結核感染T 細胞斑點試驗聯合降鈣素原檢測對結核桿菌感染的臨床意義分析

王琳

肺外結核是目前臨床上常見的一種慢性傳染病。近年來，環境不斷惡化導致我國結核病的發病率逐年上升。肺外結核已經嚴重危害我國患者的健康和生活質量，因此肺外結核的診斷非常重要［1］。目前，細菌學診斷是臨床診斷肺外結核較為準確的檢測方法，但細菌學診斷檢測過程復雜、費時，對肺外結核的診斷正確率并不高。近年來，結核感染T 細胞斑點檢測是檢測肺外結核的有效方法，是在QuantiFERON-TBGold試驗基礎上改進的新型免疫學方法。本研究在結核感染T 細胞斑點檢測的基礎上聯合PCT 檢測對患者臨床意義，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1 月～2020 年1 月收治的270 例疑似結核感染患者納入實驗組，參照中華醫學會結核病學分會制定的《肺結核診斷和治療指南》［2］，對患者進行診斷，并且將結核分枝桿菌培養陽性、組織病理學檢查呈干酪樣壞死改變的患者納入活動性結核組，將陳舊性結核病、結核潛伏感染患者納入非活動性結核組。270 例實驗組患者中，72 例為結核感染［活動性結核46 例(活動性結核組)，非活動性結核26 例(非活動性結核組)］，198 例為非結核感染(非結核組)。選取同期健康體檢人群100 例納入對照組。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ①疑似結核感染，自愿接受結核感染T 細胞斑點試驗和PCT 聯合檢測，經痰培養明確診斷；②病歷資料完整，影像學檢查無腫瘤類疾病，實驗室檢查確認身體狀態良好。

1.2.2 排除標準 ①具有肝腎功能障礙的患者，代謝系統疾病的患者；②自身免疫系統疾病的患者；③有免疫抑制劑或免疫增強類藥物使用史的患者；④不愿意參加者。

1.3 方法 所有受試者均采集外周靜脈血進行結核感染T 細胞斑點試驗。由上海復星長征醫學研究科技有限公司提供結核感染T 細胞斑點檢測試劑盒，5 h 內分離外周血單個核細胞。將細胞重新懸浮于aim-v 培養基中，調整細胞濃度為2.5×106/ml 來制備標準溶液。將50 μl 的aim-v 培養基和植物血凝素分別加入到實驗組以及對照組的微孔板中。依次向每個孔中加入100 μl 含2.5×105PBMC 的標準溶液，將微孔板置于36.6℃且CO2濃度5%的培養箱中25 h。洗脫后應加入60 μl 底物顯色液，室溫孵育6 min，用蒸餾水徹底清洗培養板停止反應。計算每個孔中色斑的數量。判定標準：陰性對照孔數＜5 個的試樣作為陰性，陰性對照孔數≥5 個的試樣為陽性。PCT 檢測：采集受試者外周靜脈血5 ml，使用PCT 定量檢測試劑盒按照試劑盒使用說明書檢測血清PCT 水平。

1.4 觀察指標 觀察結核感染T 細胞斑點試驗聯合PCT 的檢測結果及血清PCT 水平。

1.5 統計學方法 采用SPSS18.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示，采用t檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 結核感染T 細胞斑點試驗聯合PCT 的檢測結果 結核感染T 細胞斑點試驗聯合PCT 檢測的靈敏度為86.11%(62/72)，特異度為91.92%(182/198)。見表1。

2.2 各組受試者PCT 水平比較 活動性結核組PCT(0.37±0.05)ng/ml 明顯高于非活動性結核組的(0.20±0.11)ng/ml、非結核組的(0.09±0.06)ng/ml、對照組的(0.09±0.03)ng/ml，非活動性結核組PCT 水平明顯高于非結核組、對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；非結核組與對照組的PCT 水平比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 各組受試者PCT 水平比較(，ng/ml)

表2 各組受試者PCT 水平比較(，ng/ml)

