煙堿偏好模型不同階段大鼠海馬組織中23 種細胞因子水平的變化

程皖燕，王紅娟，陳 歡，付亞寧，王 安，劉 勇，侯宏衛，胡清源*

1. 安徽大學物質科學與信息技術研究院，合肥市經濟開發區九龍路111 號 230601 2. 國家煙草質量監督檢驗中心，鄭州高新技術產業開發區翠竹街6 號 450001 3. 中國科學院合肥物質科學研究院，合肥市蜀山湖路350 號 230031

煙堿是一種具有較強致癮性的物質，存在于煙草制品中［1］。煙堿偏好與大腦內獎賞和決策等神經生物學系統密不可分。煙氣能夠抑制免疫系統發揮作用，煙堿作為煙氣中的主要成分之一，可能通過中樞神經系統影響免疫系統［2］。然而，近些年的一些研究表明煙堿可能是一種具有抗炎作用的“消炎藥”，對膿血癥等炎癥疾病具有緩和作用［3］。但目前針對煙堿與神經炎癥相關作用的研究還較少。

海馬組織是與學習記憶相關的標志性腦區［4］，分布了大量的小膠質細胞，能夠對中樞神經系統損傷做出反應，釋放大量細胞因子。有報道稱煙堿能夠通過激活免疫細胞上的α7 煙堿乙酰膽堿受體（Nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）減少促炎癥細胞因子的產生，進而改善神經退行性疾病的認知功能，發揮神經保護作用［5-6］。細胞因子是一種主要由神經元和膠質細胞分泌并具有廣泛生物活性的小分子蛋白質［7］，主要包括白細胞介素、趨化因子和其他與炎癥反應相關的細胞因子等。其中白細胞介素類細胞因子在傳遞信息、激活與調節免疫細胞和介導炎癥反應中發揮重要作用，其中，白細胞介素（Interleukin，IL）-1α、IL-5、IL-6、IL-10 和IL-18 水平與煙堿攝入密切相關，有文獻報道稱吸入煙堿會導致肺部IL-1αmRNA 水平上調［8］，刺激人內皮細胞表達IL-6［9］，或者抑制過敏原誘導的肺部IL-5 水平升高［10］等。趨化因子是一類能夠介導神經炎癥并且在神經系統生理學包括神經元遷移、細胞增殖以及突觸活動中發揮重要作用的細胞因子，其中生長相關癌基因/角細胞趨化（Growth-related oncogene/keratinocyte chemoattractant，GRO/KC）、巨噬細胞炎性蛋白（Macrophage inflammatory protein，MIP）-1α和受激活調節正常T 細胞表達和分泌因子（Regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor，RANTES）是3 種較為常見的趨化因子，文獻報道機體炎癥反應會導致這3 種趨化因子水平顯著升高（p＜0.05）［11-13］。此外，腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factorα，TNF-α）在炎性反應和免疫應答中也發揮了重要作用［14-15］。條件位置偏好（Conditioned place preference，CPP）是藥物研究中廣泛使用的動物嗜好性評價模型，目前建立CPP獲得模型的煙堿劑量主要在0.06～0.80 mg/kg 范圍內。為全面探究煙堿對神經炎癥的作用，本研究中采用文獻范圍內低和較高的煙堿劑量即0.2 和0.6 mg/kg 分別構建了大鼠CPP 獲得、消退和重建模型，應用Bio-Plex 懸液芯片技術考察了兩種煙堿劑量下不同給藥階段大鼠海馬組織中23 種炎癥相關細胞因子水平的變化，旨在為研究物質偏好不同階段神經系統中細胞因子表達變化提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

大鼠［SPF 級，鄭州大學基礎醫學院，許可證號：SCXK（豫）2015-0004］。

煙堿（國家煙草質量監督檢驗中心提供）；生理鹽水（河南科倫藥業有限公司）；水合氯醛（揚州奧鑫助劑公司）；Western 及IP 細胞裂解液（上海碧云天生物技術有限公司）；蛋白濃度測定試劑盒（美國Thermo 公司）；23 種細胞因子檢測試劑盒（美國Bio-Rad 公司），23 個細胞因子分別為粒細胞集落刺激因子（Granulocyte colony stimulating factor，G-CSF），粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony stimulating factor，

