HPLC法測定芪歸益母膏中芍藥苷的含量

2020-10-10 07:51:18冉麗娟曾珍黎昌權

云南化工 2020年9期

冉麗娟，曾珍，黎昌權

（重慶市萬州食品藥品檢驗所，重慶萬州 404000）

芪歸益母膏是重慶市萬州區中醫院在多年臨床治療、應用過程中總結研發的自制制劑，處方由黃芪、當歸、益母草、白芍等四味中藥組成，具有益氣養血、調經止痛的作用，臨床上用于月經不調及痛經等，臨床應用效果滿意。該制劑現行質量標準只有通則檢查和薄層色譜鑒別試驗，白芍在該制劑中為臣藥，其指標成分明確，《中國藥典》2015年版一部［1］將芍藥苷作為白芍定量分析的指標之一。本文采用高效液相色譜法對芪歸益母膏中白芍所含活性成分芍藥苷的含量進行了方法學研究，為該制劑的質量控制提供了定量檢測方法。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，LCsolution色譜工作站。Sartorius型號為CP224S電子天平（Max 210 g；d＝0.1 mg）、Sartorius型號為ME215S電子天平（Max 210 g；d＝0.01 mg），分液漏斗，0.45μm微孔濾膜。

芍藥苷對照品（購買自中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201842，含量以97.4%計，使用前無需處理，供含量測定用），芪歸益母膏（重慶市萬州區中醫院提供，批號：20190605、20190829、20191029），正丁醇、乙醇、磷酸等均為分析純，乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［2-3］

色譜柱：InertSustainC18柱5μ（250 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：230nm；進樣量：20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品14.19mg，置50mL量瓶中，加稀乙醇適量，超聲處理15min使溶解，放冷，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液3.00mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品適量，混勻，精密稱取1.0g，置分液漏斗中，加水30mL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次30mL，合并正丁醇提取液，然后余液再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次30mL。最后所得正丁醇液置蒸發皿中，在水浴上蒸干，殘渣加稀乙醇10mL溶解并定容至25mL量瓶中，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備

按處方（不含白芍）及本品工藝制備供試品，按 “2.3”項方法處理即得陰性供試品溶液。

2.5 系統適用性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，色譜條件同上。記錄色譜圖，結果見圖1。圖1可得出，在此條件下，陰性供試品對芍藥苷的測定無干擾，而且芍藥苷和其他成分可達到基線分離，分離度R＞1.5。

圖1 芪歸益母膏HPLC圖譜

2.6 線性關系考察

分別精密量取 “2.2”項下的對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下，進樣量為20μL進行測定，記錄色譜圖，以峰面積A與芍藥苷對照品的濃度C（mg／mL）進行線性回歸，得到回歸方程為：A＝1.373×104C+2.037，r＝0.999 9。表明芍藥苷在0.0276～0.1382mg·mL-1的范圍內線性關系良好。