注：與對照組比較，aP＜0.05；與非結核組比較，bP＜0.05；與非活動性結核組比較，cP＜0.05

3 討論

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種慢性傳染病，且結核桿菌可以侵襲人體的各種器官，但結核桿菌主要侵犯患者肺部，稱為肺結核，臨床高發［3］。其中呼吸道傳播是肺結核感染的一種主要途徑。患者感染途徑是患者接觸到結核桿菌排放的肺結核患者。在臨床上，發現更有效的診斷方法已成為了一種趨勢，由于該病影像學特征不明顯，痰細菌的陽性率較低，診斷率不高，但是有著較高的漏診率與誤診率。結核菌素純蛋白衍生物試驗在臨床上應用比較多，是臨床上主要的診斷結核感染的指標，其缺點為假陽性率較高，在臨床應用上局限性比較大。應用結核感染T 細胞斑點試驗對結核病進行早期診斷已經成為一種新的趨勢，該檢測準確率比較高，但是結核分枝桿菌培養仍是結核病診斷的金標準，結核分枝桿菌培養其診斷的局限性和誤診率高，主要是由于結核分枝桿菌的培養時間長，但是敏感性低，已經漸漸被新技術淘汰。血清結合抗體檢測其假陽性比較高，主要的假陽性群來自于既往感染過結核桿菌，但是已經痊愈，或者對結核菌已獲得免疫力的群體，也會造成假陽性，有些患者體質特殊，還會造成假陰性，影響臨床診斷［4］。因此，臨床上探索一種有效的結核病診斷方法具有重要意義。

結核感染T 細胞斑點試驗是在細胞熒光技術單細胞水平檢測基礎上發展起來的一種新型細胞免學檢測技術，細胞熒光技術具有較高的敏感性和特異性，臨床準確率高。主要的工作原理是感染結核分枝桿菌，機體會出現記憶性T 淋巴細胞，如果再次受到結核分枝桿菌的感染，記憶性T 淋巴細胞會快速繁衍，效應性T淋巴細胞形成，抗干擾素-γ 分泌增多，因此通過檢測抗干擾素-γ 的淋巴細胞數目，可以準確的判斷是否感染結核分枝桿菌［5］。由于結核病患者的不同階段，體液免疫與細胞免疫之間存在一定的失衡。此時，體液免疫和細胞免疫的檢測可以從不同角度反映結核病的診斷效果，在一定程度上提高了結核感染T 細胞斑點試驗診斷的準確性。在臨床上聯合應用結核感染T 細胞斑點試驗對結核病的診斷具有較高的敏感性和特異性，并且可以排除假陽性，結合結核感染T 細胞斑點試驗可顯著提高結核病的診斷水平以及檢出率。由于我國患者結核病感染以及隱性結核病感染例數較多，因此，一些國外文獻報道的數據只能作為參考，不能完全符合我國的實際情況。作者在試驗中發現，結核感染T 細胞斑點試驗特異性較高，特別是抗原A 孔和B 孔的斑點數＞25 時就強烈提示患者具有結核感染，但對結核桿菌敏感性較低。

本研究也具有一定的局限性，本研究的不足之處在于入選病例數少，非結核健康人與非結核肺疾病患者沒有分離。因此，在后期，需要繼續增加研究樣本的數量，進一步研究結核病的診斷。另一點局限性為在敏感性評價中，部分受試者可能是臨床懷疑度高和缺乏細菌學證據的肺結核患者。特異性評價中沒有一名受試者有明確的活動性肺結核接觸史，但經臨床證實為其他感染疾病。由于對潛伏性肺結核感染的診斷沒有“金標準”。PCT 無激素活性，是降鈣素前肽物質，非疾病狀態下血清中含量非常低，當機體出現嚴重感染的情況下才會增加，當機體出現嚴重細菌感染，會迅速分泌大量PCT。有研究顯示，當機體處于結核桿菌感染活動期是，其PCT 水平會高于非活動期結核組，這與本研究的結果相同。分析原因，主要是因為隨著機體結核感染的加重，機體轉化生長因子β1、腫瘤壞死因子-α、C 反應蛋白、PCT 等多種細胞因子水平顯著上升，他們之間相互誘導，促進結核疾病的進展，導致結核結節和干酪樣壞死的發生發展。此外，葉綏艷等［6］使用結核感染T 細胞斑點試驗聯合PCT檢測結核感染發現，結核感染T 細胞斑點試驗檢測準確率明顯高于其他檢測方法，血清PCT 水平變化與結核感染患者預后呈顯著負相關，說明對結核病的診斷和預后判斷，以上研究與本研究相同。本試驗結果顯示，結核感染T 細胞斑點試驗聯合PCT 檢測的靈敏度為86.11%(62/72)，特異度為91.92%(182/198)。活動性結核組PCT(0.37±0.05)ng/ml 明顯高于非活動性結核組的(0.20±0.11)ng/ml、非 結核組的(0.09±0.06)ng/ml、對照組的(0.09±0.03)ng/ml，非活動性結核組PCT 水平明顯高于非結核組、對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；非結核組與對照組的PCT 水平比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。

綜上所述，對結核患者采取結核感染T 細胞斑點試驗檢驗的意義顯著，特異性、敏感性強，結合血清PCT 檢測能夠輔助判斷病情發展及預后，兩種檢驗同時應用，具有較高的臨床診斷價值，臨床醫生可以聯合應用，值得進一步研究。