桶裝飲用水生產(chǎn)中不同消毒劑對(duì)微生物的抑制作用及效果驗(yàn)證*

梁寶愛 趙海霞 閆 霞 孫麗萍

（山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原 030012）

隨著包裝飲用水消費(fèi)量的不斷提高，包裝飲用水的安全性越來越受到消費(fèi)者的關(guān)注，尤其是微生物指標(biāo)的安全性。在新修訂的GB 19298—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)包裝飲用水》，在微生物限量方面，標(biāo)準(zhǔn)中保留了與腸道致病菌存在可能性關(guān)聯(lián)較大的大腸菌群指標(biāo)，增加了條件致病菌銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 指標(biāo)，刪除了與食源性致病菌間缺乏必然聯(lián)系的菌落總數(shù)、霉菌和酵母、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌及志賀氏菌等衛(wèi)生指標(biāo)。銅綠假單胞菌作為一種重要的水源性和食源性致病菌，臨床治療過程中因其耐藥性強(qiáng)，易出現(xiàn)反復(fù)感染，對(duì)人體健康危害較大。銅綠假單胞菌的檢出說明包裝飲用水仍存在致病菌污染問題，表明消費(fèi)者存在受到致病微生物危害的可能性。

根據(jù)前期對(duì)我省30 余家桶裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)的實(shí)地調(diào)研情況，企業(yè)對(duì)周轉(zhuǎn)桶（回收桶） 使用的清洗消毒劑有氫氧化鈉、檸檬酸、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫等。其中，23 家企業(yè)使用單一的二氧化氯清洗消毒；1 家企業(yè)使用過氧乙酸清洗消毒；1 家企業(yè)使用過氧化氫清洗消毒；4 家企業(yè)采用熱堿和二氧化氯組合清洗消毒；2 家企業(yè)采用常溫堿和二氧化氯組合清洗消毒；1 家企業(yè)使用熱堿、熱酸、二氧化氯組合清洗消毒。

通過觀察企業(yè)的清洗消毒工藝，結(jié)合桶裝飲用水生產(chǎn)特點(diǎn)，得出周轉(zhuǎn)桶（回收桶） 清洗消毒是關(guān)鍵過程，若周轉(zhuǎn)桶（回收桶） 清洗消毒不徹底，會(huì)導(dǎo)致桶裝飲用水微生物污染尤其是銅綠假單胞菌的污染，出現(xiàn)不合格。本研究對(duì)不同消毒劑的殺菌效果進(jìn)行了模擬試驗(yàn)驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

CN 瓊脂培養(yǎng)基，北京陸橋有限公司；過氧乙酸消毒液，廣州環(huán)凱科技有限公司；30%過氧化氫，天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；超濃縮堿性清洗劑，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；檸檬酸，濰坊英軒實(shí)業(yè)有限公司；二氧化氯消毒劑，廣州環(huán)凱微生物科技有限公司；銅綠假單胞菌，ATCC27853；大腸埃希氏菌，CICC10305。

1.2 樣品的制備

為了驗(yàn)證不同消毒劑的消毒效果，分別將0.3 mL、0.5 mL、1.0 mL 的大腸埃希氏增菌肉湯和銅綠假單胞菌增菌肉湯分別加入裝有250 mL 無菌水樣的無菌塑料瓶中，作為污染樣本，將污染樣本放置24 h。

通過加入一定量不同濃度及種類清洗、消毒劑清洗污染的樣本，作用一定時(shí)間后，通過檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌的成活情況來驗(yàn)證消毒效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品污染狀況的檢測(cè)

將上述塑料瓶中不同接菌量的污染樣品倒出，加入250 mL 的無菌水樣，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間，按照標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定，檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌，結(jié)果均檢出。

2.2 不同消毒劑的驗(yàn)證試驗(yàn)

2.2.1 過氧乙酸試驗(yàn)

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、500 mg/L 的過氧乙酸50 mL 加入被污染的空塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間后倒出，再用無菌水沖洗塑料瓶后倒出，加入250 mL 的無菌水樣，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群和銅綠假單胞菌，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 過氧乙酸的試驗(yàn)結(jié)果