GM-CSF），GRO/KC，干擾素g（Interferon gamma，IFN-g），IL-1α，IL-1β，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-10，IL-12p70，IL-13，IL-17A，IL-18，單核細胞趨化 蛋 白 1（Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1），巨噬細胞集落刺激因子（Macrophage colony-stimulating factor，M-CSF），MIP-1α，MIP-3α，RANTES，TNF-α，血管內皮細胞生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）。

RD1111-CPP 裝置（上海多毅實業有限公司，合格證號：DOiTCPP20160226004）；JXFSTPRP-48組織研磨儀（上海凈信實業發展有限公司）；3-30K 臺式高速冷凍離心機（美國Sigma 公司）；ULT2586-6-W48 冰箱（-80 ℃，美國Thermo 公司）；SpectraMax?M5 多功能酶標儀（美 國Molecular Devices 公司）；Bio-Plex 200 蛋白質懸液芯片機（美國Bio-Rad 公司）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠煙堿CPP 獲得、消退和重建模型的建立

（1）實驗動物的選擇：選擇約7 周齡，體質量為（200±20）g 的SD 雄性大鼠，實驗開始前進行為期5 d 的CPP 基準值測試，根據測試結果剔除在白箱中停留時間超過在黑箱、白箱和中間箱中停留總時間50%及不足10%的大鼠。

（2）CPP 獲得階段：篩選大鼠并隨機分為4 組，3 組實驗組共18 只，1 組對照組共6 只。以皮下注射的方式對大鼠進行給藥，對實驗組在奇數日給煙堿，在偶數日給生理鹽水；對對照組均注射生理鹽水，每兩天為一個給藥周期。在較長時間的煙堿作用下即第7 次給藥周期后成功構建大鼠煙堿CPP 獲得模型，第7 次測試后從實驗組中隨機選6只大鼠，處死并取出海馬組織于-80 ℃保存。

（3）CPP 消退階段：每天對實驗組剩余大鼠和對照組大鼠僅注射生理鹽水。戒斷4 d 后實驗組大鼠的煙堿偏好消除，第4 天測試后從實驗組剩余大鼠中隨機選6 只大鼠，處死并取出海馬組織于-80 ℃保存。

（4）CPP 重建階段：對剩余實驗組大鼠注射煙堿，次日注射生理鹽水，仍以2 d 為一個給藥周期，對照組則每天只注射生理鹽水。僅3 次給藥周期即相對短時間的煙堿作用后將剩余大鼠處死，并取出海馬組織于-80 ℃保存。

1.2.2 海馬組織總蛋白提取

向海馬組織中加入組織裂解液，用組織勻漿機將組織打碎，4 ℃條件下放置0.5～1.0 h，離心7 min（10 000 r/min，4 ℃），吸取上清液，于-80 ℃保存。

1.2.3 蛋白濃度測定

使用PierceTMBCA Protein Assay Kit 測定蛋白濃度［16］。

1.2.4 樣品檢測

將已處理的蛋白樣本從-80 ℃冰箱中取出，用樣品稀釋液將蛋白樣品稀釋8倍。應用蛋白懸液芯片檢測煙堿給藥不同階段23種細胞因子的水平［17］。

1.2.5 數據處理

通過IBM SPSS Statistics 21 軟件分別對0.2 和0.6 mg/kg 煙堿劑量下CPP 獲得、消退和重建階段23 種細胞因子的表達量進行單因素方差分析（One-way analysis of variance，ANOVA），p＜0.05 表示組間具有顯著性差異。采用Graphpad prism 6 軟件展示不同階段存在顯著差異的細胞因子水平的變化趨勢。

