菩提樹組培擴繁技術研究

摘要： ?以MS為基本培養基，分別加入不同濃度的生長調節物質6-BA、NAA和IBA的組合，對菩提樹當年生長健壯的帶側芽莖段進行組織培養，最后篩選出菩提樹初代培養的最適培養基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L;繼代增殖的最適培養基為MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L;生根階段的最適培養基為1/2MS+NAA 0.05 mg/L +IBA 1.0 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L。同時還篩選出草炭土、細河沙、 壤土以3∶5∶2的比例混合是菩提樹組培苗移栽成活率最高的移栽基質，為73.2%。

關鍵詞： ?菩提樹; ?組培擴繁

中圖分類號： ? S 723. 1 + 32， ?S 687 ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼： ? A ? ? ? ? ? ? ? ?文章編號：1001 - 9499（2020）02 - 0023 - 03

菩提樹（Ficus religiosa）為桑科榕屬的高大喬木，樹高可達20 m。樹干挺拔健壯，樹冠卵圓形或倒卵形。葉互生，深綠色具光澤，革質，全緣。葉長8～16 cm，葉寬6～12 cm，基部圓形或微心形，在尖端處常有長尾。花期3～4月，果期5～6月。果球形，成熟時紅色，表面光滑。菩提樹分枝擴展，樹形高大，枝繁葉茂，冠幅廣展，是優良的觀賞樹種，還宜作庭院、行道的綠化樹種。另外，該樹對氫氟酸有較強抗性，還宜作污染區綠化樹種。

菩提樹種子繁殖需選10年以上的健壯母樹，因種子、穗材難得，故常規繁殖手段難以在短時間內繁殖出大量苗木來滿足市場需求。故本試驗以菩提樹當年生長健壯的帶側芽莖段為外植體進行不定芽誘導，篩選出初代培養、繼代增殖、生根階段的最適培養基，同時也篩選出成活率最高的移栽基質，以期完善菩提樹組培技術流程，為菩提樹組培快繁及實現工廠化育苗奠定理論基礎。

1 試驗材料

遼西生態試驗林場生產科提供的菩提樹當年生長健壯的帶側芽莖段。

細胞分裂素6-BA（國藥集團）、生長素NAA（國藥司集團）、IBA（國藥集團）、糖（遼寧省建平縣三家糖廠）、瓊脂（福建金燕海洋生物）、Hcl（國藥集團）、NaOH（國藥集團）、高壓滅菌設備（上海博訊）。

2 試驗方法

2. 1 外植體的選取與處理

于晴天上午，采集生長健壯、無病蟲害的菩提樹幼嫩枝條作為外植體，除去莖段上的葉片帶回試驗室，先用自來水沖洗外植體表面的灰塵，再放入洗滌劑溶液中浸泡2～5 min，最后用自來水沖洗干凈。將清洗干凈的外植體剪成長4 ～5 cm的具1～2個飽滿、未萌發芽莖段，并置于超凈工作臺（已開機、滅菌20 min以上）中進行表面消毒滅菌，先用75%酒精浸泡30 s，無菌水沖洗2～3次，然后按材料的木質化程度，分別用0.1%HgCl2浸泡6～8 min，最后用無菌水沖洗5～6次。

2. 2 培養基及移栽基質的配置

以MS為基本培養基，在高溫滅菌前給各階段培養基分別加入不同質量的細胞分裂素6-BA、生長素NAA和IBA的組合，蔗糖30 g/L，瓊脂8 g/L，用0.1 mol/L Hcl或0.1 mol/L NaOH調解pH值至5.5～5.8，高壓滅菌壓力保持在0.105～0.12 MPa（注意壓力不要高于0.14 MPa），時間為20 min。

2. 2. 1 初代培養

以MS為基本培養基，將表面消毒的外植體切去兩端，切成1～2 cm長單芽，按照正常生長方向接種到添加了不同質量的細胞分裂素6-BA和生長素NAA的初代培養基中進行不定芽誘導，6-BA設置0.8、1.6、2.4 mg/L 3個濃度梯度，NAA設置0.1、0.2 mg/L 2個濃度梯度，采用完全隨機組合，共6個處理（表1）。每處理接種20瓶，每瓶接種1個外植體，30天后觀察6個處理對外植體不定芽的誘導率及芽生長狀況，確定最佳初代培養基。

2. 2. 2 繼代增殖

當初代誘導的不定芽高長到1.5 cm及以上時，將萌發的幼芽從基部切下，去掉莖尖，接種到添加不同濃度的細胞分裂素6-BA和生長素NAA的繼代增殖培養基中，進行不定芽的增殖培養，6-BA設置0.6、1.2、1.8 mg/L 3個濃度梯度，NAA設置0.05、0.10 mg/L 2個濃度梯度，采用完全隨機組合，共6個處理（表2）。每處理接種20瓶，每瓶5個嫩芽，觀察培養物生長情況，40天后統計增殖倍數，確定最適繼代增殖培養基。

