液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品中的黃曲霉毒素分析

谷葉　黃和飛

摘 要：為提升黃曲霉毒素（AFT）檢測(cè)的靈敏度，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法檢測(cè)食品內(nèi)4種AFT（B1、B2、G1和G2）。發(fā)現(xiàn)4種組分于5 min內(nèi)整體分離，且該方法具有良好的線性相關(guān)性，B1、B2、G1和G2的檢出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/㎏和0.008 μg/㎏，加標(biāo)回收率均值為80.0%～94.5%，RSD<5.0%。用LC-MS/MS檢測(cè)食品AFT，有速度快、靈敏度高、精確可靠等優(yōu)勢(shì)，有推廣價(jià)值。

關(guān)鍵詞：食品;黃曲霉毒素;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

AFT，即由黃曲霉與寄生曲霉等真菌代謝后形成的一種毒害性真菌霉素。AFT及其衍生物有20余種，其中B1、B2、G1與G2在自然界內(nèi)廣泛分布，其基本結(jié)構(gòu)均由一個(gè)呋喃環(huán)與一個(gè)香豆素組成，前者是毒素的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)，后者和AFT的致癌性密切相關(guān)，且對(duì)前者的毒性有加強(qiáng)作用[1]。因?yàn)锳FT對(duì)機(jī)體健康造成的危害較大，故而多個(gè)國(guó)家政府機(jī)關(guān)與有關(guān)組織陸續(xù)擬定了食品內(nèi)AFT的檢測(cè)分離方法，和其他檢測(cè)方法相比，LC-MS/MS法分離能力強(qiáng)、靈敏度高，能實(shí)現(xiàn)對(duì)多種化合物的定性定量分析，本文主要用其檢測(cè)食品中4種AFT（B1、B2、G1與G2），具體如下。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

從市面上采購(gòu)花生、玉米、燕麥片等。制備AFT的B1、B2、G1與G2混合標(biāo)準(zhǔn)液（前兩者的質(zhì)量濃度均為1 μg/mL，后兩者均為0.3 μg/mL）。乙醇、甲醇均為色譜純，甲酸為分析純，超純水。

1.2 儀器和設(shè)備

選用6430三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)及相關(guān)配套設(shè)施檢測(cè)AFT，還有凈化柱、電子天平、超聲波清洗器與超純水儀等設(shè)施。

1.3儀器參數(shù)

1.3.1 色譜條件

選Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）作為色譜柱;流動(dòng)相為0.1%甲酸-甲醇（3∶2）;設(shè)定流速0.4 mL/min;柱體溫度35 ℃;進(jìn)樣量為5 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

選取噴霧電離源作為離子源，基于正離子模式加以掃描;干燥氣流速、溫度依次為12 mL/min、345 ℃;霧化氣壓力為50 psi;毛細(xì)管電壓4 000 V;質(zhì)量掃查范疇100～500 m/z。

4種AFT的MRM掃描參數(shù)見(jiàn)表1。

1.4 處理試樣

分別量取25 g試樣，將其依次放入到容積為250 mL的錐形瓶?jī)?nèi)，而后把100 mL乙腈-水溶液加入其中，連續(xù)快速攪拌3 min，將如上制得的混合液通過(guò)定性濾紙與Mycosep 226真菌毒素凈化柱，以獲得凈化液，提取適量通過(guò)0.22 μm濾膜，采集待測(cè)。

1.5 線性范圍和檢測(cè)限

把標(biāo)準(zhǔn)樣品液稀釋為數(shù)個(gè)不同濃度梯度，按濃度由低至高順序進(jìn)樣5 μL，橫、縱坐標(biāo)分別設(shè)定為進(jìn)樣濃度、峰面積，進(jìn)行線性回歸分析。

1.6 精密度和回收率試驗(yàn)

對(duì)各試樣反復(fù)進(jìn)行5次進(jìn)樣，檢測(cè)到各組分對(duì)應(yīng)的峰面積，測(cè)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以評(píng)估方法的精密度。為檢測(cè)該方法的回收率，提取3份試樣，依次添加體積不同的標(biāo)準(zhǔn)液，測(cè)算出加標(biāo)回收率。

2 結(jié)果和分析

當(dāng)甲醇和水相比例為3∶2時(shí)，4種組分于5 min內(nèi)陸續(xù)出峰，取得了最佳的分離效果[2]。

取用濃度存在差異的標(biāo)準(zhǔn)液，依照設(shè)定的色譜、質(zhì)譜條件進(jìn)樣，基于峰面積（y）與試樣含量（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得相應(yīng)的線性方程與有關(guān)系數(shù)，并測(cè)算出檢出限與定量限。具體見(jiàn)表2。

依照1.6方法開(kāi)展精密度與回收率試驗(yàn)，測(cè)算RSD，精密度檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3[3]。

分析表2內(nèi)的數(shù)據(jù)后，發(fā)現(xiàn)RSD均<5.0%。進(jìn)行回收率試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品的回收率均在80.0%～94.5%。綜合各種數(shù)據(jù)信息后，認(rèn)為該檢測(cè)方法的精密度與回收率均較好。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究中建立了LC-MS/MS法檢測(cè)食品內(nèi)AFT，使用甲醇和水等進(jìn)行洗脫，于質(zhì)譜正離子模式下進(jìn)行監(jiān)測(cè)，4種組分于5 min內(nèi)整體分離，B1、B2、G1與G2的檢出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/㎏與0.008 μg/㎏，加標(biāo)回收率均值為80.0～94.5%，RSD<5.0%，均符合相關(guān)限量規(guī)范要求。LC-MS/MS檢測(cè)食品內(nèi)AFT，有過(guò)程快速、靈敏度高、精確可靠等諸多優(yōu)勢(shì)，值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1]董靖，張瀟，劉越，等.2種高效液相色譜儀測(cè)定芝麻醬中黃曲霉毒素B1的不確定度評(píng)定[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2020，11（7）：2190-2196.

[2]陳夢(mèng)，鄒小龍，范蕾，等.高效液相色譜法測(cè)定牛奶中黃曲霉毒素M1含量的不確定度評(píng)定[J].分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2020，26（1）：71-75.

[3]于建玉，任合松.QuEChERS-HPLC快速測(cè)定牛奶中的黃曲霉毒素M1[J].化學(xué)工程師，2020，34（3）：29-31.