IL-6 和IL-8 在慢性前列腺炎患者精液中的表達及臨床意義

甘進，王曉榮

（南昌大學第四附屬醫院泌尿外科，南昌 330006）

慢性前列腺炎(Chronic Prostatitis, CP)是臨床前列腺炎中最常見的類型，是50 歲以下男性患者中最常見的泌尿系統疾病。 以排尿異常及慢性盆腔疼痛為主要臨床表現，伴有性功能障礙、精神神經癥狀的一類綜合征[1-3]。 其病因和發病機制尚不明確，探討慢性前列腺炎的生物學特性，尋找潛在的治療靶點可能為臨床治療開辟新的途徑。

細胞因子介導免疫細胞之間的相互刺激、彼此約束， 在免疫應答的全過程中發揮至關重要的作用[2,3]。 例如，在免疫應答細胞擴增階段，IL-6 等促炎性因子輔助T、B 細胞的增殖和分化。 在免疫應答的效應階段，IL-8 等趨化因子吸引炎癥細胞進入組織部位，激活巨噬細胞和增強殺傷活性。 從理論上說，任何免疫相關疾病（包括感染性疾病，腫瘤，移植排斥和自身免疫性疾病）都可以通過人為控制（補充，添加，阻斷或拮抗）細胞因子的作用加以治療。

本研究旨在探討精液中IL-6、IL-8 等細胞因子表達與CP 診斷的關系，為慢性前列腺炎的診斷及治療效果評估提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集從2017 年9 月-2019 年9 月南昌大學第四附屬醫院泌尿外科門診就診的符合美國國立衛生研究院 （National Institutes of Health，NIH）前列腺炎診斷標準[4]的75 例慢性前列腺炎患者的精液標本， 通過詳細詢問患者病史，并進行慢性前列腺炎癥狀指數評分 （the national institutes of health chronic prostatitis symptom index，NIH-CPSI）、常規尿液檢查和細菌培養、前列腺液檢查及細菌培養。 具體診斷分組標準：患者均有臨床癥狀，主要表現為下腹部、會陰、盆腔區域的疼痛和不適，伴有各種排尿異常、性功能障礙和精神癥狀，病程大于三個月，并排除尿道炎、附睪炎以及精索靜脈曲張、直腸及肛周病變等可能引起類似癥狀的其他疾病。 所有患者均告知病情、檢測項目和收費標準，患者及家屬均知情同意。

對就診患者除系統體格檢查外，以“二杯法”[5]進行尿液常規檢查及細菌培養、前列腺液常規檢查及細菌培養。根據檢查結果將慢性前列腺炎病人及健康對照分為4 組。第一組：Ⅱ型組（慢性細菌性前列腺炎）18 例， 前列腺按摩后尿液檢查WBC＞10個/HP，細菌培養（+）；第二組：Ⅲa 型（炎癥性）組25 例，按摩前尿液鏡檢WBC(—)，按摩后尿液鏡檢WBC＞10 個/HP，細菌培養(—)；第三組：Ⅲb 型（非炎癥性）組32 例，按摩前、后尿液鏡檢WBC＜10 個/HP，細菌培養 (—)；第四組：健康對照組 20 例，前列腺按摩前后尿液檢查WBC＜5 個/HP， 細菌培養(—)。

1.2 實驗步驟和方法

1.2.1 樣本收集、 處理和保存 手淫法收集精液標本后置離心機上1000rpm 離心10min，提取精漿并置于干燥試管中，-20℃冰箱內保存。使用時先在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 復溫液化后取上清液使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。

1.2.2 細胞因子IL-6 檢測 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法測定精液中IL-6 表達水平。 使用兩株識別不同部位的抗IL-6 單克隆抗體， 一株用以識別和結合待檢標本中的IL-6， 另一株作為酶標抗體， 與結合于包被抗體的IL-6 的另一表位結合，并催化底物顯色，根據標準品OD 值繪制標準曲線， 在標準曲線上查出待檢標本中IL-6 的表達水平。

1.2.3 細胞因子IL-8 檢測 采用ELISA 方法測定精液中IL-8 表達水平。 使用兩株識別不同表位的抗IL-8 單克隆抗體，一株作為包被抗體，以識別和結合待檢標本中的IL-8，另一株作為酶標抗體，與結合于包被抗體的IL-8 的另一表位結合， 并催化底物顯色，根據標準品OD 值繪制標準曲線，在標準曲線上查出待檢標本中IL-8 的表達水平。

