黑果腺肋花楸有效成分提取工藝研究

王雪松 張素敏 隋韶奕 李珂

摘要：黑果腺肋花楸果實(shí)兼具營養(yǎng)價(jià)值和保健功能。采用乙醇回流提取法提取黑果腺肋花楸有效成分，以總黃酮含量為考察指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝參數(shù)。結(jié)果表明：黑果腺肋花楸果實(shí)有效成分最佳提取工藝為加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h。

關(guān)鍵詞：黑果腺肋花楸;有效成分;總黃酮;提取工藝;優(yōu)化

中圖分類號(hào)：TS255.3? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1674-1161（2020）05-0049-03

黑果腺肋花楸俗稱不老莓，為多年生薔薇科灌木，其果實(shí)為黑色漿果，營養(yǎng)極為豐富，含多種蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素等營養(yǎng)成分，同時(shí)含有黃酮、多酚、多糖等功能性成分，具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、抗癌、消炎止痛等功效。黑果腺肋花楸中脂溶性成分為其有效成分，以總黃酮含量為考察指標(biāo)。有效提取總黃酮是開發(fā)黑果腺肋花楸產(chǎn)品的關(guān)鍵工藝。本課題采用乙醇回流提取法，通過正交試驗(yàn)研究黑果腺肋花楸果實(shí)有效成分的最佳提取工藝，旨在為黑果腺肋花楸產(chǎn)品工業(yè)生產(chǎn)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑果腺肋花楸：遼寧嶺秀山礦泉飲品有限公司。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)20100206;乙醇：北京化工廠;硝酸鋁：中國惠世生化試劑有限公司;亞硝酸鈉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氫氧化鈉：北京化工廠。

1.2 儀器設(shè)備

電熱恒溫水浴鍋：北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠;分析天平：德國賽多利斯集團(tuán);超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司;DZF-6050型真空干燥箱：上海一恒科技有限公司;DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠;UV-2550型紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 分光光度法測(cè)定乙醇提取物中總黃酮含量 1） 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品約2.060 mg，精密稱定，置于10 mL量瓶中，加入適量乙醇，超聲處理使其溶解，放冷，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成0.206 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2） 供試品溶液的制備。將黑果腺肋花楸干果粉碎后取樣品0.030 g，置于25 mL量瓶中，加入濃度為50%的乙醇溶液25 mL，超聲處理使其溶解，放冷，過濾，收集續(xù)濾液。3） 最大吸收波長的確定。配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以相應(yīng)試劑作空白，在400～700 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。掃描圖譜如圖1所示，對(duì)照品溶液在505 nm波長處有最大吸收峰。4） 供試品溶液的測(cè)定。精密移取供試品溶液4 mL置于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，搖勻，加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，再加入氫氧化鈉試液5 mL，加去離子水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑作空白，在505 nm波長處測(cè)定吸光度值。

1.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以預(yù)試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇乙醇濃度（A）、加醇量（B）、提取時(shí)間（C）、提取次數(shù)（D）為考察因素，以總黃酮含量為考察指標(biāo)，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，因素水平設(shè)計(jì)見表1。按表1中設(shè)計(jì)條件進(jìn)行乙醇回流提取，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.22～1.25（60 ℃）的稠膏。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇提取物中總黃酮含量分析

2.1.1 線性關(guān)系結(jié)果 分別精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2，3，4，5，6 mL，置于25 mL量瓶中，以相應(yīng)試劑作空白，在波長505 nm處測(cè)定吸光度值，以總黃酮濃度為橫坐標(biāo)（X），吸光度為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2所示），求得回歸方程為Y=0.011 3X-0.004 0，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6，總黃酮濃度在24.336～56.784

μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.2 中間精密度試驗(yàn) 由不同時(shí)間、不同人員利用不同儀器檢測(cè)供試品溶液。分別取兩批平行樣品3份，制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

由表2可知：RSD為1.57%，表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

由表3可知：RSD為0.84%，表明含量測(cè)定重復(fù)性良好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液在室溫下分別放置0，10，20，30，40，50 min，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4。

由表4可知：RSD為1.55%，表明供試品溶液至少在50 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5 回收率試驗(yàn) 精密吸取已知總黃酮含量的供試品溶液6份，分別精密加入0.085 mg蘆丁對(duì)照品溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表5。

由表5可知：平均回收率為100.19%，表明此方法可行。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

黑果腺肋花楸有效成分提取正交試驗(yàn)結(jié)果見表6，方差分析結(jié)果見表7。

由表6和表7可知：以總黃酮含量為考察指標(biāo)，各因素對(duì)乙醇回流提取工藝的影響順序?yàn)樘崛〈螖?shù)>乙醇濃度>加醇倍量>提取時(shí)間，其中乙醇濃度和提取次數(shù)的影響有顯著性差異。綜合考慮選用常規(guī)方案，最佳工藝為A2B2C1D2，即：加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

按照正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選出的最佳工藝條件A2B2C1D2進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，結(jié)果見表8。

由表8可知：RSD為1.96%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明：影響乙醇回流提取工藝的各因素作用順序?yàn)樘崛〈螖?shù)>乙醇濃度>加醇倍量>提取時(shí)間，其中乙醇濃度和提取次數(shù)的影響有顯著性差異;通過對(duì)總黃酮含量的測(cè)定，確定最佳提取工藝為A2B2C1D2，即加10倍量的65%乙醇，回流提取2次，每次1.0 h;驗(yàn)證試驗(yàn)得到RSD為1.96%，說明該工藝簡(jiǎn)便、易行、穩(wěn)定。有效成分提取工藝優(yōu)化結(jié)果可為黑果腺肋花楸的功能性研究與應(yīng)用提供參考。

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