琥珀酸多西拉敏有機溶劑殘留量測定的方法

喬喬，余小紅，許龍，李娟，曹陽，曹明成，黃順旺

作者單位：合肥創新醫藥技術有限公司，安徽 合肥230088

琥珀酸多西拉敏，英文名稱為doxylamine succinate，化學名為N，N-二甲基-2-［1-苯基-1-（2-吡啶基）乙氧基］乙胺琥珀酸鹽，分子式為C21H28N2O5，分子量為388.46。琥珀酸多西拉敏為白色或類白色粉末，極易溶于水，易溶于乙醇、甲醇，略溶于丙酮。琥珀酸多西拉敏是乙醇類抗組胺藥，具有抗組胺作用、抗膽堿作用和顯著的鎮靜作用［1-10］。其適用于多種過敏性皮膚病、枯草熱、過敏性鼻炎、哮喘性支氣管炎等，也可作為催眠藥用于失眠的短期治療［11-15］，國內尚未批準上市。

琥珀酸多西拉敏的合成工藝中用到了有機溶劑四氫呋喃、異丙醇、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、乙苯和二甲苯（通常含有60%間二甲苯、14%對二甲苯、9%鄰二甲苯和17%乙苯），這些殘留溶劑水平高于安全值時，就會對人體或環境產生危害，所以需要開發出檢出限定量限低、靈敏度專屬性強、精密度準確度高的琥珀酸多西拉敏殘留溶劑的檢測方法。

在 USP40［16］、EP9.0［17］和 BP2016［18］的琥珀酸多西拉敏原料質量標準中，均未收錄其殘留溶劑的檢測標準。本研究于2016 年7 月至2017 年6 月參照人用藥品注冊技術國際協調會議（ICH）對有機溶劑殘留量測定的指導原則［19］、中國藥典收錄的殘留溶劑測定法及藥品質量標準分析方法驗證指導原則［20］，建立了琥珀酸多西拉敏原料殘留溶劑測定方法并進行了方法驗證。

1 儀器與試劑

GC-2010plus氣相色譜儀（日本島津），島津火焰離子化檢測器（FID），Labsolutions DB版色譜數據工作站，AG135型雙量程電子天平（梅特勒·托利多）。

琥珀酸多西拉敏原料中試樣品3批（20190301、20190302、20190303）均為自制樣品；二甲基亞砜（DMSO）為色譜純，甲基叔丁基醚、四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、乙苯、對二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯均為分析純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1溶液的制備取本品約0.2 g，精密稱定，置20 mL量瓶中，加70%DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取甲基叔丁基醚500 mg，四氫呋喃72 mg，乙酸乙酯500 mg，異丙醇500 mg，乙苯37 mg，對二甲苯30 mg，間二甲苯130 mg，鄰二甲苯20 mg，置同一50 mL 量瓶中，加DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取適量，加70%DMSO溶解并稀釋制成每1 毫升中約含甲基叔丁基醚50 μg，四氫呋喃7.2 μg，乙酸乙酯50 μg，異丙醇50 μg，乙苯3.7 μg，對二甲苯3.0 μg，間二甲苯13.0 μg，鄰二甲苯2.0 μg 的溶液，作為混合對照品溶液。精密量取上述溶液各10 mL置頂空瓶中，密封，頂空進樣1 mL，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，考察各溶劑峰的分離度。

2.2色譜條件及系統適用性采用氣相色譜法，按照殘留溶劑測定法［20］測定。以聚乙二醇（或極性相近）為固定液的毛細管柱為色譜柱；起始溫度為35 ℃，維持10 min，以每分鐘10 ℃的速率升溫至50 ℃，維持15 min，再以每分鐘40 ℃的速率升溫至220 ℃，維持15 min；進樣口溫度為200 ℃；檢測器FID溫度為250 ℃；頂空瓶平衡溫度為85 ℃，平衡時間為30 min。精密量取按“2.1”項下方法制備的系統適用性溶液10 mL 置頂空瓶中，密封，頂空進樣1 mL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1 所示。系統適用性溶液中，各溶劑峰分離度均＞1.5，理論塔板數均大于2 000，符合要求。

