鸚鵡熱衣原體基因工程疫苗研究進(jìn)展

嚴(yán)專強(qiáng) 魏曉娜 周慶豐

摘? 要：鸚鵡熱衣原體（Chlamydia psittaci， Cps）是專性細(xì)胞內(nèi)寄生、革蘭氏陰性病原體，能在鳥(niǎo)類、人類和其它哺乳動(dòng)物中廣泛傳播。Cps能夠?qū)е虑蓊惖暮粑篮拖兰膊?，引起家禽高熱、腹瀉、異常分泌物以及產(chǎn)蛋下降。常規(guī)衣原體疾病防控主要依賴于抗生素，但隨著對(duì)食品安全的重視、養(yǎng)殖端減抗替抗的推行，需要開(kāi)展生物安全和疫苗免疫等防控技術(shù)研究以預(yù)防衣原體感染。本文綜述了Cps亞單位疫苗、DNA疫苗和活載體疫苗等基因工程疫苗的研究進(jìn)展。。

關(guān)鍵詞：鸚鵡熱衣原體;亞單位疫苗;DNA疫苗;活載體疫苗

中圖分類號(hào)：S858.31? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2020）7-0053-03

鸚鵡熱衣原體（Chlamydia psittaci， Cps）具有廣泛的宿主譜，它可以感染465種鳥(niǎo)類和包括人在內(nèi)的46種哺乳動(dòng)物，導(dǎo)致結(jié)膜炎、肺炎、支氣管炎、流產(chǎn)和關(guān)節(jié)炎等疾病，對(duì)家禽和公共衛(wèi)生安全造成了巨大的威脅[1]。Cps主要通過(guò)空氣氣溶膠飛沫快速傳播，也可以通過(guò)直接接觸分泌物和排泄物途徑而引起感染。雞對(duì)Cps具有一定的抗性，火雞、鴨和鴿則相對(duì)易感，雛禽感染可引起體溫升高、腫眼、厭食和腹瀉等臨床癥狀，種禽感染可引起嚴(yán)重的輸卵管炎，導(dǎo)致產(chǎn)蛋率下降到10%以下或停止產(chǎn)蛋[2]。

目前對(duì)Cps的早期感染可用四環(huán)素、金霉素和土霉素等多種抗生素治療，但由于其細(xì)胞內(nèi)寄生性引起的持續(xù)性感染以及長(zhǎng)期使用抗生素造成的耐藥性增加等因素，使得使用抗生素不能從根本上控制該病[3]。因此，衣原體疫苗的研制就具有重要的意義。從20世紀(jì)50年代開(kāi)始，衣原體疫苗研制開(kāi)始興起，經(jīng)歷了減毒活疫苗、滅活疫苗到基因工程疫苗等發(fā)展階段。由于Cps減毒活疫苗存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，滅活疫苗只激發(fā)體液免疫應(yīng)答，且存在內(nèi)毒素引起不良反應(yīng)的問(wèn)題，因此，這兩種疫苗在生產(chǎn)上應(yīng)用較少。近年來(lái)，基因工程疫苗成為Cps疫苗研究的重點(diǎn)。

1? Cps亞單位疫苗

1.1? 重組蛋白疫苗? 隨著DNA重組技術(shù)的發(fā)展，安全性好、易大規(guī)模生產(chǎn)的基因工程亞單位疫苗越來(lái)越多地受到關(guān)注。目前衣原體亞單位疫苗使用的特異性抗原包括：主要外膜蛋白（MOMP）、多型外膜蛋白（Pmp）、衣原體蛋白酶樣活性因子（CPAF）、質(zhì)粒蛋白（Pgp）和熱休克蛋白（HSP）等。

Sandbulte等用鸚鵡熱衣原體MOMP和脂多糖（LPS）分別制成亞單位疫苗免疫小鼠，之后用Cps強(qiáng)毒攻毒，用MOMP免疫的小鼠得到保護(hù)，而用LPS免疫的小鼠沒(méi)有得到保護(hù)[4]。李巖偉等使用Cps基因工程亞單位疫苗rCps-MOMP免疫配種前25d的母羊，免疫后母羊可維持較高水平的抗體直至分娩[5]。2014年軍事科學(xué)院聯(lián)合北京市獸醫(yī)生物藥品廠使用MOMP蛋白制備的羊衣原體基因工程亞單位疫苗獲得了農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的新獸藥證書及疫苗生產(chǎn)文號(hào)。

1.2? 表位疫苗? 表位疫苗是近年來(lái)興起的一種新型疫苗，抗原表位預(yù)測(cè)技術(shù)和多肽人工合成技術(shù)的發(fā)展促進(jìn)了表位疫苗的研究。表位疫苗能保證抗原結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，還可避免傳統(tǒng)亞單位疫苗可能引起的毒性反應(yīng)，更符合Cps疫苗的發(fā)展方向。南華大學(xué)吳移謀教授課題組構(gòu)建了基于Cps MOMP和質(zhì)粒蛋白CPSIT_p6、CPSIT_p7的多表位疫苗，該類型疫苗能誘導(dǎo)特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，有效清除免疫后小鼠肺部Cps，降低衣原體載量，改善肺組織病變程度，產(chǎn)生較好的抗感染免疫保護(hù)作用[6，7]。

2? Cps DNA疫苗

DNA疫苗又稱核酸疫苗、基因疫苗，屬于第三代衣原體疫苗，主要通過(guò)將外源性核酸序列插入真核表達(dá)載體質(zhì)粒上來(lái)誘導(dǎo)相應(yīng)的抗原表達(dá)。Vanrompay等將A型Cps ompa基因克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA1，質(zhì)粒DNA通過(guò)肌肉或粘膜免疫可產(chǎn)生T/B細(xì)胞記憶，獲得較好的保護(hù)效果[8]。Verminnen等分別用D型Cps MOMP重組質(zhì)粒DNA與含有及不含有佐劑的重組MOMP免疫火雞，結(jié)果顯示質(zhì)粒DNA具有很好的保護(hù)效果[9]。

3? Cps活載體疫苗

活載體疫苗是指應(yīng)用動(dòng)物病毒弱毒或無(wú)毒株如腺病毒、皰疹病毒、痘病毒等作為載體，插入外源抗原基因構(gòu)建重組活病毒載體，轉(zhuǎn)染病毒細(xì)胞而制備的疫苗。載體病毒通過(guò)自然感染將目的抗原運(yùn)輸?shù)狡鞴佟⒔M織和靶細(xì)胞，可誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)特定病原產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答反應(yīng)。Zhou等利用缺失的人腺病毒型載體成功構(gòu)建了含有雞源鸚鵡熱衣原體主要MOMP基因的重組腺病毒，獲得了很好的保護(hù)效果[10]。Liu等構(gòu)建了表達(dá)Cps pmpD-N基因的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，免疫雞后能產(chǎn)生特異性抗體，減少Cps的排菌及在靶器官的殘留，顯著減輕Cps的相關(guān)病變[11]。

4? 小結(jié)

Cps基因工程疫苗的生產(chǎn)和檢驗(yàn)不需要使用衣原體活菌，確保了操作者的安全，是今后研發(fā)的主要方向。傳統(tǒng)的亞單位疫苗需要解決外源性表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性、純度以及蛋白降解等問(wèn)題，而Cps表位疫苗、DNA疫苗和活載體疫苗等新型基因工程疫苗各具優(yōu)勢(shì)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

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