2 結果與討論

2.1 23 種細胞因子表達量檢測結果

以0.2 和0.6 mg/kg 煙堿劑量分別成功構建大鼠CPP 獲得、消退和重建模型，通過Bio-Plex 懸液芯片技術對兩種煙堿劑量下生理鹽水對照組，以及CPP 獲得、消退和重建共4 組大鼠海馬中23 種細胞因子水平同時進行了檢測。檢測結果顯示：IL-4、MIP-3α、G-CSF 和VEGF 這4 種細胞因子的水平低于最低檢測限，其他19 種細胞因子的檢測結果如表1 所示。通過對生理鹽水對照組，以及CPP 獲得、消退和重建組大鼠海馬中19 種細胞因子的表達量進行ANOVA 分析，發現任意兩組間IL-1β、IL-2、IL-7、IL-12p70、IL-13、IL-17A、MCP-1、M-CSF、GM-CSF 和IFN-g 共10 種細胞因子水平均無顯著差異（p＞0.05），不同組間IL-1α、IL-5、IL-6、IL-10、IL-18、GRO/KC、MIP-1α、RANTES 和TNF-α共9 種細胞因子有顯著差異（p＜0.05）。將本實驗結果與文獻中有報道的細胞因子水平進行比較，發現文獻報道生理鹽水處理組大鼠海馬中IL-1α、IL-6 和IL-18 水平分別在30、500 和3 500 pg/mL 左右［18］，未經任何處理大鼠海馬中IL-1β和TNF-α水平分別在60 和400 pg/mL 左右［19］，與本實驗檢測結果基本一致。

2.2 差異表達的細胞因子

9 種有顯著差異表達的細胞因子主要包括白細胞介素、趨化因子和其他細胞因子，以下分別將0.2 和0.6 mg/kg 煙堿劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段9 種細胞因子的表達量進行分類分析。

2.2.1 白細胞介素

圖1 所示分別為兩種煙堿給藥劑量下，5 種有顯著差異表達的白細胞介素在煙堿偏好模型不同階段的變化趨勢。其中圖1a～圖1e 分別表示白細胞介素IL-1α、IL-5、IL-6、IL-10、IL-18 的變化趨勢。

如圖1a 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段IL-1α水平分別有升高、下降和升高的變化趨勢，其中消退和重建階段IL-1α水平均顯著低于獲得組（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段IL-1α水平分別有升高、下降和持續下降的變化趨勢，其中重建組IL-1α水平顯著低于獲得組（p＜0.05）。根據文獻［20］報道，IL-1α具有神經保護作用，在10、25 和50 ng/mL 的IL-1α作用下，小鼠胚胎皮層細胞存活率顯著升高（p＜0.05）。在本研究中的煙堿給藥劑量下，煙堿能夠促進IL-1α的表達，在一定程度上可能具有神經保護作用，但在戒斷后該作用消失。此外，在低煙堿劑量下重建煙堿嗜好模型，可以恢復煙堿對IL-1α表達的促進作用；而較高劑量下重建煙堿嗜好模型，不可逆轉戒斷對IL-1α水平的影響。

表1 煙堿偏好模型不同階段19 種細胞因子的表達量（±s）Tab.1 Expression of 19 cytokines at different stages of nicotine preference model

表1 煙堿偏好模型不同階段19 種細胞因子的表達量（±s）Tab.1 Expression of 19 cytokines at different stages of nicotine preference model

