氨茶堿片含量測定的不確定度評定

北京市朝陽區食品藥品安全監控中心（100124）韓鋒 錢鈺娟 劉開玉

氨茶堿為茶堿與乙二胺復鹽，其藥理作用主要來自茶堿，乙二胺使其水溶性增強。本品對呼吸道平滑肌有直接松弛作用。能夠增強膈肌收縮力，改善呼吸功能。適用于支氣管哮喘、喘息型支氣管炎、阻塞性肺氣腫等緩解喘息癥狀；也可用于心源性肺水腫引起的哮喘。茶堿的毒性與常出現在血清濃度為15～20μg/ml，特別是在治療開始，早期多見的有惡心、嘔吐、易激動、失眠等，當血清濃度超過20μg/ml，可出現心動過速、心律失常，血清中茶堿超過40μg/ml，可發生發熱、失水、驚厥等癥狀，嚴重的甚至呼吸、心跳停止致死[1]。因此在日常監督中，氨茶堿片的含量應在藥典標準規定的區間范圍內，以保證用藥安全。

測量不確定度，簡稱不確定度，是根據所用到的信息，表征賦予被測量值分散性的非負參數[2]。不確定度可以度量某個結果與其他結果相吻合的程度，從而度量結果的可信度，以此證明結果的適宜性和質量[3]。本文參考國家計量技術規定JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》，并查看相關材料及文獻，對氨茶堿片含量測定（無水茶堿和乙二胺）進行不確定度的分析與評定，提高被測量結果的準確性和可信性。

1 材料與方法

1.1 無水茶堿含量測定

1.1.1 儀器與試劑 TU-1901型紫外分光光度計（普析通用公司）；Mettler-XP105DR型電子天平 (瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.01mol·L-1氫氧化鈉（分析純）溶液；水為純化水。200ml容量瓶，250ml容量瓶及5ml單標移液管(均為A級)。氨茶堿片[規格：0.1g，批號：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實驗溫度：27℃，實驗用移液管及容量瓶校正溫度：20℃。

1.1.2 樣品的處理及測定[4]取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于氨茶堿100mg），置200ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液20ml與水60ml，振搖10分鐘使氨茶堿溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，置250ml容量瓶中，加0.01mol·L-1氫氧化鈉溶液至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在275nm的波長處測定吸光度，按C7H8N4O2的吸收系數為650計算，即得。

1.2 乙二胺含量測定

1.2.1 儀器與試劑 Mettler-XP105DR型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.1mol·L-1鹽酸滴定液（國家化學試劑質檢中心，標定濃度：0.1001mol·L-1）；水為純化水。25ml滴定管(A級)。氨茶堿片[規格：0.1g，批號：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實驗溫度：26℃，實驗用滴定管校正溫度：20℃。

1.2.2 樣品的處理及測定[4]取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于氨茶堿0.5g），加水50ml，微溫使溶解，放冷，加茜素磺酸鈉指示液8滴，用鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）滴定至溶液顯黃色。每1ml鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）相當于3.005mg的C2H8N2。

2 數學模型

2.1 無水茶堿含量測定

式中：A275nm：275nm處的吸光度；m：樣品稱樣量；：吸收系數；m20：20片片重；：稀釋倍數；標示量：0.1g。

2.2 乙二胺含量測定

式中：V：消耗鹽酸滴定液的體積；T：滴定度；C：鹽酸滴定液的濃度；m：樣品稱樣量；m20：20片片重；標示量：0.1g。

3 不確定度的來源和評定

實際實驗中采用平行測定法，由于兩次測量值接近，故選取第一組測量值計算不確定度。

3.1 無水茶堿含量測定的不確定度

3.1.1 實驗數據 本品規格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.1043g，m2=0.1028g；吸光度：A275nm(1)=0.529，A275nm(2)=0.523；計算得含無水茶堿為氨茶堿標示量：F1=79.62%，F2=79.87%，F=79.7%。

3.1.2 樣品稱量（m）引入的不確定度 電子天平校正產生的不確定度，按檢定證書提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉化為標準不確定度：

3.1.2.1 精密稱定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：

3.1.2.2 精密稱取樣品適量（約相當于氨茶堿100mg）引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.1.3 玻璃容量器以及溫度變化引入的不確定度