1.3 結果分析和統計學方法 全部數據分析均采用SPSS11.5 軟件完成。各數據用()表示，組間比較采用方差分析，P<0.05 認為有統計學意義。

2 結果

各組對象的年齡無統計學差異(P>0.05)。

各組研究對象精液中IL-6、IL-8 表達水平如表 1 所示。 Ⅱ型組、Ⅲa 和Ⅲb 型組精液中 IL-6 表達水平明顯高于對照組，差別有統計學意義（P<0.01）；Ⅱ型組和Ⅲa 型組患者精液中IL-6 表達水平高于Ⅲb 型組，有統計學差異(P<0.05)。

統計學分析顯示Ⅱ型組、 Ⅲa 和Ⅲb 型組精液中IL-8 表達水平明顯高于對照組， 差別有統計學意義（P<0.01）；Ⅱ型組和Ⅲa 型組患者精液中IL-8表達水平高于Ⅲb 組，有統計學差異(P<0.05)。

除對照組外，各組精液中白細胞計數（WBC）、IL-6、IL-8 和 NIH-CPSI 進行相關性分析 （r 值）。NIH-CPSI 與白細胞計數無明顯相關（r=-0.26,P>0.05），NIH-CPSI 評分與 IL-6 和 IL-8 表達水平呈正相關（r=0.429,P＜0.05）,各組 IL-6 和 IL-8 呈顯著相關性（P＜0. 01）。

表1 各組間精液中細胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

表1 各組間精液中細胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

分組 N IL-6 IL-8Ⅱ型組Ⅲa 型組Ⅲb 型組對照組18 25 32 20 389.16±37.11 371.40±63.51 249.00±11.42 105.91±83.41 F=64.98 P=0.000 334.72±61.05 300.80±45.17 211.50±44.63 112.18±72.21 F=38.86 P=0.000

3 討論

慢性前列腺炎(CP)是泌尿外科臨床上最常見的前列腺疾病，它的特點是臨床癥狀復雜多樣，診斷步驟繁瑣，且缺乏相對特異性的方法。 對該病的認識有許多困惑之處， 臨床治療效果難以有一個客觀的評價標準[6]。 探索慢性前列腺炎的診斷標志物、研究慢性前列腺炎的發病機制，具有重要的臨床意義。

IL-6 參與免疫調節免疫應答： 誘導B 細胞分化和產生抗體；誘導T 細胞表達IL-2 受體和產生IL-2；誘導T 細胞活化增殖和分化等。 IL-6 參與急性相蛋白反應,誘導多種急性相反應蛋白的合成和分泌。 IL-6 生物學功能廣泛，可通過旁分泌、自分泌和內分泌3 種方式發揮作用。 Drannik 等[9]研究報告慢性前列腺炎患者的免疫應答中，IL-6 誘導T、B 細胞分化和增殖， 誘導神經生長因子（Nerve growth factor， NGF）和 IL-10 的表達，并且與它們協同作用，共同促進細胞和體液免疫應答。

IL-8 是一種趨化因子,在炎癥刺激后由巨噬細胞、內皮細胞和其他細胞大量產生。 它是中性粒細胞的趨化因子，并能激活中性粒細胞的其他功能，如粘附和殺菌, 對活化的T 淋巴細胞亦有趨化活性。 Celik 等[10]在慢性阻塞性肺疾病的研究中發現，慢性阻塞性肺疾病患者血清和痰液中IL-8、TNF-a的表達水平明顯高于正常人,且與慢性阻塞性肺氣腫的類型和是否急性發作有關，進一步證明IL-8、TNF-a 參與了慢性炎癥的發病及進展過程。

本研究中促炎性細胞因子IL-6，趨化因子 IL-8 含量在慢性前列腺炎（CP）中顯著升高。 表明 IL-6 和 IL-8 在CP 的發生、發展中發揮重要作用，有可能成為CP診斷分型的參考指標之一。CP 患者精液中IL-6 水平、IL-8 水平和NIH-CPSI 疼痛癥狀評分之間呈正相關性(r=0.429，P＜0.01)，推測 IL-6 和 IL-8 可能參與患者疼痛癥狀的產生，IL-6 及IL-8 水平可能作為患者療效評估的一個指標。 因此，精液可以部分替代前列腺液進行細胞因子的檢測， 避免了病人前列腺按摩時引起的不適感和前列腺液標本量獲取不足的問題。