人用流感疫苗雞胚孵化技術要點

毛東有 李麗華 王志強 黃秀英

中圖分類號：S831.3+2? ? ?文獻標識碼：C? ? ?文章編號：1673-1085（2020）7-0031-02

流感是威脅人類健康的重要疾病之一，疫苗接種是當前人類防控流感流行的有效手段之一。隨著生物技術的發展，人用流感疫苗的種類越來越多，全病毒滅活疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗等均已經上市使用。流感病毒的培養主要依靠雞胚尿囊腔接種繁殖，但隨著生物技術發展，受到蛋源緊張的控制，細胞培養等生產技術逐步進入流感病毒的生產環節，但目前絕大多數的流感疫苗的生產仍然依靠雞胚接種。雞胚質量將直接影響著疫苗的質量，所以本文對生產流感病毒所用雞胚的種蛋、孵化、運輸等相關控制環節進行介紹，以供參考。

1? 種蛋選擇

1.1? 種雞品種、代次選擇? 人用流感疫苗的生產主要使用白殼蛋雞生產的種蛋。選擇白殼蛋雞生產疫苗的優勢主要是其在照蛋生產方面的方便性，并且白殼蛋雞的抗病能力強。產白殼蛋的蛋雞品種主要有京白1號，海蘭白w-36、羅曼白等。所用代次最好選擇為父母代種雞，因為父母代種雞的凈化程度較高，并且種雞的受精率較高，能夠滿足大規模生產所用，節約成本。

1.2? 種雞健康的控制? 生產種蛋的雞群必須為健康種雞，雞群健康：一方面需保證無垂直傳播性疾病和烈性傳染病等，主要包括無白痢、無腸炎、無鼠傷寒沙門氏菌、無白血病、無傳染性貧血、無病毒性關節炎、無禽流感、無新城疫等疾病;另一方面種雞的飼料、藥物等需重點關注，飼料中不能含有國家禁止使用的三聚氰胺;在種蛋收集期間不得使用產蛋期禁用藥物，避免出現藥物殘留;種蛋收集期間不能進行活疫苗免疫，活苗免疫可能引起不同程度雞胚尿囊液渾濁;最后種雞的抗體水平需在標準保護值之上。

1.3? 孵化種蛋的選擇? 孵化所用種蛋必須是符合要求的種蛋。蛋形指數好，無沙皮，無破損、無糞污、無蛋清等污染物，即必須保證蛋表面清潔。孵化所用種蛋蛋重必須在53g以上，72g以上或過小的蛋重會影響尿囊液的收液量。已有研究表明，雞胚重對尿囊液有極顯著的影響，隨胚重增加，尿囊液量增多[1];但過大的蛋重由于生產模具的影響容易受到破損。在規模化機械化生產過程中，需要剔除過大、過小種蛋，所用種蛋的受精率需要保證在90%以上。

2? 孵化前準備

2.1? 種蛋的處理? 種蛋儲存時間不能超過7d，儲存溫度需控制在13～21℃之間，濕度控制在60%左右即可。種蛋在入孵前碼放至孵化車后需進行熏蒸處理，可使用24mL/m3的甲醛溶液配合12g的高錳酸鉀熏蒸30min，并且熏蒸后對蛋表微生物進行監測，微生物需嚴格控制在1×102個數量級以下。孵化前要對所用的種蛋進行分級處理并碼放在孵化器中備用，因為在同等孵化條件下，特大蛋孵化前期受熱慢，容易造成弱胚;特小蛋受熱快，發育比大蛋快，胚胎重量增加，尿囊液量減少[2]。在對種蛋分級處理前要對分級處理的設備進行校正，以保證使用的種蛋符合廠家的要求。

2.2? 孵化設備的處理? 孵化設備在使用前必須經過校驗處理，以保證孵化過程中的溫、濕度的均衡以及數據顯示的準確性。孵化機和孵化車需要進行熏蒸消毒處理;孵化所用塑料用具需要進行浸泡消毒，浸泡消毒前需先清理好塑料蛋盤上的污物如蛋清、蛋黃及灰塵等污染物，浸泡消毒可以使用1%的氫氧化鈉、2%的戊二醛溶液，浸泡時間不少于30min，浸泡消毒后再進行熏蒸消毒，以保證孵化所有物品的清潔度。

