應城市11455例HPV基因分型篩查宮頸病變臨床價值研究

彭琪彥

(湖北省應城市人民醫院 病理科，湖北 應城432400)

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌，是目前唯一一個明確了病因的惡性腫瘤[1]，且發病年齡逐漸下降，發病率和病死率逐年上升。宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)是宮頸浸潤癌的癌前病變，人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)主要侵犯人生殖道，誘發生殖道疾病。根據致病力和危險性大小，HPV分為低危型和高危型，其中，低危型多引起肛門、尿道口等部位尖銳濕疣及低度CINI，而多項研究顯示，持續的高危型人乳頭瘤病毒(high risk human papillomavirus,hr-HPV)感染是宮頸癌及其癌前病變的主要病因[2]。隨著實驗室檢測技術的發展，hr-HPV DNA檢出靈敏度遠高于宮頸液基薄層細胞學(TCT)。本研究通過對應城市11455例宮頸分泌物HPV基因分型檢測，以及結合TCT和宮頸組織病理學診斷，探討hr-HPV不同亞型在宮頸病變進程中的臨床價值，旨在對宮頸病變的預防和防治提供指導依據，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

經應城市人民醫院醫學倫理委員會批準，選取2017年1月至2019年6月在本院婦科就診的11455例門診及住院患者，年齡18-85歲(42.33±11.21歲)，收集其宮頸脫落細胞HPV基因分型檢測以及TCT結果。根據患者年齡，將其分為五組[≤20歲組，(21-30)歲組，(31-40)歲組，(41-50)歲組，≥51組]。此11455例中，有339例患者行宮頸組織學活檢。

1.2 標本采集

由婦科醫生以窺陰器暴露患者宮頸口，用棉拭子清潔陰道口，擦去宮頸表面黏液，用一次性專用宮頸刷在宮頸口順時針輕輕轉動4-5圈，慢慢抽出宮頸刷，將其放入TCT專用保存管中，將宮頸刷折斷，刷頭保留在管中，重復一次，取HPV標本，蓋緊蓋子立即送至病理科。

1.3 檢測方法

1.3.1HPV分型檢測 儀器是BHF-V1核酸芯片檢測儀，試劑來源于北京博暉創新光電技術股份有限公司提供的HPV核酸檢測試劑盒(生物芯片法)。

1.3.2TCT制片、閱片 按本院病理科TCT標本制作流程，將標本制成直徑約2 cm的液基薄層片，再行巴式染色，由本科室診斷醫師按照2001版TBS診斷標準[3]進行閱片。診斷標準概括如下：(1)未見上皮內細胞病變(NILM)；(2)非典型鱗狀細胞(ASC)，包括無明確診斷意義的非典型鱗狀細胞(ASC-US)和非典型鱗狀上皮細胞但不除外高度鱗狀上皮內病變(ASC-H)；(3)鱗狀上皮內低度病變(LSIL)和鱗狀上皮內高度病變(HSIL)；(4)非典型腺細胞(AGC)；(5)鱗癌(SCC)；以ASC-US及以上病變定為細胞學異常。

1.3.3宮頸組織學活檢標本制片、診斷 從細胞學異常患者中選取339例患者，由本院婦科醫生經陰道鏡下觀察宮頸上皮變化，異常者則進行宮頸多點活檢，標本經10%中性福爾馬林固定后送至本院病理科，由技術組常規石蠟切片、HE染色，診斷醫師光鏡觀察。參照Richard宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)分級標準[4]，分為≤CINI、CINII、CINIII、鱗癌、腺癌，以CINII級及以上病變定為病理學異常。

1.4 統計學分析

應用SPSS20.0系統軟件對所有數據進行統計分析，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各年齡段hr-HPV陽性及TCT結果

由表1可以看出，hr-HPV陽性率達28.60%，TCT檢測陽性率4.77%，且(31-40)歲組陽性率高于其他組，各年齡組hr-HPV感染率差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 各年齡段hr-HPV陽性及TCT結果(n(%))

2.2 hr-HPV各亞型感染分布比率

3276例hr-HPV陽性中，包括單一感染與混合感染。各亞型感染分布比率見圖1，感染率由大到小依次為52、16、53、58、66、59、39、51、18、56、73、33、35、68、82、83、31、45。