0.2 mg·kg-1 0.6 mg·kg-1對照組16.35±3.58 51.84±2.21 726.13±423.22 28.62±5.03 3 446.33±170.40 30.30±13.21 13.21±2.34 34.29±8.55 461.47±16.70 604.63±516.61 44.37±38.78 73.27±30.91 28.17±17.26 91.04±131.99 65.99±31.90 51.44±37.70 2.94±0.81 12.92±8.75 120.53±58.52 IL-1α IL-5 IL-6 IL-10 IL-18 GRO/KC MIP-1α RANTES TNF-α IL-2 IL-1β IL-17A IL-7 IL-12p70 IL-13 MCP-1 M-CSF GM-CSF IFN-g獲得21.02±7.27 52.69±2.21 664.58±217.58 33.80±13.83 3 323.29±149.14 16.71±6.68 15.38±6.28 26.17±6.88 449.87±34.22 441.60±187.30 39.21±58.15 52.82±10.84 25.15±6.14 36.88±45.89 68.43±63.11 38.08±24.56 3.58±1.72 6.78±4.55 93.68±11.32消退15.03±3.63 54.26±0.98 624.10±161.95 35.05±10.42 3 259.92±163.24 23.22±12.22 9.89±4.12 28.72±7.23 460.17±49.22 438.10±145.02 21.91±24.73 69.09±11.99 22.52±9.19 81.66±45.77 65.86±9.83 39.30±33.97 1.61±2.07 8.13±3.32 89.61±12.68重建15.58±1.53 52.64±1.57 621.79±94.02 37.48±10.38 3 359.65±118.30 17.26±12.25 12.80±1.55 23.55±4.48 514.06±72.17 450.53±228.29 12.04±22.81 57.33±6.508 18.85±7.25 41.13±24.50 67.39±14.22 33.71±27.52 1.19±1.37 5.55±6.01 94.13±15.05獲得19.25±2.36 54.54±2.22 667.99±102.68 33.89±7.49 3 319.87±124.87 14.46±7.20 14.76±3.51 33.58±5.95 489.72±71.56 497.55±191.99 55.88±31.52 71.29±17.45 26.84±8.88 92.20±49.82 87.52±15.15 34.79±40.42 4.66±1.49 11.93±4.98 100.18±15.70消退17.12±1.85 53.35±2.07 600.57±261.49 36.84±6.61 3 376.23±202.28 18.76±10.69 12.98±3.16 30.67±3.66 473.02±46.93 504.23±242.45 67.46±29.62 79.85±15.66 27.76±4.70 83.92±32.41 79.18±30.13 46.01±33.50 2.29±1.345 12.00±5.62 93.01±13.36重建14.74±2.64 51.45±3.61 518.26±120.80 27.90±6.40 3 366.43±81.74 14.30±3.26 11.10±2.63 24.91±4.824 452.92±35.06 369.99±90.63 19.67±22.26 58.59±9.80 20.51±5.13 53.19±15.01 66.35±17.37 16.79±28.17 2.15±1.873 8.09±3.19 92.79±9.30

圖1 煙堿偏好模型不同階段5 種白細胞介素水平變化Fig.1 Variations of five interleukins’levels at different stages of nicotine preference model

如圖1b 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段IL-5 水平分別有升高、持續升高和下降的變化趨勢，其中，消退階段IL-5 水平顯著高于對照組（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段的IL-5 水平均與對照組無顯著差異（p＞0.05）。IL-5 是調節造血細胞產生及活性的細胞因子，IL-5 的生物學活性在機體穩態條件下作用不大，而在緊急造血和免疫應答中起關鍵作用，通常在感染和免疫過程中大量產生［21］，Tilp 等［10］證實過敏原能夠誘導肺部中IL-5 的水平升高。目前針對IL-5 的研究集中于一些以嗜酸性粒細胞為主要免疫效應細胞的疾病中，主要考察其在支氣管中水平的變化，在腦部的研究較少。從本研究中可以發現，低和較高劑量煙堿攝入均不會誘導IL-5的過表達，大鼠海馬組織未產生免疫應答反應。此外，在低劑量煙堿下，戒斷會影響海馬組織區穩態，引起IL-5 水平升高，可以通過再次給煙堿恢復。

如圖1c 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段IL-6 水平分別有下降、持續下降和不變的趨勢，其中，消退階段IL-6 水平顯著低于對照組（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段IL-6 水平持續保持下降，且消退和重建階段IL-6 水平均顯著低于對照組（p＜0.05）。IL-6 是一種兼促炎和抗炎雙重作用的細胞因子［22］，在慢性炎性疾病中，IL-6 主要發揮促炎作用。Bao 等［23］研究表明煙堿能夠抑制脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導的促炎因子IL-6 的表達，從而發揮抗炎作用。還有研究表明，海馬組織中神經元的壞死與腦脊液中IL-6 水平上升有關［24］，煙堿能夠通過抑制促炎因子IL-6 的表達發揮心肌保護作用［25］。本研究結果表明，低和較高劑量煙堿均不會誘導大鼠海馬中IL-6 的表達升高而產生炎癥反應；相反，在煙堿偏好模型的不同階段，IL-6 的表達量均有不同程度的下降趨勢，提示煙堿可能通過抑制促炎因子IL-6 的表達，從而發揮神經保護作用。

