血漿cf-DNA/NETs水平對重癥肺炎患者預后評估的價值

孫萬里 郭朝蕾 李養軍 王月 石志紅

重癥肺炎是常見危重疾病，治療不及時可能發展為多器官功能不全，死亡率高，對患者病情進行預后監測具有重要臨床意義[1-2]。急性生理學及慢性健康狀況評分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHE Ⅱ)是公認對危重癥有較好評估價值的評分系統，在臨床上應用廣泛[3-4]。中性粒細胞作為病原體侵入的第一道抵御防線在多種炎性疾病中發揮重要作用[5]。NETs 是由促炎因子或病原體刺激使中性粒細胞活化后 細胞內染色質 DNA 及抗菌顆粒蛋白等物質釋放到胞外所形成的網狀結構[6-9],目前有關 NETs 殺菌機制研究較多，但有關 NETs 的臨床研究較少。此外研究認為血漿中cf-DNA/NETs 與血液中 NETs 含量密切相關[10]，因此檢測血漿中cf-DNA/NETs 可間接反映血液中 NETs 的表達水平。本研究旨在探討血漿游離DNA/NETs(circulating free DNA/NETs，cf-DNA/NETs)水平對重癥肺炎患者預后評估的價值。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年1月到2019年6月就診于本院的150例重癥肺炎患者作為研究對象，年齡41～87歲，參考美國胸科學會和美國感染病學會2009年更新的重癥肺炎診斷標準[11]：第一指標：(1)行有創機械通氣；(2)感染性休克，需要血管升壓類藥物治療。第二指標：(1)呼吸頻率≥30次/min；(2)氧合指數≤250；(3)多肺葉浸潤；(4)白細胞計數<4.0×109/L；(5)體溫<36℃；(6)血小板計數<10.0×109/L；(7)意識/定向障礙；(8)血清尿素氮≥200 mg/L；(9)低血壓，需要強力體液復蘇。符合任一第一標準或三條及以上第二標準即可診斷為重癥肺炎。納入標準：(1)符合重癥肺炎診斷標準；(2)ICU住院時間≥72 h；(3)臨床資料完整者。排除標準：(1)合并嚴重心、肝、腎疾病者；(2)合并惡性腫瘤者；(3)合并免疫系統缺陷者。根據患者ICU住院30 d預后結局分為存活組(91例)、死亡組(59例)。本研究經醫院倫理委員會批準，研究對象或家屬簽署知情同意書。

二、方法

1 血漿cf-DNA/NETs水平檢測

進入ICU 24 h內抽取研究對象5 mL靜脈血，置于EDTA抗凝管中，4℃，15000 r/min離心10 min，小心收集上層清液，置-80℃保存。檢測時室溫解凍血漿樣本，采用PicoGreen熒光染料法檢測血漿cf-DNA/NETs水平，采用MULTISKAN MK3酶標儀(美國Thermo Labsystems公司)檢測熒光值并繪制標準曲線，將樣本熒光值代入標準曲線計算血漿cf-DNA/NETs水平。

2 采用APACHE Ⅱ評分系統評估重癥肺炎患者病情