新會陳皮黃酮類化合物的提取及其殺菌抗腫瘤活性研究

鐘桂云，鄭曉瑞

（江門職業(yè)技術(shù)學院 材料技術(shù)系，廣東 江門 529090）

陳皮是橘的干燥成熟果皮，兼具藥用和食用價值，最早記載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》。大量醫(yī)學研究表明，陳皮在殺菌、抗氧化、抑制腫瘤等方面均有很好的作用［1-4］。陳皮按產(chǎn)地不同分為 “陳皮”和“廣陳皮”。廣陳皮以產(chǎn)于廣東省江門市新會會城梅江塞口圍的新會陳皮最為出名。近幾十年來，大量文獻報道了有關(guān)新會陳皮的有效成分及生理活性的研究。研究表明，新會陳皮具有抗氧化、抗癌、殺菌等多種生理功效［5，6］，而主要功效成分為陳皮多糖、黃酮類成分、揮發(fā)油［7-10］。研究表明，陳皮藥效作用是其多種成分協(xié)同作用的結(jié)果。

本文在查閱大量文獻的基礎(chǔ)上對新會陳皮中主要活性成分黃酮類化合物的提取工藝進行研究比較，確定了影響提取效率的主要因素和提取的最佳實驗條件。研究表明黃酮類化合物的提取效率主要受提取的溶劑的種類、原料和溶劑比例、提取溫度、提取次數(shù)及提取時間等因素的影響。本文對新會陳皮黃酮類提取物進行了生物活性測試，殺菌和體外抗腫瘤實驗表明新會陳皮黃酮類提取物具有良好的殺菌效果和抗腫瘤活性。

1 實驗部分

1.1 儀器和藥品

YP202電子天平 （上海精密科學儀器有限公司）；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)式真空泵 （鞏義市英峪予華）。

新會陳皮購買于江門市國大藥房，粉碎后備用。

1.2 新會陳皮黃酮的提取實驗［11，12］

用天平準確稱取3.0000 g新會陳皮干粉樣品于圓底燒瓶中，用乙醇和水作提取劑，按一定的料液比進行提取，在不同溫度下加熱提取一定時間后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中除去溶劑，得到黃酮提取液。

1.3 生物活性實驗

1.3.1 殺菌活性實驗［13］

采用菌體生長速率測定法，將一定量藥劑溶解在適量丙酮內(nèi)，用含有200 mg／L乳化劑水溶液稀釋至所需濃度，然后各吸取1 mL藥液注入培養(yǎng)皿內(nèi)，再分別加入9 mL培養(yǎng)基，搖勻后制成50 mg／L的含藥平板，以添加1 mL滅菌水的平板做空白對照。用直徑4 mm的打孔器沿菌絲外緣切取菌盤，移至含藥平板上，設(shè)3個重復。將培養(yǎng)皿放在 （24±1）℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48 h后調(diào)查量取菌盤擴展直徑，計算平均值，按照下式計算相對抑菌率。結(jié)果見表1。

1.3.2 腫瘤細胞抑制實驗［14］

培養(yǎng)正常生長的腫瘤細胞，用10 mL含質(zhì)量分數(shù)為10%的新生牛血清的RPM I1640培養(yǎng)液配成單細胞懸液，以5×104cell／mL細胞懸液接種到96孔板中 （每孔200μL），于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，加入被試藥物 （終質(zhì)量濃度為5 μg／mL），繼續(xù)培養(yǎng)5 d，然后棄培養(yǎng)液 （必要時離心），每孔加入0.04%MTT（3-［4，5-dimethyltjiazol-2-yl］ -2，5-diphenyltetrazolium bromide；Thiazoyl blue）100μL，同樣條件下培養(yǎng)4 h。棄培養(yǎng)液 （必要時離心），加入DMSO 150μL／孔，混合均勻后于測定波長570 nm，參比波長655 nm分別記錄處理液和對照液吸收度，按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率：

腫瘤細胞生長抑制率＝（對照A-給藥A）／對照A×100%

判斷標準：初篩質(zhì)量濃度5μg／ml下，抑制率高于50%者為有效。結(jié)果見表2。

表1 黃酮類提取物的殺菌活性結(jié)果Table 1Bactericidal activity levels of flavonoids

表2 黃酮類提取物體外抗腫瘤活性結(jié)果Table 2 Theantitumor activity of flavonoids in vitro

2 結(jié)果與討論

2.1 提取實驗

新會陳皮中的黃酮類物質(zhì)提取的實驗結(jié)果表明，實驗條件對新會陳皮黃酮提取效率的影響很大。實驗表明，主要的影響因素有乙醇和水的比例、原料和溶劑的比例、提取溫度、提取次數(shù)及提取時間，其中乙醇和水的比例對提取率的影響很大，乙醇濃度高能促進黃酮的提取。經(jīng)實驗確定提取黃酮的最佳工藝條件為：乙醇和水的比例為4∶1（體積比）、料液比1∶30、提取溫度75℃、提取時間2.5h，在此條件下提取率為0.75%。

2.2 殺菌活性

我們測定了黃酮類提取物對7種病菌的殺菌活性，由普篩結(jié)果可以看出：化合物對蘆筍莖枯、水稻紋枯病、水稻曲病具有很強的抑制作用，殺死率均為100%，對其它4種病菌具有中等強度的抑制作用。

2.3 抗腫瘤活性

黃酮類提取物對人肺癌細胞株A-549、結(jié)腸癌細胞株HCT-8和肝癌細胞株Bel-7402的抑制率見表2。由表2看出，黃酮類提取物對3種腫瘤細胞的抑制作用很強，對A-549細胞和Bel-7402具有很強的抑制作用，抑制率超過了90%，對HCT-8具有中等強度的抑制作用。

3 結(jié)論

本文通過對新會陳皮黃酮類提取物生物活性的研究，證實新會陳皮黃酮類提取物具有良好的殺菌和抗腫瘤活性。近年新會柑的種植面積大幅增加，本文的研究在利用地方經(jīng)濟特色的基礎(chǔ)上，充分挖掘新會陳皮的藥用價值，為新會陳皮在現(xiàn)代醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及人類健康方面提供更加廣闊的應用前景。