SERPINH1在結腸腺癌中的表達及臨床意義

宋佳星,王 曌

(吉林大學第一醫院 檢驗科，吉林 長春130021)

結直腸癌(CRC)是全世界較為常見的癌癥和癌癥死亡原因。在診斷時，男性和女性患者患結腸癌的中位年齡分別為68歲和72歲，而直腸癌患者的中位年齡均為63歲[1]。流行病學調查結果顯示，2008年至2016年期間，CRC發病率每年增加6%[2,3]。確診后五年的總生存率(OS)約為60%[1,4]。盡管在疾病的治療上我們取得了一些進展，但轉移性CRC表現出不良的預后，并且在現有技術水平下，僅有14%的患者在診斷后5年內存活[1,4]。因此，發現一個可以輔助判斷結直腸癌轉移及預后的指標對于改善患者的生存率具有一定的現實意義。本研究通過TCGA數據庫檢索，獲取差異表達基因SERPINH1，通過免疫印跡驗證其差異表達水平，同時分析其表達水平與結腸腺癌腫瘤轉移與預后之間的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象將手術中切取的新鮮腫瘤組織、正常組織收集于無菌容器內，PBS沖洗處理，液氮速凍。

1.2 方法通過TCGA數據庫檢索，獲取差異表達基因SERPINH1，免疫印跡方法驗證其差異表達情況，免疫組化觀察其表達水平與結腸腺癌腫瘤轉移與預后之間的關系。

1.3 主要試劑中性樹膠，蛋白定量試劑盒，無水乙醇，蛋白抽提試劑盒，DAB 試劑盒，二甲苯。

2 結 果

2.1 TCGA數據庫檢索差異表達基因SERPINH1

通過在線數據庫UALCAN，檢索TCGA數據庫中結腸腺癌基因表達譜，搜索SERPINH1基因在結腸腺癌以及癌旁組織中的轉錄水平存在差異。如圖1所示。

圖1 TCGA數據庫檢索差異表達基因SERPINH1

2.2 SERPINH1在結腸腺癌組織與癌旁組織表達水平的比較

通過免疫印跡法，觀察結腸腺癌以及癌旁組織中SERPINH1 的表達水平，SERPINH1在結腸腺癌的腫瘤組織的表達水平顯著高于配對的癌旁組織，見圖2。

A:結腸腺癌組織；B：結腸腺癌癌旁組織

2.3 SERPINH1在結腸腺癌組織與癌旁組織的表達意義

通過免疫組化法，我們觀察到SERPINH1的表達，如圖3。分析本研究收集的50例組織樣本，發現SERPINH1的高表達與腫瘤的轉移相關(P<0.05),見表1。

3 討論

結腸直腸癌作為全世界較為常見癌癥同時也是導致癌癥死亡的比較常見的原因[5]，手術切除是CRC的唯一治療方法，特別是對于局限性腫瘤的患者。治愈性手術切除通常涉及所有可能受影響的淋巴結(LN)的初步、標準化和系統性解剖，以確定腸切除的程度。最近的一項meta分析揭示了原發性CRC的組織病理學特征，可以預測LN轉移，并分類如下(按重要性降序排列)：淋巴侵襲，腫瘤深度，腫瘤分化差和腫瘤出芽[6]。然而，這是通過對手術后切除的腫瘤標本的蘇木精和伊紅染色來確定的。因此，開發用于準確檢測術前LN轉移情況的檢測方法對于判斷使用例如微創手術或新輔助化療等方式是重要的。

圖3 SERPINH1在結腸腺癌及癌旁正常組織中的陰性表達(×200)

表1 SERPINH1在結腸腺癌表達水平與腫瘤轉移的關系

HSP47是染色體11q13.5上的由SERPINH1編碼的產物，同時也是細胞外基質(ECM)的組分，在人類常見的癌癥中上調表達[7]。在應激條件下，HSP47在細胞表面上的表達表明HSP47在腫瘤發生和隨后的腫瘤進展時期可以調節細胞遷移，表現為腫瘤向周圍組織的侵襲和轉移。臨床上，與正常組織相比，HSP47在肺癌，膠質瘤，食管鱗狀細胞癌和潰瘍性結腸炎相關腫瘤中的表達增加[7-12]，并且一些研究報道了HSP47的表達在惡性疾病中與預后相關[10,13,14]。

在本研究中，我們使用生物信息學方法觀察SERPINH1基因在結腸腺癌中的差異表達；然后，我們使用免疫印記方法，驗證其產物HSP47在結腸腺癌腫瘤組織中的表達。為了進一步確定HSP47的差異表達，我們接下來使用免疫組織化學方法來確定它們在CRC組織和鄰近的正常結腸黏膜中的表達水平。研究顯示，結腸腺癌組織中HSP47的高表達與腫瘤的轉移相關。