比濁法與電泳法檢測單克隆病患者血清免疫球蛋白結果的差異分析

陳興財 梁瑞向

【摘要】探討免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法測定單克隆病患者血清免疫球蛋白結果的差異情況。方法 收集36例含不同濃度M蛋白的單克隆病患者和16例無M蛋白的健康體檢者（對照組）血清標本，分別用免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法進行免疫球蛋白定量檢測，對比兩組檢測結果。結果 無M蛋白的正常對照組和當M蛋白含量<29.3%時，兩種方法的檢測結果相關性良好r2=0.901，結果差異無統計學意義（P>0.05），當M蛋白含量>29.3%時，兩種方法檢測結果差異顯著（P<0.05）。結論 M蛋白含量>29.3%，免疫透射比濁法檢測免疫球蛋白的結果明顯高于電泳法檢測結果。

【關鍵詞】免疫球蛋白;免疫透射比濁法;瓊脂糖電泳法;M蛋白

【中圖分類號】R392.7 ? 【文獻標識碼】A ? ?【文章編號】2107-2306（2020）03-234-02

血清免疫球蛋白（Ig）的檢測可以判斷機體體液免疫功能，是免疫性疾病特別是單克隆病輔助診斷和療效監測的重要指標。筆者在檢驗工作中發現，在用免疫透射比濁法檢測多發性骨髓瘤或巨球蛋白血癥等單克隆病患者血清Ig時，常常出現Ig結果占球蛋白比例高達95%甚至超過球蛋白總量的情況，與血清蛋白電泳檢測的γ區免疫球蛋白結果也存在較大差異。因此，本文擬對兩種方法測得的單克隆病患者血清免疫球蛋白結果是否存在一致性進行探討。

1 ?材料與方法

1.1實驗對象 ?收集2019年4-12月在桂林市人民醫院檢測發現M蛋白的住院及門診復診患者36例。男15例，女21例，年齡18～88歲。 另外隨機選取同期在院檢測無M蛋白的患者16例，其中男7例，女9例，年齡22-76歲。患者均空腹采血，2小時內分離血清，排除溶血、脂血和黃疸標本。

1.2儀器和試劑 ? 德國羅氏Cobas8000 c702全自動生化分析儀，羅氏原裝IgA、IgG、IgM、TP試劑及校準品、質控品。法國Sebia 全自動瓊脂糖電泳分析儀及配套血清蛋白瓊脂凝膠板和試劑，配套掃描儀和分析軟件。

1.3方法

1.3.1 化學法 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用免疫透射比濁法檢測，根據免疫球蛋白的組成特點，IgD和IgE在人血清中含量甚微，檢測IgA、IgG、IgM三種免疫球蛋白就基本可以代表血清免疫球蛋白水平。本文擬將血清中免疫球蛋白=IgA+IgG+IgM，同時用雙縮脲法檢測血清總蛋白（TP）。

1.3.2 瓊脂糖電泳法 ?用其專用的電泳梳，每標本加樣10ul置全自動電泳儀上自動完成瓊脂糖電泳，烘干，氨基黑染色，脫色，再烘干。然后應用專用掃描儀對電泳后的蛋白各組分掃描并算出ALB、α1、α2、β、γ球蛋白的百分比，將β區或γ區出現的集中濃染帶判讀為M蛋白陽性，根據其峰面積占總峰面積的比例計算百分比，再根據血清總蛋白濃度計算γ區球蛋白和M蛋白濃度。

1.3.3 結果差異計算 比濁法與瓊脂糖電泳法檢測血清免疫球蛋白的結果相對偏差=（化學法結果-電泳法結果）/電泳法結果×100%

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0和Excel 2007軟件進行統計分析。呈非正態分布的數據采用中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數秩和檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 ?結果

2.1 當血清標本無M蛋白或M蛋白含量較低時，免疫透射比濁法與電泳法檢測免疫球蛋白結果相關性良好，見圖1：

2.2 當M蛋白含量>29.3%時，兩種方法檢測結果差異顯著。見表1

3 討論

隨著老齡化人口的增加，單克隆丙種球蛋白異常的發生率也明顯上升 。單克隆免疫球蛋白是一種過度合成的單一類型或亞型的異常免疫球蛋白，它的準確檢測有助于臨床疾病的診斷和在診療過程中的療效觀察，尤其是惡性單克隆丙種球蛋白血癥和免疫缺陷綜合征[1]。目前，免疫球蛋白的定量檢測主要有免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法。根據Ig的組成，IgD、IgE含量微小，通常檢測IgG、IgA、IgM這三類Ig就可以代表血清免疫球蛋白水平。而血清蛋白電泳的γ區也主要由IgG、IgA、IgM三種免疫球蛋白組成。

本實驗表明，當血清標本無M蛋白或M蛋白含量較低時，免疫透射比濁法與電泳法檢測免疫球蛋白的結果相關系數r2=0.901，r=0.9386，回歸方程Y=1.0745x-0.7245，經Mann-Whitney秩和檢驗，P=0.374，>0.05差異無統計學意義。而當M蛋白濃度升高到一定程度后，兩種方法檢測免疫球蛋白的結果差異顯著（P<0.05）且相對偏差遠大于免疫球蛋白檢測的允許TEa（IgG、IgA和IgM的TEa分別為11.98%、13.5%和16.8%[3]）。分析原因可能為：（1）單克隆免疫球蛋白是一種過度增殖的異常免疫球蛋白，其可能與各自的多克隆起源的多克隆免疫球蛋白在氨基酸組成和數量上有所不同，而這可能會影響其與抗體的結合，從而影響定量的準確性;（2）相關學者[2]的研究表明在免疫透射比濁法中，異常增殖的IgG型，IgA型，IgM型M蛋白對其余2種免疫球蛋白的檢查均會產生干擾，且以正干擾為主，并有M蛋白濃度依賴性，即M蛋白濃度越高，干擾越大;（3）本研究用到的羅氏公司試劑采用的是預稀釋方法，即先對樣本進行一定倍數稀釋后再加入試劑進行反應，如出現超過檢測線性范圍的還可以繼續再運行固定倍數的稀釋，該法雖可避免因抗原過量導致的“鉤狀效應”發生，獲得更寬的檢測范圍，但同時也可能因為標本稀釋破壞了抗原抗體反應的基質條件而引入了未知的誤差。而血清蛋白電泳是根據蛋白質的等電點、分子量和分子形狀不同而在電場中泳動速度不一樣將蛋白質區分開，且單克隆的免疫球蛋白也多是出現在γ區，所以電泳法在方法學上幾乎不受M蛋白的干擾。

總之，免疫透射比濁法在檢測單克隆病血清免疫球蛋白時易受M蛋白的干擾，當M蛋白大量出現時可能導致不能獲得準確的定量結果，但臨床實驗室如果采用固定的標本處理方式固定誤差，同時，必要時向臨床醫生解釋方法學的缺陷所引起的實驗誤差，實際結果不會影響臨床醫生對病情趨勢的判斷，且化學法快速、方便、經濟，更易開展。瓊脂糖電泳法雖受M蛋白干擾較小，但需要特殊儀器，且耗費時間長，不利于基層醫院開展。因此建議建議臨床采用同一種方法進行病情監測。

參考文獻

[1]張詩詩，王薇，趙海建，等.我國特殊蛋白質檢驗指標允許總誤差和允許不精密度的初步研究[J].臨床檢驗雜志，2016，34（7）：602-607.

[2]韓建華，程歆琦，吳潔，等. M蛋白對免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白的干擾[J].檢驗醫學，2019，34（3 ）：197-201