杭州地區4842例新生兒耳聾基因篩查結果分析

吳雅楓　翟洪波　魯建央　魯才娟

[摘要] 目的 應用遺傳性耳聾基因芯片篩查杭州地區新生兒常見遺傳性耳聾基因的突變頻率和類型。 方法 收集杭州地區2016年2月～2017年10月送檢的4842例新生兒足底血制成的干血斑，應用PCR+導流雜交法檢測中國人常見的4個致聾基因14個突變位點，包括GJB2基因（176-191del 16、235 del C、299-300 del AT）、GJB3基因（538C>T、547 G>A）、SLC26A4基因（IVS7-2A>G、IVS15+5GA、2168 A>G、1229C>T、1174A>T、1975G>C、1226G>A）、線粒體DNA 12S rRNA基因（1555A>G、1494C>T）。 結果 4842例新生兒中200例攜帶耳聾基因突變，總體陽性率為4.13%，其中GJB2基因突變58例，突變攜帶率為1.20%，SLC26A4基因突變98例，突變攜帶率為2.02%，12S rRNA基因19例，突變攜帶率為0.39%，GJB3基因突變 31例，突變攜帶率為0.64%。200例耳聾基因突變攜帶者195例（97.50%）通過聽力篩查。 結論 耳聾基因篩查是現有聽力篩查模式的良好補充，對遺傳性非綜合征性耳聾早診斷、早預防、早治療極為重要。

[關鍵詞] 耳聾基因;聽力篩查;基因突變;遺傳性非綜合征性耳聾

[中圖分類號] R764.4 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2020）23-0016-04

An analysis for newborn deafness genetic screening of 4842 neonates in Hangzhou

WU Yafeng ? ZHAI Hongbo ? LU Jianyang ? LU Caijuan

Department of Obstetrics， Affiliated Hangzhou First People's Hospital， Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou ? 310006， China

[Abstract] Objective To investigate the mutation frequency and type of hereditary deafness genes in neonates in Hangzhou using deafness genechip array. Methods Dried blood spots（DBS） were sampled from plantar blood of 4，842 neonates collected from February 2016 to October 2017 in Hangzhou. Four deafness genes and 14 mutation sites commonly seen in Chinese were detected using a PCR/Flow-through hybridization assay， including GJB2 gene（176-191del 16， 235 del C and 299-300 del AT）， GJB3 gene（538C>T and 547G>A）， SLC26A4 gene（IVS7-2A>G， IVS15+5GA， 2168A>G， 1229C>T， 1174A>T， 1975G>C and 1226G>A） and mitochondrial DNA 12S rRNA gene（1555 A>G and 1494C>T）. Results 200 cases carried deafness gene mutations in the 4， 842 neonates， with a positive rate of 4.13%. GJB2 gene mutation was found in 58 cases， with a carrying rate of 1.20%， and SLC26A4 gene mutation in 98 cases with a carrying rate of 2.02%， Mitochondrial DNA 12S rRNA mutation in 19 cases with the carrying rate of 0.39%， and GJB3 gene mutation in 31 cases with the carrying rate of 0.64%. It was found that 195 cases carrying deafness gene mutations initially passed newborn hearing screening， accounting for 97.50% of the 200 cases. Conclusion Deafness gene screening is a suitable supplementary measure in the existing hearing screening system， which is of great significance for early diagnosis， prevention and treatment for hereditary nonsyndromic deafness.

[Key words] Deafness gene; Hearing screening; Gene mutation; Hereditary nonsyndromic deafness

先天性耳聾是人類最常見的出生缺陷之一，發病率約為1‰～3‰[1]，大于50%的先天性耳聾是由遺傳因素造成[2，3]。遺傳性耳聾按是否伴有其他癥狀可分為綜合征性耳聾和非綜合征性耳聾。非綜合征性耳聾在遺傳性耳聾中約占70%，迄今已有120余個耳聾相關基因被克隆。按遺傳模式，非綜合征性耳聾可分為常染色體隱性遺傳、常染色體顯性遺傳、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳和線粒體遺傳。

國內耳聾相關基因分子流行病學研究表明，非綜合征性耳聾主要由GJB2、SLC26A4、線粒體DNA 12S rRNA、GJB3等突變引起[4-7]。本研究對2016年2月～2017年10月杭州地區分娩的4842例新生兒進行耳聾基因篩查，了解杭州地區新生兒常見非綜合征性耳聾基因的突變類型和頻率，探討常見非綜合征性耳聾基因篩查的臨床應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年2月～2017年10月杭州地區分娩的4842例新生兒。納入標準：新生兒監護人了解新生兒耳聾基因篩查的意義，簽署知情同意書;排除標準：新生兒隨訪失敗。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 ?新生兒出生后3 d內采集足底血制作血片，采用凱普血液基因組DNA提取試劑盒（離心柱）提取DNA，提取步驟參照試劑盒提供的使用說明書進行，取2 μL DNA用紫外線分光光度計進行定量和純度檢測。