如圖1d 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段IL-10 水平有持續升高的趨勢，但與對照組相比均無顯著差異（p＞0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段IL-6 水平分別有升高、持續升高和下降的趨勢，其中消退階段IL-10水平顯著高于對照組（p＜0.05）。IL-10 是一種具有抗炎作用的細胞因子，主要是通過抑制巨噬細胞和樹突狀細胞將抗原呈遞給T、B 淋巴細胞且抑制其產生促炎癥因子，減少過度和失控的炎癥效應造成的組織損傷［26］。目前有研究表明中樞神經系統（Central nervous system，CNS）中IL-10 的表達增加，發揮抗炎作用，有助于大腦炎癥恢復［27］，Li等［28］發現芒柄花黃素通過刺激大腦皮層中IL-10的表達抑制炎癥反應，發揮神經保護作用。此外，IL-10 能夠通過平衡體內促炎因子水平發揮抗炎作用［23］。本研究中發現低和較高劑量煙堿能夠促進IL-10 的表達，在一定程度上可能具有神經保護作用，在較高劑量下，戒斷后可能引起機體應激反應過表達IL-10；隨后繼續給煙堿，應激反應消失，IL-10 水平恢復，與對照組無顯著差異（p＞0.05）。

如圖1e 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段IL-18 水平分別有下降、持續下降和升高的變化趨勢，其中消退階段IL-18 水平顯著低于對照組（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段IL-18 水平分別有下降、升高和下降的變化趨勢，每一階段IL-18 水平均與對照組無顯著差異（p＞0.05）。IL-18 是一種促炎癥細胞因子，有研究表明100 ng/mL IL-18 能夠有效抑制海馬組織的長時程增強（Long-term potentiation，LTP），對學習和記憶形成產生影響［29］。Bossù等［30］報道LPS通過促進海馬組織中IL-18 的過表達，抑制神經元細胞的分化或誘導其死亡，引起持續性認知障礙，針對阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease，AD）的研究表明1 和10 μmol/L 煙堿均能顯著增強神經元細胞的活力，發揮神經保護作用［31］。此外，抑制IL-18的表達可抑制全身性炎癥反應［32］。本研究結果表明，低和較高劑量煙堿能夠抑制IL-18 的表達，在一定程度上可能具有神經保護作用；此外，低劑量下戒斷后可能會產生代償性適應，引起大鼠海馬中IL-18 水平持續下調，并隨著煙堿的再攝入而消失。

2.2.2 趨化因子

圖2 所示分別為兩種煙堿給藥劑量下，3 種有顯著差異表達的趨化因子在煙堿偏好模型不同階段的變化趨勢。其中圖2a～圖2c 分別表示趨化因子GRO/KC、MIP-1α和RANTES 的變化趨勢。

如圖2a 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段GRO/KC 水平分別有下降、升高和下降的變化趨勢；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3個階段GRO/KC 水平變化趨勢同0.2 mg/kg 劑量，并且趨勢更為明顯，每一階段GRO/KC 水平均顯著低于對照組（p＜0.05）。GRO/KC 作為促炎癥因子，參與多種炎癥類疾病發生，背根神經節局部發生炎癥會導致GRO/KC 的表達大幅度上調［33］。Smith 等［34］表明LPS 能夠促進大鼠肺泡灌洗液中GRO/KC 的表達。此外，GRO/KC 與人體中IL-18的作用相似，有研究中將煙堿和LPS 共同作用于人的氣道上皮細胞系HBE16 細胞，發現煙堿能顯著減少LPS 誘導的IL-18 蛋白的表達（p＜0.05），具有一定的抗炎功能［35］。本研究中發現低和較高劑量煙堿均可能通過抑制炎癥反應誘導的GRO/KC水平的升高發揮抗炎作用，戒斷后抑制作用減弱，并且可通過再次給煙堿而恢復；較高劑量煙堿構建模型時，該作用比低劑量煙堿構建模型時更為明顯。

圖2 煙堿偏好模型不同階段3 種趨化因子水平變化Fig.2 Variations of three chemokines’levels at different stages of nicotine preference model

