檸條花總生物堿抗氧化活性研究

張艷珍 王菲

摘?要：以檸條（錦雞兒）花為原料，采用溶劑回流法提取總生物堿，并對提取的檸條花粗生物堿采用體外實驗模型進行抗氧化能力研究，同時與抗壞血酸和苯甲酸作對比。結果表明：檸條花總生物堿提取物具有顯著的抗氧化能力，清除能力遠大于苯甲酸，略小于抗壞血酸。

關鍵詞：檸條花;生物堿;抗氧化

檸條（錦雞兒）主要分布于內蒙古、甘肅、寧夏、青海等地，它生長快，生物產量高，根、莖、葉、花等含有豐富的營養物質，具有滋陰養血等藥用價值[1-2]。檸條花富含粗脂肪、粗纖維、碳水化合物、總黃酮、生物堿、多酚等，其中生物堿具有抗菌、降血糖、抗腫瘤、抗心律失常、抗血小板聚集等活性，是許多藥用植物的有效成分[3-5]。該試驗以檸條花為原料，探討了檸條花中總生物堿提取物對有機自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的清除作用，以期為檸條花生物堿的利用提供科學依據。

1?材料與設備

1.1?材料與試劑

檸條花：購于青海省西寧市;鹽酸小檗堿對照品，中國藥品生物制品檢定所;溴甲酚綠，天津市白世化工公司;檸檬酸（分析純），天津市光復科技發展有限公司;磷酸氫二鈉（分析純），天津市紅巖化學試劑廠;甲醇（色譜純），天津市白世化工有限公司;鹽酸（分析純）;氫氧化鈉（分析純）;水為蒸餾水;氯仿為分析純;無水乙醇。

1.2?儀器與設備

DK-8D型電數顯水浴鍋，金壇市盛威實驗儀器廠;TU-1800spc型紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司;BS224S型電子分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司;PH211型pH計，北京哈納科儀科技公司。

2?方法

2.1?生物堿的提取工藝路線

檸條花挑揀后60℃下烘干，粉碎過40目篩，稱取粉碎過的檸條花2.0g于250 mL圓底燒瓶中，采用1∶15料液比加入90%乙醇（含0.1% HCL）回流提取1h，同法提取2次，合并濾液，用NaOH溶液調節pH至7.0，過濾收集濾液定容至50 mL容量瓶中，提取液經旋轉蒸發濃縮，揮發乙醇，即為總生物堿溶液。

2.2?體外實驗模型法研究檸條花生物堿抗氧化能力

經測定，檸條花總生物堿提取物濃度為4.8g/L。取總生物堿提取液 5、15、25、35、45、50 mL，加乙醇定容至50mL，得到 0.48、1.44、2.4、3.36、4.32、4.8g/L不同濃度的總生物堿提取物液;以苯甲酸溶液和抗壞血酸溶液作為對照，待用。

2.2.1?清除DPPH·自由基的測定?準確稱取DPPH試劑3.5mg，用無水乙醇溶解，并定量轉入10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，取2mL至100 mL容量瓶中，搖勻得濃度為0.017 8mmol/L DPPH貯備液，置于冰箱中冷藏備用。取2mL 0.017 8mmol/L DPPH無水乙醇溶液，加入不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，充分振搖后，室溫下暗處放置 10min，然后在 517nm處比色測定，用甲醇作為空白。以抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗[6]。清除率計算公式為式（1）：

式（1）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.2?清除羥基自由基（·OH ）的測定?采用水楊酸法：取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，分別加入2% FeSO4溶液 1 mL 、5%水楊酸溶液 1 mL 、蒸餾水6 mL、3% 過氧化氫 1 mL，37 ℃下恒溫 0.5 h，在波長 510 nm 處測定吸光度A1，用甲醇作為空白。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗[7]。清除率計算公式為式（2）：

式（2）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.3?清除超氧陰離子（O-2）的測定?采用鄰苯三酚法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，各加入 pH為8的Tris—HC1緩沖液 5mL 、蒸餾水 2mL，25 ℃下恒溫 20 min。加入 0、1%的鄰苯三酚溶液 1mL，反應 4 min，滴加2滴濃鹽酸溶液終止反應，在 320 nm處測定吸光度 A1，空白對照測得吸光度 A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗[8]。清除率計算公式為式（3）：

式（3）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.4?清除亞硝酸根離子 （NO2-）的測定?采用重氮偶合比色法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，各加入0.1mol/L NaNO2溶液 0.5 mL、蒸餾水6 mL，振蕩搖勻，37 ℃下恒溫1 h。取出后加入0.4%的對氨基苯磺酸1 mL，靜置10 min。加入0.2%鹽酸萘乙胺試液0.5 mL，靜置5min，在540 nm 處測定吸光度A1、空白對照的吸光度A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗[9]。清除率計算公式為式（4）：

式（4）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

3?結果與分析

3.1?檸條花生物堿體外抗氧化活性研究結果

3.1.1?清除有機自由基?DPPH在有機溶劑中是一種穩定的自由基，呈現紫紅色。當有自由基清除劑存在時，DPPH的孤電子配對，顏色變淺，吸光度變小。顏色的變化程度與配對電子呈一定關系，因此可以用吸光度的測定來評價自由基的清除作用。由圖1可知，對照品抗壞血酸表現出較強的DPPH·自由基清除能力，苯甲酸表現出較弱的DPPH·自由基清除能力。在低濃度的時候，總生物堿提取物的DPPH·自由基清除能力略低于抗壞血酸，但隨著濃度的增加，清除能力顯著高于苯甲酸，略低于抗壞血酸。

3.1.2?清除羥基自由基（·OH ）?研究生物堿提取物對羥自由基的清除能力具有重要的意義[10]。由圖2可知，生物堿提取物對羥自由基具有一定的清除作用，清除率隨著樣品濃度的增加呈現上升趨勢。綜合比較三者，生物堿提取物的清除能力明顯高于苯甲酸，稍低于抗壞血酸。

3.1.3?清除超氧陰離子（O-2）?鄰苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放出超氧陰離子。加入清除劑后能夠清除其中的超氧陰離子 [11]。由圖3可知，生物堿提取物具有一定的清除超氧陰離子的作用，清除率隨著樣品濃度的上升呈現逐漸上升的趨勢。清除率不如抗壞血酸，但明顯優于苯甲酸。

3.1.4?清除亞硝酸根離子 （NO-2）?由圖4可知，總生物堿提取物對亞硝酸根離子的清除率隨著樣品濃度的增大呈現上升趨勢，且在相同的濃度下清除率大于苯甲酸而小于抗壞血酸，說明檸條花總生物堿對亞硝酸根離子具有一定的清除作用。

4?結論

抗氧化試驗結果表明，檸條花總生物堿抗氧化能力預期濃度具有量效關系，檸條花總生物堿提取物具有清除有機自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的能力，清除能力遠大于苯甲酸，略小于抗壞血酸，可見檸條花總生物堿具有明顯的抗氧化活性，這預示著生物堿在抗氧化劑、抗衰老方面存在著潛在的利用價值。

參考文獻

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