圖1 hr-HPV亞型感染分布圖(占hr-HPV陽性百分比%)

2.3 339例患者組織學活檢結果與hr-HPV亞型感染的關系

339例組織學活檢結果顯示，≤CINI 144例，CINII 72例，CINIII 99例，鱗癌21例，腺癌3例。選取hr-HPV感染率排前9位亞型與活檢結果進行分析，見表2。HPV與活檢總符合率為66.38%，感染率較高的主要是16、52、18、33、59亞型。

3 討論

宮頸癌是由于hr-HPV持續和反復感染所導致的一種婦科惡性腫瘤，嚴重危害婦女生殖健康。有資料顯示，CIN及宮頸癌中HPV檢出率高達90%，2007年，國際癌癥中心已提出，可以將HPV分型作為宮頸癌篩查手段之一[5]。因其發病病因明確，且及早治療可以治愈，所以對宮頸癌的普篩和預防，可以降低癌癥發病率和病死率。CIN分為≤CINI、CINII、CINIII、CC幾個階段，而這幾個階段的演變和轉化需要幾年乃至十余年的時間，級別越高，治愈幾率越小。

表2 hr-HPV亞型與活檢的關系(含混合感染)

本院于2016年引進HPV基因分型檢測，采用基因芯片技術，對HPV各個亞型的檢測更為清晰，其中包括6種低危型(6，11，42，43，44，81)與18種高危型(16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83)。結合TCT與宮頸組織病理學技術，對于應城市婦女宮頸病變有了較為詳細的資料統計。因持續的hr-HPV感染是導致CIN的重要原因[6]，因此本文主要針對hr-HPV的感染情況進行分析研究。

本研究中，hr-HPV陽性率達28.60%，TCT檢測陽性率4.77%，可見HPV檢測靈敏度高于TCT。然而TCT可以更直觀的顯示宮頸細胞病變情況，故而一般將HPV與TCT進行聯合篩查。定期對婦女進行HPV和TCT篩查，已成為對婦女生殖保健的重要項目。(31-40)歲組的TCT陽性率高于其他組，表明宮頸細胞病變與年齡段有關，可能由于(31-40)歲年齡的婦女已婚已育，分娩時產道損傷，卵巢功能隨著年齡逐漸下降，生活壓力較大，導致此年齡段女性免疫功能相對較弱[7]。因此，應加強對(31-40)歲年齡段的女性篩查。

研究結果顯示，在3276例hr-HPV陽性中，包括單一感染與混合感染。有研究表明，多重混合感染比單一感染造成CIN的風險更高[8]。各亞型感染率由大到小依次為52、16、53、58、66、59、39、51、18、56、73、33、35、68、82、83、31、45。由結果可見，HPV與活檢總符合率為66.38%，且不同的亞型所導致的病變程度有所不同，HPV16、52、18、33、59感染易導致CINIII，鱗癌主要由16、52亞型感染發展而來，腺癌主要由18亞型感染所致。據資料顯示，國內各個不同地區hr-HPV感染型別也有所不同[9]。因此，應城市婦女需要主要防范16、52、18、33、59這幾種亞型感染。

近年來，HPV疫苗逐步進入市場，但疫苗所包含的亞型有所限制，以及商業化帶來一系列問題，使得接種后人群更加重視自身HPV檢測。而且，了解地區亞型感染差異，可以有助于選擇HPV疫苗的種類。本實驗室所采用的是PCR體外擴增和DNA反向斑點雜交法相結合的DNA芯片技術，檢測24種HPV亞型。其敏感性好、特異性高、重復性好，微量點樣技術使各樣本檢測形成獨立通道，無交叉污染。同時，HPV檢測可以彌補TCT產生的假陽性和過度治療缺陷，HPV檢測可以降低CINIII的發病率，提高宮頸腺癌的檢出率[10]。

綜上所述，應加強對應城市婦女HPV檢測，特別是重點防治16、52、18、33、59亞型感染，對于提早發現宮頸癌及癌前病變具有十分重要的意義。