1.2.2 PCR導流雜交法 ?取2 μL抽提好的DNA作為模板，分別加入到A、B兩個反應體系中，PCR反應體系為30 μL。使用ABI PCR儀進行多重PCR擴增。擴增后進行雜交及顯色，步驟參考耳聾易感基因檢測試劑盒提供的使用方法說明進行。

1.3 聽力篩查

采用兩階段篩查模式，所有新生兒在院期間應用篩查型耳聲發射儀進行耳聲發射常規聽力篩查，初篩未通過者，出生后42 d采用耳聲發射結合自動判別聽性腦干反應進行聽力復篩。

1.4 統計學方法

應用SPSS22.0統計學軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，計數資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 常見耳聾基因突變情況

4842例新生兒中共計200例篩查陽性，陽性率為4.13%。聽力篩查結果200例耳聾基因篩查陽性患兒中13例初篩未通過（6.50%，13/200），其中5例復篩未通過（2.50%，5/200），4例GJB2 235 del C純合突變及1例GJB2 235 del C合并299-300 del AT復合雜合突變未通過聽力篩查（表1）。耳聾基因篩查陰性組聽力篩查初篩360例未通過（7.76%，360/4642），其中5例復篩未通過（0.11%，5/4642），兩組聽力篩查結果有統計學差異（χ2=53.24，P<0.05）。

2.2 篩查GJB2基因3個位點

3個位點分別為235 del C、176-191del 16、299-300 del AT。4842例新生兒中檢測出GJB2基因熱點突變攜帶者58例，突變攜帶率為1.10%（58/4842）。GJB2 235 del C純合突變4例，全部未通過聽力篩查;GJB2 235 del C 合并299-300 del AT復合雜合突變1例，未通過聽力篩查;GJB2 235 del C雜合突變29例，全部通過聽力篩查，其中合并12S rRNA 1555A>G位點純合突變2例，合并SLC26A4 IVS7-2A>G位點雜合突變2例，合并SLC26A4 IVS15+5G>A雜合突變1例;GJB2 176-191 del 16位點雜合突變15例，全部通過聽力篩查;GJB2 299-300 del AT位點雜合突變9例，全部通過聽力篩查。

2.3 篩查SLC26A4基因7個位點

IVS7-2A>G、IVS15+5GA、2168A>G、1229C>T、1174A>T、1975G>C、1226G>A。4842例新生兒中檢測出SLC26A4基因熱點突變攜帶者98例，突變攜帶率為2.02%（98/4842）。其中IVS7-2A>G位點雜合突變29例，2168A>G 位點雜合突變18例，1229C>T位點雜合突變 17例，1975G>C位點雜合突變 10例，IVS15+5G>A 位點雜合突變10例，1226G>A位點雜合突變7例，1174A>T位點雜合突變3例，IVS15+5G>A雜合突變合并12S rRNA 1555A>G純合突變1例，SLC26A4基因雜合突變合并GJB2基因雜合突變3例。98例新生兒全部通過聽力篩查。

2.4 篩查12S rRNA基因2個位點

1555A>G位點，1494 C>T位點。4842例新生兒中檢測出12S rRNA基因熱點突變攜帶者19例，突變攜帶率為0.39%（19/4842）。其中1555A>G位點雜合突變5例，純合突變11例，其中1例為12S rRNA 1555A>G純合突變合并SLC26A4 IVS15+5G>A雜合突變，2例為12S rRNA 1555A>G位點純合突變合并GJB2 235del C位點雜合突變。12S rRNA 1494C>T位點雜合突變2例，12S rRNA 1494C>T位點純合突變1例。19例新生兒全部通過聽力篩查。

2.5 篩查GJB3 基因2個位點

538C>T位點、547G>A位點。4842例新生兒中檢測出GJB3基因熱點突變攜帶者31例，發現突變31例，突變攜帶率為0.64%（31/4842），其中538C>T14例，547G>A17例。31例新生兒全部通過聽力篩查。

3 討論

國內部分地區已普遍開展新生兒耳聾基因篩查，耳聾基因突變攜帶者在新生兒期常無明顯表現，常規聽力篩查也無法識別。本研究中195例耳聾基因突變攜帶者均通過常規聽力篩查，隨著年齡增長，在不良外界因素刺激下部分攜帶者可能出現不同程度的聽力損害，錯失早期干預的機會，攜帶者子代耳聾患病風險也顯著增加。單純傳統新生兒聽力篩查模式容易發生漏診，增加家庭及社會負擔。通過耳聾基因篩查早期診斷先天性耳聾5例，為早期干預及改善患兒言語發育提供依據。

