HPLC法測定芍藥花瓣中紫云英苷的含量

李洪芹，馬昌豪，王澤海，羅盼生*

(1.菏澤學院，山東 菏澤 274015；2.菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274015)

芍藥(PaeonialactifloraPall.)是毛茛科芍藥屬多年生宿根草本植物，原產于東南亞，其根可以入藥，是中藥材白芍和赤芍的重要來源，具有重要的藥用價值，同時具有較高的觀賞價值[1]。菏澤作為芍藥的四大主產區之一，具有悠久的種植歷史，其品種多、花色豐富、花型多變。相關文獻[2-4]研究表明芍藥富含黃酮、單萜類、三萜及甾體類化合物，此前研究多集中芍藥的根中的各類成分和藥理作用，并未對花瓣的質量情況進行研究，在前期對芍藥花瓣的指紋圖譜研究基礎上，采用高效液相色譜法對芍藥花瓣中的紫云英苷含量進行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2030高效液相色譜儀、XS-105電子天平(梅特勒公司)、FRQ-1006HT超聲波清洗器(杭州法蘭特)

1.2 試藥

紫云英苷(批號：CIV-471295、純度為98.96%)購于斯坦福標準物質，乙腈(色譜純，默克化工)、磷酸(色譜純，天津科密歐)。

1.3 樣品

樣品來自于菏澤曹州牡丹園，經菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院羅盼生主任醫師鑒定為毛茛科植物芍藥的花瓣。

2 方法與結果

2.1 方法學驗證

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

流動相：以乙腈為流動相A，0.1%磷酸水溶液為流動相B，按照表1進行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫

檢測波長：347 nm，流速：1 mL/min。理論塔板數按紫云英苷峰計算，應不得低于3000，結果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.1.2 供試品溶液制備

稱取芍藥花瓣粉末(新鮮花瓣，50℃干燥至恒定重量，粉碎，過3號篩)1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入65%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率40 kHz)，冷卻至室溫，用65%乙醇補足失重，濾過，取續濾液，即得。

2.1.3 對照品溶液制備

稱取紫云英苷對照品8.42 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為儲備液，精密量取儲備液3 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，作為對照品溶液。

2.1.4 線性關系考察

精密量取紫云英苷對照品儲備液3 mL至10 mL量瓶中，在2.1.1色譜條件下分別進樣2、8、10、15、20、30 μL，以峰面積值為縱坐標(y)，進樣量(μg)為橫坐標(x)繪制標準曲線，并進行回歸，得標準曲線為y=18353.21x-16289.01(r=0.9997)，結果紫云英苷在0.05～0.75 μg范圍內線性關系良好。

2.1.5 精密度考察

在2.1.1色譜條件下，精密吸取對照品10 μL，連續進樣6次，測定峰面積，紫云英苷的RSD為0.63%，表明儀器具有良好的精密度。

2.1.6 重復性考察

取芍藥干燥花瓣的粉末，按照2.1.2項下供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，參照2.1.1項色譜條件下測定，結果紫云英苷的質量分數的 RSD為1.20%。表明該方法具有良好的重復性。

2.1.7 穩定性考察

取供試品溶液一份，分別在2.1.1項色譜條件下于2、12、36、48 h進樣，測定紫云英苷峰面積，其RSD為0.81%，表明供試品溶液在48 h內基本穩定。

2.1.8 加標回收率考察

取本次芍藥花瓣(紫云英苷含量為0.092%)粉末適量，稱取6份，每份0.5 g，精密稱定，每份精密加入對照品儲備液(0.8332 mg/mL)0.50 mL，參照2.1.2項方法制備供試品溶液，精密吸取上述溶液10 μL，測定加樣回收率，結果表明該方法的準確度符合要求。結果見表2。

表2 加標回收率結果(n=6)

2.2 結果

取3份樣品，分別按2.1.2項下制備樣品溶液，照2.1.1項下色譜條件測定紫云英苷含量，3份樣品含量分別為0.092%、0.086%、0.090%。

3 討論

紫云英苷在347 nm處有最大的紫外吸收，故選擇347 nm為檢測波長。前期考察了甲醇水系統、乙腈水系統、乙腈磷酸水系統和乙腈甲酸水系統，最終選擇乙腈磷酸水系統梯度洗脫，保證紫云英苷的分離度和理論塔板數均符合要求。

近年來，隨著對傳統非藥用部位資源性化學成分的深入研究，傳統非藥用部位的潛在資源價值逐漸顯現并越來越引起人們的高度重視，芍藥是中藥材赤芍和白芍的來源之一，其花瓣在觀賞期過后自然掉落，多作為廢棄物進行處理，并未對其再利用。前期研究發現芍藥花花瓣中總黃酮含量較高，黃酮具有抗氧化、抗衰老等多種功效，紫云英苷具有抗氧化、促進成骨細胞增殖和分化、對腫瘤細胞的移至作用等藥理作用[5-6]，表明芍藥花瓣具有潛在的經濟價值[7]，對其化學成分及相關藥理作用進行深入研究，可以為后續開展芍藥花瓣的再利用研究提供技術參考，為芍藥種植產業的深加工提供指導方向，為藥材生產過程產生的資源儲量大、生產成本低的非藥用部位及深加工產業化過程產生的藥渣等副產物的利用形成產業化、規模化奠定理論基礎。