3.1.3.1 溶解氨茶堿所用的200ml容量瓶引入的不確定度 使用200mlA級容量瓶，檢定證書提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉化為標準不確定度

3.1.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。實驗溫度27℃，玻璃容量器校準溫度20℃，水的體積膨脹系數為2.1×10-4℃-1；產生的體積變化為±（200×7×2.1×10-4）=±0.294ml。

3.1.3.3 精密量取續濾液5ml所用的5ml單標線吸管引入的不確定度 使用5mlA級單標線吸管，檢定證書提供的最大允差：±0.015ml；按三角分布轉化為標準不確定度0.015/=0.0061ml。

3.1.3.4 溫度變化引入的不確定度 產生的體積變化為±（5×7×2.1×10-4）=±0.0074ml；按均勻分布轉化為標準不確定度。

3.1.3.5 定容氨茶堿所用的250ml容量瓶引入的不確定度 使用250mlA級容量瓶，檢定證書提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉化為標準不確定度。

3.1.3.6 溫度變化引入的不確定度 產生的體積變化為±（250×7×2.1×10-4）=±0.3675ml；按均勻分布轉化為標準不確定度。

3.1.4 紫外分光光度計引入的不確定度 檢定證書給出的定量測量重現性為0.3%，按均勻分布，。

3.1.5 重復性測定引入的不確定度 采用極差法評定，即F1=79.62%，F2=79.87%，極差系數C＝1.13，n=2；。

3.1.8 擴展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.46%=0.92%。

本次氨茶堿片中無水茶堿含量測定結果為氨茶堿標示量的(79.7±1.0)%，k=2。

3.2 乙二胺含量測定的不確定度

3.2.1 實驗數據：本品規格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.5107g，m2=0.5103g；滴定結果：V1=22.60ml，V2=22.55ml。

計算得含乙二胺為氨茶堿標示量：F1=13.584%，F2=13.564%，F=13.57%。

3.2.2 樣品稱量（m）引入的不確定度 電子天平校正產生的不確定度，按檢定證書提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉化為標準不確定度：。

3.2.2.1 精密稱定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.2.2.2 精密稱取樣品適量（約相當于氨茶堿0.5g）引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.2.3 鹽酸滴定液滴定體積引入的不確定度

3.2.3.1 25ml酸式滴定管引入的不確定度使用25ml A級酸式滴定管，檢定證書提供的最大允差：±0.04ml。

按三角分布轉化為標準不確定度0.04/=0.016ml。

3.2.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。

實驗溫度26℃，玻璃容量器校準溫度20℃，水的體積膨脹系數為2.1×10-4℃-1，產生的體積變化為±（22.60×6×2.1×10-4）=±0.0285ml。

按均勻分布轉化為標準不確定度0.0285/=0.016ml；。

3.2.4 鹽酸滴定液（C）引入的不確定度 鹽酸滴定液（0.1mol/L），購自國家化學試劑質檢中心，標定濃度為0.1001mol·L-1，擴展不確定度0.2%，計算相對標準不確定度：。

3.2.5 重復性測定引入的不確定度 采用極差法評定，即F1=13.584%，F2=13.564%，極差系數C＝1.13，n=2。。

3.2.6 滴定度（T）引入的不確定度 滴定度由藥典直接給出，未給出不確定度，忽略不計。

3.2.8 擴展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.026%=0.052%。本次氨茶堿片中乙二胺含量測定結果為氨茶堿標示量的(13.57±0.06)%，k=2。

4 討論

在藥物質量分析中運用不確定度測量有助于分析各種不確定來源對試驗結果的影響，對藥物分析結果具有重要意義，同時可以幫助實驗室控制數據質量，提高工作水平，分析關鍵因素，有針對性地進行有效的質量保證和控制措施，以確保過程穩定并受控。本文通過分析及計算氨茶堿片含量測定方法中，各個不確定度的來源及數值，可以看出，對實驗結果影響較大的因素包括稱量、稀釋、儀器及重復性等。在實驗中，應盡量避免過小的稱樣量；應盡量減少稀釋步驟，并盡量選擇較大體積的容量器；實驗室所用儀器應按時檢定及校準，以確保儀器靈敏度符合測量精度要求；應盡量增加實驗次數，減小重復性引入的不確定度，提高結果質量。