2.2.2 過氧化氫試驗(yàn)

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取體積濃度分別為1%、3%、5%的過氧化氫50 mL 加入被污染的空塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間后倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出，加入250 mL 的無菌水樣，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 過氧化氫試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 二氧化氯試驗(yàn)

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、500 mg/L 的二氧化氯50 mL 加入被污染的空的塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間后倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出，加入250 mL 的無菌水樣，模擬生產(chǎn)工藝一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群和銅綠假單胞菌，測(cè)定結(jié)果見下頁表3。

2.2.4 50 ℃、0.2%NaOH 和50 ℃、0.5%檸檬酸試驗(yàn)

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取加熱至50 ℃、0.2%NaOH 和50 ℃、0.5%檸檬酸50 mL 放入被污染的空塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間，倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出，加入250 mL 的無菌水樣，振搖一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌，測(cè)定結(jié)果見表4。

表3 二氧化氯試驗(yàn)結(jié)果

表4 50 ℃、0.2%NaOH 和0.5%檸檬酸獨(dú)立試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5 50 ℃、0.2%NaOH 和50 ℃、0.5%檸檬酸組合試驗(yàn)

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取加熱至50 ℃、0.2%的NaOH，加入被污染的空塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖后倒出，用無菌水沖洗塑料瓶后倒出；取加熱至50 ℃、0.5%的檸檬酸50 mL 放入上述塑料瓶中，振搖一段時(shí)間，倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出，放入250 mL 的無菌水樣，振搖一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌，測(cè)定結(jié)果見表5。

通過試驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，采用上述清洗消毒工藝試生產(chǎn)，雖然產(chǎn)品微生物限量符合GB 19298 規(guī)定，但水體中含有較多的雜菌，檢測(cè)銅綠假單胞菌用濾膜上有較多的雜菌，很難保證保質(zhì)期內(nèi)產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定。因此充分證明，還需增加消毒劑消毒工藝。

2.2.6 50 ℃、0.2%NaOH，50 ℃、0.5% 檸檬酸和ClO2組合試驗(yàn)

表5 50 ℃、0.2%NaOH 和0.5%檸檬酸組合試驗(yàn)結(jié)果

將上述不同接菌量的污染樣品倒出，取加熱至50 ℃、0.2%NaOH 加入被污染的空塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖一段時(shí)間，倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出；取加熱至50 ℃、0.5%檸檬酸50 mL 加入上述塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖，倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出；取100 mg/L 二氧化氯50 mL 加入上述塑料瓶中，模擬生產(chǎn)工藝振搖，倒出，用無菌水沖洗塑料瓶，倒出；加入250 mL 無菌水樣，振搖一段時(shí)間，檢測(cè)大腸菌群、銅綠假單胞菌，檢測(cè)結(jié)果見表6。

表6 50 ℃、0.2%NaOH，0.5%檸檬酸和100 mg/L ClO2組合試驗(yàn)結(jié)果

通過上述試驗(yàn)證明，采用熱堿、熱酸和二氧化氯消毒劑組合對(duì)周轉(zhuǎn)桶（回收桶） 清洗消毒，可有效控制桶裝飲用水的微生物。

3 結(jié)論

桶裝飲用水生產(chǎn)中，銅綠假單胞菌極易滋生繁殖，而常用的紫外線及臭氧消毒方法的穿透力弱，過氧化氫、過氧乙酸與大腸菌群接觸后攻擊細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)、DNA 等細(xì)胞組分，而對(duì)銅綠假單胞菌殺滅效果較差，不能有效控制桶裝飲用水銅綠假單胞菌污染，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量安全造成較大風(fēng)險(xiǎn)。采用熱堿、熱酸和二氧化氯消毒劑組合清洗消毒，對(duì)大腸菌群、銅綠假單胞菌殺滅作用較強(qiáng)，能有效控制銅綠假單胞菌污染，降低桶裝飲用水微生物指標(biāo)超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)，提高產(chǎn)品質(zhì)量。