養任調沖湯改善更年期綜合征大鼠糖脂代謝的機制研究?

郭紫芬，周 琛，鄒湘曼，向花花，肖正午

(1. 南華大學藥物藥理研究所，湖南 衡陽 421001； 2. 湖南省腫瘤微環境響應藥物研究重點實驗室，湖南 衡陽 421001)

更年期綜合征除月經紊亂、情緒多變等為主要癥狀外，部分婦女還可出現糖脂代謝異常[1-2]。有研究表明，脂肪因子血清瘦素(leptin, LP)和脂聯素(adiponectin, APN)可通過不同機制、不同途徑影響機體糖脂代謝[3-4]。雌激素替代治療更年期綜合征雖療效確切，但對患者調節血脂水平結論不一[5-6]，且有可能產生陰道不規則出血、誘發乳腺癌、子宮內膜癌的風險。而中醫藥治療往往能取得比較好的療效[7-8]。養任調沖湯具有調理沖任、滋養肝腎之功效[9]，為闡明其療效機制，前期觀察到養任調沖湯對更年期陰虛內熱證模型大鼠神經內分泌功能的調節作用[10]。本研究繼續觀察其對糖脂代謝的影響，并進一步探討其機制是否與調節脂肪因子LP、APN水平有關。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雌性SD大鼠，體質量180 g～220 g，由南華大學實驗動物中心提供(合格證號SCXK(湘)-2009- 0002)。本實驗已通過南華大學實驗動物倫理委員會審查。

1.2 主要試劑

養任調沖湯沖劑(批號090316)購自江蘇江陰天江藥業有限公司；坤寶丸(國藥準字Z11020185)購自北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠；血清瘦素放射免疫法檢測試劑盒(批號10-1199-01)、胰島素ELISA檢測試劑盒(批號10-1250-01)均購自瑞典Mercodia公司；脂聯素ELISA檢測試劑盒(批號 A0135)購自武漢 USCNLIFE 公司；其他試劑均為進口或國產分析純試劑。

1.3 造模方法

120只雌性SD大鼠普通飼料喂養7 d后按隨機數字表法分為對照組與造模組，其中對照組20只，造模組100只。參照文獻[11]，造模組大鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(35 mg/kg)，腹位固定，切開皮膚及左右兩肋腰肌，暴露卵巢及緊密相連的子宮角，摘除雙側卵巢。術后肌注慶大霉素5 d，第6天起逐只對去卵巢大鼠進行陰道涂片檢查，連續5 d，以驗證去勢手術成功。術后第7天開始給大鼠按照體質量2 mL/100 g灌服熱性中藥(制附片25 g，干姜25 g，加水煎煮成100 mL)，連續灌服14 d。對照組大鼠只行腹部假手術，不摘除卵巢。造模成功后大鼠按隨機數字表法分為5組各20只，分別為模型組、坤寶丸陽性對照組(0.16 g/kg)、養任調沖湯高劑量組(3.24 g/kg)、養任調沖湯中劑量組(1.62 g/kg)、養任調沖湯低劑量組(0.81 g/kg)。去勢手術后第14天開始灌胃給藥，每日1次，連續30 d。對照組與模型組均給予同體積生理鹽水。

1.4 一般觀察

觀察大鼠給藥前后毛發、舌質的變化，分別于造模前、治療前及治療后第30天檢測24 h飲水量、直腸溫度和大鼠體質量。

1.5 糖脂代謝指標測定

末次給藥后大鼠禁食24 h，取空腹尾靜脈血分離血清。酶比色法測定血清甘油三酯(triglycerides，TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)，氧化酶法測定空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)，放射免疫法測定空腹胰島素(fasting insulin，FINS)，并按以下公式計算胰島素抵抗指數(homeostasis model assessment of insulin resistance index, HOMAIR)：HOMAIR=空腹血糖(FBG，mmol/L)×空腹胰島素(FINS, mIU/L) /22.5。采用放射免疫法測定血清LP，ELISA 檢測APN水平。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 養任調沖湯對更年期綜合征大鼠一般情況影響

表1示，去卵巢及給予熱性中藥造模后，大鼠表現出毛色枯燥不光滑、舌尖色紅、24 h飲水量增加、肛溫上升、體質量增長等陰虛內熱證癥狀，與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)；給予養任調沖湯治療30 d后，各劑量組大鼠的飲水量減少，肛溫有所降低，體質量增長也呈劑量依賴性下降，與模型組比較差異有統計學意義(P<0.05)，與坤寶丸陽性對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 養任調沖湯對陰虛內熱證模型大鼠一般情況比較

