TGF-β1-Smad信號通路與膽管癌細胞發生上皮-間質轉化相關性研究

趙宇青，何其勇，國麟祺

佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154002

TGF-β能調節細胞生長和分化，TGF-β超家族包括多種TGF-β同種壓型，盡管結構相似，但這些配體基于其細胞、組織特異性表達，它們與抑制性分子的相互作用以及它們與之復合的受體形成獨特組合而引起不同的生物反應［1］。TGF-β1可誘導上皮-間質轉化已被廣大學者所接受［2-3］。TGF-β1是重要的促使上皮細胞向成纖維細胞分化的因子［4］，是上皮間質轉化中的關鍵因子,同時Smad2/3信號通路是TGF-β1作用的經典通路之一。另有研究認為，膽管癌細胞發生EMT是其發生遠處轉移前的必經之路［5-7］。故本研究就TGF-β1-Smad信號通路與膽管癌細胞發生上皮-間質轉化之間相關性做如下研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

膽管癌細胞QBC939（中國科學院上海細胞庫）、TGF-β1誘 導 劑（Selleckchem）、RPMI1640（Transgenbiotech）、優質胎牛血清（HyClone），其余實驗材料均來自佳木斯大學實驗室。

1.2 細胞培養

在RPMI1640+10%FBS培養基中培養細胞，于37℃、5%CO2、95%空氣的飽和濕度環境的培養箱中培養，細胞可貼壁生長，每天多次于倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況，并適時更換培養液。

1.3 TGF-β1誘導膽管癌細胞發生EMT

將膽管癌細胞QBC939消化離心后制成細胞懸液，向6孔板中接種，加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液培養。使細胞生長均勻，直至貼壁。待顯微鏡下觀察細胞已長至6孔板底壁的80%左右，向瓶中加入約2 m l RPMI-1640培養液，饑餓細胞12 h過夜后加入TGF-β1母液。將實驗組分為三組，分別設置濃度為1.0、5.0和10.0 ng/mL TGF-β1母液進行培養，對照組僅用含胎牛血清的培養基進行培養。分別于12、24和48 h后觀察細胞形態變化并拍照。……