圖1 系統適用性試驗毛細管氣相色譜圖

2.3定量限、檢測限、線性范圍精密稱取甲基叔丁基醚500 mg、四氫呋喃72 mg、乙酸乙酯500 mg、異丙醇500 mg、乙苯217 mg、對二甲苯217 mg、間二甲苯217 mg、鄰二甲苯217 mg，加DMSO溶解并稀釋至20 mL，搖勻；精密量取1 mL用DMSO溶解并稀釋至50 mL，搖勻，作為混合對照品貯備液；用70%DMSO 稀釋以測定各成分的定量限與檢測限。精密量取混合對照品貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 mL，分別置20 mL量瓶中，各加70%DMSO稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液（1）、（2）、（3）、（4）、（5）。分別精密量取定量限溶液和線性溶液10 mL置頂空瓶中，密封，頂空進樣1 mL，記錄色譜圖。以各成分的峰面積為縱坐標（Y），濃度為橫坐標（X），進行線性回歸，結果見表1。各溶劑在所考察的濃度范圍內均具有良好線性，相關系數r為0.999 0～0.999 5。

表1 琥珀酸多西拉敏殘留溶劑定量限、檢測限與線性

2.4精密度與準確度精密度：按“2.1”項下方法制備供試品6份，在“2.2”色譜條件下，以氣相色譜儀進行測定，計算各有機殘留溶劑含量相對標準偏差（RSD）。6份樣品中，單個殘留溶劑含量的RSD均＜10%。

準確度：精密量取混合對照品貯備液，加入供試品中，制成含各已知雜質為限度的80%、100%、120%的回收率樣品，進樣分析，記錄色譜圖，計算各殘留溶劑回收率。8種殘留溶劑的平均加樣回收率在99.1%～101.6%，RSD均＜5%。

2.5溶液穩定性按“2.1”項下制備混合對照品溶液，25℃放置，并于0、2、4、6、8、12、24 h 分別取樣進樣分析，記錄色譜圖。計算得混合對照品溶液中單個殘留溶劑峰面積的RSD均小于10%，表明混合對照品溶液放置在室溫條件下24 h內是穩定的。

2.6耐用性通過分別調整色譜條件中的進樣口溫度±5 ℃、檢測器溫度±5 ℃、載氣流速±0.05 mL/min及更換不同品牌色譜柱，考察混合對照品溶液中各殘留溶劑峰之間分離度的情況。結果表明，進樣口溫度、檢測器溫度、載氣流速及更換不同品牌色譜柱等參數的調整對測定結果基本不會產生影響，方法的耐用性良好。

表2 琥珀酸多西拉敏中試批原料殘留溶劑毛細管氣相色譜法檢測結果/%

2.7樣品測定按上述已確定的色譜條件及方法，對3批琥珀酸多西拉敏中試批原料進行殘留溶劑測定，按外標法計算供試品溶液中有機殘留溶劑含量。結果見圖2 與表2 所示，各批次樣品殘留溶劑量均符合質量標準。

圖2 琥珀酸多西拉敏中試批原料殘留溶劑檢測毛細管氣相色譜圖

3 討論

琥珀酸多西拉敏易溶于水，但水直接進樣對毛細管柱存在損害，且以水作溶劑時色譜峰形及分離度均明顯不佳，因此選擇有機溶劑作溶媒。琥珀酸多西拉敏在DMSO 中溶解度較大，且沸點較高；在本研究色譜條件下，溶劑出峰位置在所有待測組分之后，對測定結果無干擾，故選用70%DMSO為溶劑并采用頂空進樣方式，選用強極性的氣相毛細管柱（聚乙二醇為固定相）作分析柱，結果表明，各殘留溶劑之間均能達到較好的分離。

國內外琥珀酸多西拉敏的生產工藝不同，應根據各國生產的實際情況制定相應的質量標準。試驗證明，本研究建立的色譜方法操作簡便，能較好地分離8 種殘留溶劑，且靈敏度高，專屬性、重現性均較好，尚未見其他文獻報道。本方法能夠準確測定琥珀酸多西拉敏中有機溶劑殘留量，為琥珀酸多西拉敏原料質量控制提供試驗依據。