3? 孵化過程中控制

雞胚在孵化過程中需要提供足夠的溫度、濕度、氧氣和時間才能保證雞胚的正常生長。

孵化溫度需控制在38.0～38.2℃之間，孵化時間在10d左右。有研究表明，孵化積溫控制在9180以下能夠有效的將胚重控制在3.5g以下，更低的積溫可以獲得更小的胚重，但胚重不能太低，因為過低的積溫將影響胚胎的正常發育[3]。10日齡孵化胚蛋的小頭血管合攏，可作為合格胚蛋的標準之一。

分級后的種蛋在孵化過程中的施溫時間有所不同，大級別種蛋由于其前期加熱慢，需要提前2～3h提前預溫，保證與中小級別種蛋同時達到恒溫。

孵化濕度需控制在70%左右，濕度過大會影響胚蛋內水分蒸發和胚胎發育，并且在雞胚尿囊液收獲時，影響胚蛋的削殼工作，引起尿囊液的污染和浪費。濕度低于70%時，蛋內的水分蒸發過快導致胚胎發育不良，接種后的尿囊液量會減少，并且影響抗原含量[4]。

孵化過程中，每兩個小時需進行一次翻蛋處理，保證雞胚在孵化過程中受熱均勻，長時間不翻蛋會造成雞胚血管發育的不均勻，血管不能合攏。

種蛋孵化至6日齡時要進行種蛋發育程度的抽查，抽查種蛋的受精率和發育程度，以便及時進行生產計劃的調整。抽查后要對孵化機及胚蛋進行熏蒸處理，可用24mL/m3甲醛、12g高錳酸鉀熏蒸20min。在熏蒸過程中，要注意高錳酸鉀噴發，導致蛋表面受到污染。

種蛋在孵化至9.5d需要對所有入孵種蛋進行照檢。照檢過程中剔除臟蛋、胚蛋發育弱的、沙皮蛋、畸形蛋、氣室晃動、破損蛋。照檢完畢后，將胚蛋進行熏蒸消毒20min，或者使用臭氧消毒30min，繼續進行孵化0.5d。

4? 胚蛋運輸

首先將照檢好的雞胚從孵化車上移入疫苗廠家提供的接種用種蛋盤中，種蛋盤在使用前需進行消毒處理，胚蛋轉移的空間需進行熏蒸消毒，轉移胚蛋人員穿戴消毒好的工作服，并且穿戴口罩、手套等防護用具。

將種蛋盤轉入種蛋箱或者專用種蛋車運輸到疫苗廠家，運輸過程中要有相應的溫度記錄，溫度需控制在30～38℃之間，以保證雞胚的活力。在運輸過程中要保證輕拿輕放，避免顛簸造成雞胚氣室晃動，影響雞胚接種。

綜上所述，只有高標準的種蛋、高標準的孵化環節、高標準的消毒管理才能夠保證人用流感疫苗的高效生產。保證生產質量的同時提升工作效率，為人類的健康保駕護航。

參考文獻：

[1]? 周杰，曾明華，魏建忠，等.雞胚尿囊液與雞種的相關性研究.[J].中國家禽，1998，20（7）：10-11.

[2]? 張愛麗，潘大耐.蛋重對10日胚齡種蛋尿囊液量的影響[J].中國家禽，2016，38（7）：54-55.

[3]? 王曉亮，蔡霞，陸軍，等.人流感疫苗生產用雞胚蛋質量指標研究[A].第十六次全國家禽學術研討會論文集[C].揚州：中國畜牧獸醫學會家禽學分會，2013：504.

[4]? 孫愛喜.大型生物制藥廠的病毒雞胚培養[J].當代畜禽養殖業，2015，10：4-6.