2.2 養任調沖湯對陰虛內熱證大鼠血脂水平影響

表2示，大鼠切除卵巢后TC、TG、LDL水平明顯升高，HDL水平有所降低，與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。給予藥物治療30 d后，養任調沖湯呈劑量依賴性升高大鼠血清HDL，降低LDL、TC、TG 水平，與模型組比較高、中劑量組差異有統計學意義(P<0.05)，與坤寶丸陽性對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 養任調沖湯對陰虛內熱證大鼠糖代謝影響

表3示，治療30 d后，養任調沖湯藥物高、中、低3種劑量對模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR水平影響不大，與模型組及坤寶丸陽性對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，提示養任調沖湯對陰虛內熱證模型大鼠FINS、FPG、HOMAIR影響不大。

表2 養任調沖湯對陰虛內熱證模型大鼠血脂水平的影響

表3 養任調沖湯對陰虛內熱證模型大鼠血糖的影響

2.4 養任調沖湯對陰虛內熱證大鼠血清脂聯素和瘦素的影響

表4示，藥物治療30 d后，養任調沖湯呈劑量依賴性增加大鼠APN水平，與模型組比較，高、中劑量組差異有統計學意義(P<0.05), 與坤寶丸陽性對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)；同時，養任調沖湯也能明顯降低大鼠LP水平，但與模型組及坤寶丸陽性對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表4 養任調沖湯對陰虛內熱證模型大鼠血清脂聯素和瘦素的影響

3 討論

女性更年期綜合征是由于機體雌激素水平下降引起的內分泌系統調節紊亂，患者主要出現面紅、潮熱、盜汗、口干舌燥等一系列癥狀。另有Gast[12]等的研究顯示，患者的心血管疾病風險隨著更年期癥狀加重而增加，糖脂異常代謝可能是絕經婦女代謝綜合征發病風險增高的關鍵因素。部分絕經后女性雌激素水平與胰島素抵抗呈顯著負相關，雌激素的下降及游離雄激素的相對增加可能影響內臟脂肪組織的堆積，直接導致胰島素抵抗的發生。再者雌激素缺乏可引起血脂代謝障礙，可能是絕經導致血脂改變的主要原因。因此選擇合適的措施干預更年期綜合征糖脂代謝紊亂，對預防心血管疾病的發生，提高患者生活質量有重要意義。目前，雌激素治療更年期綜合征頗受爭議，中醫采用辨證施治治療取得較好療效。女性更年期綜合征的中醫臨床辨證多屬陰虛內熱證。婦女屆近絕經前后，腎氣已衰，沖任虧虛，天癸將竭，精血不足，陰陽平衡失調，出現腎陰不足、陽失潛藏的陰虛內熱證。養任調沖湯正是基于滋養肝腎、清熱寧心安神而組方，女貞子、旱蓮草、秦艽、鱉甲、地骨皮、菊花、丹參、酸棗仁、浮小麥、茯苓、淮山、淮牛膝與白芍等諸藥配伍，起到調理沖任、滋養肝腎之功效。因此，本研究通過摘除大鼠卵巢建立更年期腎虛模型，在前期結果養任調沖湯能明顯調節血清激素水平的基礎上，繼續觀察養任調沖湯對模型大鼠糖脂代謝的影響并初步探討其機制。

LP是肥胖基因編碼的蛋白質類激素，能減少食物攝取并抑制脂肪合成，伴隨著脂肪量的增加而升高。有研究顯示，絕經期婦女血清LP水平顯著高于正常月經周期女性[13]。APN是由脂肪組織特異性分泌的一種內源性生物活性多肽或蛋白質，可加快脂肪代謝并抑制脂肪合成。高松齡[14]研究顯示，絕經婦女APN水平與肥胖程度密切相關，APN水平隨著患者肥胖程度上升、體脂肪含量增加、血脂升高而下降。本文研究結果顯示，養任調沖湯不但可改善更年期綜合征模型大鼠陰虛內熱證的飲水量、肛溫、體質量增長等一般情況，而且能通過顯著升高

HDL，下降LDL、TC、TG 水平，較好地干預脂質代謝紊亂，但對糖代謝影響不大。養任調沖湯主治更年期綜合征陰虛內熱證價值不僅與坤寶丸相當，且具有在醫生辨證后可根據病情變化合理調整藥味與藥量的優點。結合研究室前期養任調沖湯可以調節血清激素水平的結果[10]進行分析，養任調沖湯可能是調節機體的雌激素水平，進而促進肝臟攝取LDL，抑制HDL分解代謝，從而增加HDL水平；也可能通過升高血清APN、降低LP水平調節更年期陰虛內熱證模型大鼠血脂代謝。因此，養任調沖湯主治更年期綜合征陰虛內熱證，可能對預防心血管疾病的發生有重要意義。