾病中具有部分嵌合體，從而會導致NIPT檢測的靈敏度以及特異度下降。另外，年齡≥40歲高齡孕婦異常核型檢出率為1.82%，相較于年齡35～39歲高齡孕婦的0.41%明顯更高(P<0.05)。這和既往研究高度一致[10]，說明了隨著年齡的不斷提高，高齡孕婦胎兒染色體異常疾病的發生風險隨之增加。究其原因，筆者認為隨著年齡的不斷增長，孕婦的卵巢儲備功能下降，卵泡刺激素水平隨之升高，卵泡期縮短，從而使得監督卵泡發育機能可能異常，導致卵母細胞減數分裂過程中出現染色體的異常分離，進一步引起胎兒染色體異常的發生。

綜上所述，NIPT檢測可用于高齡孕婦產前診斷中，且對21三體、18三體的檢測價值較高。然而，該檢測技術尚且無法取代傳統有創檢測技術，仍需進一步研究。