3.1 GJB2基因

GJB2基因編碼耳蝸和表皮中表達的β類縫隙連接蛋白Connexin26（Cx26），（MIM：121011），是我國引起遺傳性非綜合征型耳聾最常見的致聾基因[6，8，9]。常呈常染色體隱性遺傳[10，11]，臨床表型以雙耳重度、極重度感應神經性耳聾為主[6，12，13]。本研究中GJB2基因突變攜帶率為1.20%（58/4842），低于既往研究結果[4，9]，可能與樣本量不足、不同地區突變頻率差異相關。GJB2 235 delC是本研究中最常見的GJB2基因突變位點，與其他研究結果一致[9，14-16]。

GJB2基因純合或復合雜合突變耳聾患者的螺旋神經節細胞數量正常，適合人工耳蝸植入，語前治療效果良好。本次篩查中5例GJB2基因純合突變及復合雜合突變新生兒通過進一步診斷性檢查確診為中重度至極重度感應神經性耳聾，分別植入人工耳蝸及佩戴助聽器，隨訪患兒言語發育水平無明顯異常，早期干預，避免了因聾致啞。

3.2 SLC26A4基因

SLC26A4基因是僅次于GJB2突變引起非綜合征性耳聾的遺傳學因素[17-19]，與前庭導水管擴大綜合征及Pendred綜合征密切相關，常呈常染色體隱性遺傳，主要表現為波動性或進行性感音神經性耳聾[6]。本研究中SLC26A4基因突變98例，占總篩查人數2.02%（98/4842），結果與既往報道一致[20]。SLCA26A4基因突變占本次新生兒耳聾基因突變攜帶者49%（98/200），高于GJB2基因突變攜帶率，這與其他研究結果不一致（參考文獻），可能與樣本量代表性欠佳、不同地區突變頻率差異相關，需進一步大樣本研究證實。

SLC26A4基因突變攜帶者出生時可無臨床表現，但由于前庭導水管異常擴大，凡引起顱內壓變化的因素，如頭部外傷、感冒、潛水等作用可出現聽力波動性損傷，個別患者可出現突發性耳聾。因此該基因突變攜帶者在日常生活中注意防護、避免不良因素刺激，加強聽力監測，對延緩聽力損害至關重要。

3.3 線粒體12S rRNA基因

線粒體12S rRNA基因為母系遺傳，與氨基糖苷類抗生素易感致聾密切相關。該基因突變可以導致12S rRNA的構象改變，與氨基糖苷類抗生素結合后阻礙線粒體內蛋白質合成，導致聽毛細胞逐漸凋亡引起永久性不可逆聽力損害。本研究中12S rRNA基因突變19例，占總篩查人數0.39%（19/4842），占本次新生兒耳聾基因突變攜帶者9.50%（19/200），與國內研究結果較一致[4]。

線粒體基因突變者在遺傳咨詢中需指導其臨床用藥，發放用藥警示卡，建議終身禁用氨基糖苷類等藥物，避免一針致聾。根據母系遺傳特點，依據新生兒篩查結果反推母系家庭成員基因型，對其他突變攜帶者進行防聾指導，具有巨大的社會效益。

3.4 GJB3基因

GJB3基因最早由我國學者夏家輝教授報道，為常染色體隱性遺傳，偶為常染色體顯性遺傳，臨床表現為語后高頻聽力下降，人群中攜帶率較低[21，22]。該基因編碼Cx31蛋白，是組成皮膚細胞間通道蛋白之一，GJB3突變被認為可能與變異性紅角皮病相關[23]，部分GJB3突變攜帶者同時表現為耳聾及皮膚病變。本次調查中GJB3突變31例，占總篩查人數0.64%（31/4842），占本次新生兒耳聾基因突變攜帶者15.5%（31/200），與既往報道一致[22，24]。該基因突變攜帶者新生兒聽力篩查均通過，可能與其遺傳方式相關。

遺傳咨詢中需告知新生兒監護人長期隨訪監測聽力情況，做到早發現、早干預;同時建議父母行相應位點檢測，如攜帶相同位點，亦需關注聽力情況，密切隨訪。

3.5 婚育指導

新生兒耳聾基因篩查對攜帶者婚育指導也有重要意義。GJB2、SLC26A4、GJB3基因往往表現為常染色體隱性遺傳，攜帶者配偶如為相同位點基因突變，子代耳聾患病風險為25%，因此建議攜帶者配偶進行耳聾基因檢測，必要時可通過產前診斷阻斷耳聾患兒出生，降低出生缺陷率。

總之，耳聾基因篩查是現有聽力篩查模式的良好補充，對遺傳性非綜合征性耳聾早診斷、早預防、早治療極為重要，避免因聾致啞。隨著篩查成本的降低，耳聾基因篩查聯合聽力篩查模式有望取代現有聽力篩查模式。對于攜帶者，需遺傳咨詢及耳鼻喉科醫師共同介入，提供診斷、治療、隨訪及生育指導。

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（收稿日期：2019-10-23）