10種散裝感冒涼茶體外對甲型H1N1流感病毒抑制作用的研究

巫結冰　何炳聯(lián)　馮文希　陳偉東　梁玉萍　張慧紅

【摘 要】目的：探討10種散裝感冒涼茶對甲型H1N1流感病毒的體外抑制作用。采用CCK-8法先測定感冒涼茶對MDCK細胞的毒性作用。再分別通過預防給藥、治療給藥、藥液和病毒直接混合殺滅三種途徑進行體外試驗，在450nm波長下檢測各對應OD值并計算其對甲型H1N1流感病毒的抑制率。結果顯示10種感冒涼茶能抑制甲型H1N1流感病毒的生長，預防效果和治療效果相當，兩者無差異。涼茶自身含微量細胞毒性。

【關鍵詞】 感冒涼茶; 甲型H1N1流感病毒; 抑制作用;CCK-8

【中圖分類號】R511.7【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2020）13--02

1 材料

隨機選取10家散裝感冒涼茶經(jīng)除菌處理;經(jīng)廣東省CDC復檢符合甲型H1N1自分離毒株。DMEM、PBS、胎牛血清、0.5%胰酶、0.25胰酶等購自美國GIBCO公司;CCK-8購自美國MCE公司;酶標儀RT6100購自深圳雷杜公司。

2 方法

2.1H1N1 TCID50測定80%成片MDCK細胞經(jīng)PBS洗滌2遍。用病毒維持液將甲型H1N1流感病毒原液按原液、10-0.5～10-7進行稀釋后接種細胞，每孔接種100?l，每個稀釋度接種4孔，并設對照孔。5%CO235℃培養(yǎng)72h，觀察各孔CPE，利用Reed-Muench法計算出病毒的TCID50。

2.210種感冒涼茶TC50與TC0測定80%成片細胞洗滌后。用維持液將10種感冒涼茶各自按原液、2-1～2-7進行稀釋后接種細胞，每孔接種100?l，每種感冒涼茶每個稀釋度接種4孔，同時設照孔。5%CO235℃培養(yǎng)72h后觀察CPE。吸走藥液，PBS洗滌細胞2遍，每孔加入含10%的CCK-8顯色液100?l，35℃顯色2h后用自動酶標儀450nm波長下測出各孔OD值。利用Reed-Muench法計算出TC50和TC0各自所對應的稀釋倍數(shù)。

2.3 體外給藥試驗以2.2計算出的H1N1病毒TCID50配制含100TCID50濃度的病毒液備用。按2.2得到的10種感冒涼茶各自TC0濃度稀釋液為母液，分別按2-1、2-2、2-3、2-4 稀釋后進行體外試驗。三個實驗組培養(yǎng)96h后，按2.2檢測各孔OD值計算各自對應的病毒抑制率。實驗重復3遍。

3 結果與分析

3.110種感冒涼茶細胞毒性檢測（TC50與TC0）結果

通過檢測，10種感冒涼茶均帶有微量細胞毒性。

3.210種感冒涼茶三種給藥途徑體外實驗結果

三種給藥途徑的體外實驗，以≥90%為有效抑制，抑制結果排序為預防給藥組（0）<治療給藥組（10%）<直接滅活組（70%）（為55.93，Ρ<0.01; >95%為可信）。預防給藥組和治療給藥組對比Ρ >0.01，無統(tǒng)計學意義。具體各結果見表格。

討論

通過對隨機10種散裝感冒涼茶的細胞毒性實驗，發(fā)現(xiàn)這10種感冒涼茶均帶有一定的細胞毒性，TC50在0.05ml～0.177mL之間，中位數(shù)為0.088mL。TC0則在0.031mL～0.125mL之間，中位數(shù)為0.062mL，證明這10款感冒涼茶自身所帶的細胞毒性是微小的。當然，涼茶本身存在的細胞毒性也證明了“是藥三分毒”的中醫(yī)理論。

直接滅活試驗結果表明10種感冒涼茶在各自TC0的濃度下對甲型H1N1流感病毒是一定的抑制作用。而治療給藥和預防給藥相對比，整體對甲型H1N1流感病毒的治療效果較低，可能與藥物進入細胞的效率有關。現(xiàn)代研究表明，病毒是通過相應的受體成功吸附在細胞表面的[1]。感冒涼茶成分復雜，常見的有效成分堿類、苷類和黃酮類等物質缺乏受體，主要是通過被動運輸進入細胞[2]，進入濃度隨給藥濃度增加而增加[3]。實驗結論，散裝感冒涼茶口服吸收率較低，大部分有用成分不能被細胞直接吸收，但細胞毒性溫和，適合日常預防飲用。

參考文獻

S.J.Flint等.病毒學原理（I）- 分子生物學[M].原著第三版.北京.化學工業(yè)出版社.2016：125-132.

楊秀偉，郭潔，徐嵬.芍藥苷類化合物在人源腸Caco-2細胞單層模型中的吸收轉運研究[J].中草藥，2013，，44（15）：2097～2104.

陳丙鑾，李松林，李萍，等.黃酮類化合物在Caco-2細胞模型中的吸收規(guī)律[J].中國天然藥物，2006，4（4）：299～302.