如圖2b 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段MIP-1α水平分別有升高、下降和升高的變化趨勢，其中消退和重建階段MIP-1α水平均顯著低于獲得階段（p＜0.05），重建階段MIP-1α水平顯著高于消退階段（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段MIP-1α水平分別有升高、下降和持續下降的變化趨勢，且重建階段MIP-1α水平顯著低于獲得階段（p＜0.05）。MIP-1α作為一種與免疫細胞緊密聯系的細胞因子，多被用于阿爾茲海默癥［36］和關節炎等炎癥類疾病發生機制的研究中［37］。有研究表明長期飲酒會引起紋狀體中MIP-1α水平顯著升高（p＜0.05），戒斷24 h 后仍顯著高于對照組（p＜0.05），酒精能夠持續影響紋狀體中MIP-1α的水平，并指出戒斷過程產生的應激反應是造成MIP-1α升高的主要原因［38］。在本研究結果中，低和較高劑量煙堿不會誘導海馬組織中MIP-1α的過表達，戒斷后MIP-1α水平相較于獲得組未持續上升反而下降，可能是由于戒斷時間較長（＞24 h）引起的；此外，在低劑量下消退過程中MIP-1α水平的降低可通過再次給煙堿而恢復，在較高劑量作用下戒斷對MIP-1α水平的影響不可逆。

如圖2c 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段RANTES 水平分別有下降、升高和下降的變化趨勢，每一階段RANTES 水平均與對照組無顯著差異（p＞0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段RANTES 水平持續保持下降，其中重建組RANTES 水平相比于對照組和獲得組分別下降了27%和25%（p＜0.05）。大量研究表明，RANTES 表達的上調與多種炎癥疾病相關，其中相比于健康對照組，2 型糖尿病患者血清中RANTES 水平升高［39］。Tripathy 等［13］報 道 相 比于健康對照組，AD 患者腦微血管中RANTES 的表達上調，LPS 能夠誘導RNATES 的表達。本研究結果表明，低和較高劑量下，煙堿能夠抑制RANTES 的表達，機體處于穩態，可能具有神經保護作用；在低劑量下，戒斷后RANTES 水平的升高可通過再次給煙堿恢復；在較高劑量下，戒斷后RANTES 表達受到抑制，且這種抑制作用具有持續性，不能通過短期內再次給煙堿而扭轉。

2.2.3 TNF-α

如圖3 所示，在0.2 mg/kg 給藥劑量下，CPP 獲得、消退和重建階段TNF-α水平分別有下降、升高和持續升高的變化趨勢，其中重建階段TNF-α水平顯著高于獲得階段（p＜0.05）；在0.6 mg/kg 給藥劑量下，3 個階段TNF-α水平分別有升高、下降和持續下降的變化趨勢，但與對照組均無顯著差異（p＞0.05）。TNF-α具有雙重作用：一方面在機體免疫調節、機體生理功能和抗感染等方面發揮重要作用，另一方面若持續釋放或產生過多時則會引起發熱休克等［15］。Mihara 等［40］表示LPS 能夠誘導大鼠腸間皮細胞中TNF-αmRNA 水平的升高。本研究結果表明，低和較高劑量煙堿不會誘導大鼠海馬中TNF-α的過表達，機體處于穩態；此外，在低和較高劑量下TNF-α的變化趨勢相反，低劑量下重建階段TNF-α水平顯著升高（p＜0.05）。這可能是由于重建組大鼠煙堿暴露時間較短，急性煙堿給藥可能導致TNF-α水平上調。

圖3 煙堿模型不同階段TNF-α水平的變化Fig.3 Variations of TNF-α level at different stages of nicotine preference model

3 結論

①應用懸液芯片技術同時檢測了煙堿偏好模型不同階段大鼠海馬組織中23 種炎癥相關的細胞因子水平，其中9 種細胞因子水平有顯著差異（p＜0.05），包括5 種白細胞介素，3 種趨化因子和TNF-α；②在低和較高劑量下，煙堿能夠促進IL-1α和IL-10 的 表 達，抑 制IL-6、IL-18、GRO/KC 和RANTES 的表達；③大鼠海馬組織中GRO/KC 水平易受煙堿影響，單一煙堿作用會降低促炎癥因子GRO/KC 的表達，在獲得-消退階段該降低作用減弱，在消退-重建階段該降低作用再次恢復至獲得階段，該細胞因子可能參與了煙堿的潛在抗炎作用機制。