2. 2. 3 生根培養

將繼代次數已超過4次、高1.5 cm以上、生長健壯的叢生芽切成具2～3片葉片的單芽，接種在以1/2 MS為基本培養基，添加不同質量的生長素NAA、IBA的生根培養基中進行生根培養，生根培養基采取IBA、NAA單獨配制及IBA和NAA混合配制的4個配方（表3）。30天后統計平均生根條數、生根率，確定最佳生根培養基。

2. 3 培養條件

在組織培養過程中，溫度和光照是重要的環境條件，對生長、分化、生根皆有很大影響。培養室溫度設定為25±2 ℃，光照強度為2 500～3 000 Lux，光照時間為14～16 h/天，該條件適用于菩提樹各組培階段組培苗的培養。

2. 4 移 栽

生根培養30～35天，當不定根長至1 cm時，移栽組培苗。移栽基質為以下3種，即細河沙、草炭土∶細河沙（1∶1）、草炭土∶細河沙∶壤土（3∶5∶2），每種基質移栽100株，30天后統計生根條數與生根率。基質混合過程中，需噴灑0.2%代森錳鋅水溶液消毒，混勻后堆漚覆膜、壓嚴，滅菌3天，防止菌類的滋生。在移栽的過程中也要防止菌類的滋生，確保適當的光照、溫度、水分，盡可能地創造適宜于它生存的環境，幫助其盡快由異養型過渡到自養型，保證成活。

3 試驗結果分析

3. 1 初代培養

由不同激素組合對不定芽誘導的影響（表4）可知：在不定芽誘導過程中，不同的激素組合對其影響不同。低濃度的6-BA可促進不定芽的分化，隨著濃度增加，雖可促進芽的增殖，但會抑制植物的節間伸長，導致愈傷組織生長過旺。綜合來看，處理1，即MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L的萌芽率為53%，芽生長狀況也最好，是最適初代培養基。

3. 2 繼代增殖

由不同激素組合對不定芽繼代增殖的影響（表5）可知：在繼代培養過程中，隨著BA濃度的增加，不定芽的增殖倍數也隨之增加，但當6-BA達到1.8 mg/L時，組培苗開始大量長出愈傷組織，增殖芽部分畸形，增殖倍數降低，影響組培苗的正常生長。綜合來看，處理9，即MS+BA 1.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L的苗分化多，平均增殖倍數為7.4，分化苗生長健壯、葉色綠，為繼代培養最適培養基。

3. 3 生根培養

由不同生長素配比對組培苗生根的影響（表6）可知： NAA和IBA均可以誘導組培苗生根，2種激素配合使用生根效果更好。因此組培苗最適生根培養基配方為處理14，即1/2MS+NAA 0.05 mg/L +IBA 1.0 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L，平均生根數5.5條，生根率為93%。

3. 4 移栽基質的確定

由不同基質煉苗成活率及組培苗生長情況調查（表7）可知：不同的移栽基質對菩提樹組培苗移栽成活率的影響不同。單獨用沙子或草炭土不利于保水，雖然熟表土可促進根的生長，但通透性不好，容易板結，移栽成活率低。因此熟表土中加入草炭土、細河沙，不僅可以提供給幼苗所需的營養物質，還能提高基質的透氣性。將草炭土、細河沙、 壤土以3∶5∶2的比例混合應用，移栽成活率最高，為73.2%。

4 結論與討論

4. 1 菩提樹組織培養過程中，植物生長調節物質6-BA、NAA、IBA是培養基中的關鍵物質，對外植體不定芽誘導、不定芽繼代增殖、組培苗生根起著重要、明顯的調節作用。

4. 2 在初代培養階段，培養基中加入NAA和6-BA，可誘導愈傷組織的形成;在繼代增殖培養階段，6-BA和NAA的影響達極顯著水平。說明6-BA作為影響菩提組培苗增殖的最主要因素，它可促進細胞分裂和分化，延遲組織衰老，增強蛋白質合成，抑制頂端優勢，促進側芽顯著生長，而NAA能夠促進增殖組培苗的高生長，并與6-BA存在交互作用，進而影響菩提組培苗的增殖效果。但是當6-BA達到1.8 mg/L時，組培苗開始大量長出愈傷組織，增殖芽部分畸形，增殖倍數降低，影響組培苗的正常生長，繼代增殖階段6-BA的使用濃度不能高于1.8 mg/L。在生根培養階段，單純使用生長素NAA和IBA即能誘導根的形成。

4. 3 菩提樹組培擴繁技術研究的成功為菩提樹的快速繁殖開辟了一條新途徑，解決了常規的繁殖手段難以滿足生產需要的矛盾，為菩提樹的規模化人工種植奠定了基礎。

參考文獻

[1] 曹孜義， ?劉國民. ?實用植物組織培養技術教程[M]. ?甘肅科學技術出版社， ?1999

[2] 鄧正正， ?李超峰， ?王立華. ?菩提樹的組織培養及快速繁殖[J]. ?植物生理學通訊， ?2005（6）： ?795.

第1作者簡介： ?黃立華（1971-）， ?女， ?本科， ?高級工程師， ?主要從事植物組織培養研究。

收稿日期： 2019 - 12 - 21

（責任編輯： ? 李 丹）