飲料中霉菌和酵母計數檢驗結果不確定度的評定

摘 要：為了真實反應飲料中霉菌和酵母計數檢驗結果的精確度，評定霉菌和酵母計數的不確定度，探討并建立了簡單易行的飲料中霉菌和酵母計數檢驗的不確定度評定方法，確定了樣品中霉菌和酵母計數檢測的置信區間。

關鍵詞：飲料;霉菌和酵母計數;不確定度

測量不確定度是與測量結果相關聯的參數，正確評定測量不確定度對客觀分析測量結果有重要意義[1-3]。隨著實驗室認可和資質認定工作的開展，很多實驗室認識到了評定不確定度的重要性，并在日常實驗室中開展了這項工作，但微生物檢驗中不確定度評定在實驗室工作中的實際應用并不多。本文對飲料中霉菌和酵母計數檢驗結果進行不確定度評定。

1 材料與方法

1.1 材料

啤酒酵母ATCC 9763購于北京陸橋技術股份有限公司、孟加拉紅瓊脂培養基（批號170316）北京陸橋技術股份有限公司。

1.2 方法

GB 4789.15-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》[4]、JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[5]。

1.3 樣品制備

取啤酒酵母（ATCC 9763）新鮮培養物于滅菌生理鹽水中制成0.5麥氏濃度的溶液，稀釋1 000倍后制成約1×104 CFU/mL的菌懸液，取該菌懸液1 mL加入500 mL已滅菌飲料中充分混勻后制成原始檢樣。

制作10個小樣：無菌操作分別吸取10 mL上述原始檢樣充分混勻后入10個無菌試管，作為小樣。

1.4 霉菌和酵母總數測定

以無菌操作方法吸取1 mL樣品，注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，充分振搖，制成1∶10的稀釋液;吸取1∶10的稀釋液1 mL注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，混勻制成1∶100稀釋液;按同法制備梯度稀釋液備用;用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個適宜稀釋度的水樣1 mL，分別注入滅菌平皿內，每個稀釋度做2個平皿對照。然后將冷卻至46 ℃左右的孟加拉紅瓊脂約20 mL注入平皿，并旋搖混勻，同時做培養基空白對照;待瓊脂凝固后，置（28±1） ℃培養箱內培養5 d，進行菌落計數;選擇菌落數在10～150平板計算平均數，以平均數乘以稀釋倍數作為檢測結果，每管均做2個平行。

2 不確定度來源分析

樣品稱樣引入的不確定度，樣品稀釋過程引入的不確定度為A類評定;重復檢測產生的不確定度為B類評定。檢驗結果的不確定度具體來源見圖1。

3 不確定度的分量評定

3.1 樣品稱樣引入的不確定度

3.2 樣品稀釋過程引入的不確定度

3.3 重復檢測產生的不確定度

同一樣品重復10次，將10次重復測量的結果列入表1中。

由于微生物測量結果分散性很大，其最大值與最小值之間可相差到1個數量級，因此不能直接利用測量數據做不確定度評估，而需要對數據做對數處理，結果見表1。

4 結論

本論文依據 GB 4789.15-2016 《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》，利用孟加拉紅瓊脂對飲料中的酵母進行檢測，對測定結果進行不確定度評定，給出不確定度。由于微生物檢測中，測量結果的發散性較大，不屬于正態分布，檢測結果必需轉換成對數，使其靠近正態分布，便于建立數學模型用于計算。在測定時，必須嚴格控制條件，由同一試驗人員進行操作，測試結果取對數，評定不確定度。結果顯示，飲料中霉菌和酵母菌計數的取值區間為1.330235±0.085812，該樣品中霉菌和酵母的含量范圍為18～26 CFU/mL。

參考文獻

[1]中國合格評定認可國家委員會.CANS-GL05 2011 測量不確定度要求的實施指南[S].北京：中國標準出版社，2011.

[2]國際標準化組織.ISO/IE C17025： 2005測試和校準實驗室能力的通用要求[S].2005.

[3]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL07：2011測量不確定度的要求[S].北京：中國標準出版社，2011.

[4]國家質量監督檢驗檢疫總局.GB 4789.15-2016食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數[S].北京：中國標準出版社，2016.

[5]國家質量監督檢驗檢疫總局.JJF 1059-2012 測量不確定度評定與表示[S].北京：中國標準出版社，2012.

[6]國家質量監督檢驗檢疫總局.JJG 196-2006 常用玻璃儀器檢定規程[S].北京：中國標準出版社，2006.

基金項目：福建省產品質量檢驗研究院科技項目（編號：KY201822A）。

作者簡介：傅德江（1986—），男，福建福州人，本科，工程師。研究方向：食品微生物。