中藥減肥降脂復方中黃酮提取方法的研究及含量測定

王婭玲　陶然　徐凱旋　李佳懌　王悅　宋興爽　王婕　高世杰

摘????? 要：按照藥典含量檢測的相關規定，檢測中藥減肥降脂方中黃酮的含量并考察比色法的可靠性。采用了超聲輔助乙醇回流法測定減肥降脂復方中黃酮的含量，所測曲線相關性良好，符合Lambert-Beer定律。減肥降脂復方中總黃酮質量分數為45.065 3 mg·g^-1，精密度的相對標準偏差為1.80%，重復性的相對標準偏差為1.50%，穩定性的相對標準偏差為0.44%，平均加標回收率的相對標準偏差為102.20%，表明比色法檢測減肥降脂復方中的黃酮含量符合相關規定。

關? 鍵? 詞：中藥纖體;總黃酮;減肥降脂;含量測定;方法學研究

中圖分類號：TQ464?????? 文獻標識碼： A?? ????文章編號： 1671-0460（2020）06-1114-04

Study on Determination of Flavonoids in Chinese Medicine Weight Loss and Lipid-lowering Compound

WANG Ya-ling， TAO Ran， XU Kai-xuan， LI Jia-yi， WANG Yue， SONG Xing-shuang， WANG Jie， GAO Shi-jie

（School of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan Shandong 250014， China）

Abstract： According to the relevant regulations of pharmacopoeia content detection， the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering prescriptions of traditional Chinese medicine was detected and the reliability of colorimetry was investigated. Ultrasonic-assisted ethanol reflux method was used to determine the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound. The measured curves have good correlation and conform to Lambert-Beer law. The content of total flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound is 45.065 3 mg·g^-1， the relative standard deviation of precision is 1.80%， the relative standard deviation of repeatability is 1.50%， the relative standard deviation of stability is 0.44%， and the relative standard deviation of average standard addition recovery rate is 102.20%， which indicates that the content of flavonoids in weight-reducing and lipid-lowering compound detected by colorimetry conforms to relevant regulations.

Key words： Traditional Chinese medicine slimming; Flavonoids; Weight loss and lipid-lowering; Content determination; Methodological study

近年來肥胖癥發病率不斷升高^[1]，導致慢性疾病年輕化^[2]，新陳代謝負擔增大^[3]，肥胖能增加癌癥和慢性疾病的發病率^[4]。近年中醫對肥胖病進行深入研究，研究發現中藥藥效緩和、整體調節，不良反應少，減肥效果較為理想，對開發新品減肥復方制劑具有重要意義。

減肥降脂復方以辯證論治為治療法則，抑胃扶脾，調和陰陽，利痰化濕。此方為山東中醫藥大學王集會教授總結出的經驗用方，具有調節代謝、減肥消脂的作用，其中黃酮類化合物能夠清除人體自由基，其明顯的降脂生理活性被普遍用于高血脂藥物中^[5]。目前，關于黃酮含量測定、結構分析的研究很多，但對實驗方法準確性考察較少，結合黃酮的多種提取方法，黃酮在乙醇中的溶解度最大，提取最為充分，因此本實驗采用超聲輔助乙醇回流的方法測定黃酮含量，并研究其測定方法的準確性^[6]，以期為提取分離黃酮類有機物和研究新型減肥降脂制劑提供實驗依據。

1? 實驗

1.1? 藥品

藥品由山東中醫藥大學制備粉碎。

1.2? 試劑

蘆丁標準品;氫氧化鈉（AR）， 六水氯化鋁（AR），亞硝酸鈉（AR），無水乙醇（AR）[7]。

1.3? 實驗設備

UV9100B型紫外-可見分光光度計; 高速粉碎機; 恒溫水浴鍋[8]; 旋轉蒸發儀; 遠紅外輻射干燥箱 [9] ; PH計; FA1004N電子天平。

2? 實驗測定

2.1? 對照品標準曲線

精確稱定蘆丁標準品20.00 mg，配制60%的乙醇超聲稀釋，上下振搖至均勻，移入容量瓶，蒸餾水定容，即為0.20 mg·mL^-1的待測品溶液，放于冰箱中以防變質。

精密量取標準品溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，用移液槍加入試管中，先加配制的質量分數為30%乙醇溶液5 mL，再加質量分數為5% 的NaNO₂溶液300 μL，上下搖晃至均勻，放置6 min^[10];然后小心倒入質量分數為10%的六水氯化鋁600 μL，上下搖晃至均勻后，靜置5 min，最后加1.0 mol·L^-1的NaOH溶液2 mL^[11]，并用質量分數為30%的乙醇稀釋至刻度。

2.2 ?回流制備待測品

準確稱量1.000 0 g藥品， 加30 mL 80%乙醇溶液調至比例為1∶30， 調為40 ℃水浴超聲處理20 min， 通入冷水80 ℃回流2 h，離心，抽濾，向上清液加稀釋為30%濃度的乙醇至50 mL， 冷藏以防變質。

2.3 ?樣品測定

用電子天平稱取1.0 g減肥降脂藥品，向其中加入30 mL乙醇溶液，置于圓底燒瓶80 ℃水浴加熱，降溫后抽濾，放置冰箱中冷藏以防變質。每次吸取1 mL測定黃酮的質量分數。

2.4 ?實驗準確性研究

2.4.1? 精密度

準確稱取減肥方待測藥品5份1.000 0 g，調節為80 ℃通入蒸餾水回流2 h，根據“2.1”方法提取制備，在相同條件下重復制備待測液檢測 ^[12]，根據吸光度，計算精密度。

2.4.2 ?穩定性

準確稱取減肥方待測藥品5份1.000 0 g，80 ℃水浴通入冷凝水回流2 h，在相同條件下連續提取測定5次，按照“2.1”方法提取制備，于510 nm波長下測定放置不同時間的吸光度，取平均值，計算相對標準偏差R_SD%。

2.4.3? 重復性

準確稱取減肥方樣品5份1.000 0 g，80 ℃水浴加熱乙醇回流2 h，根據“2.1”方法提取制備，重復提取測定5次，排除實驗操作誤差的影響，檢測減肥降脂復方待測溶液的重復性。

2.4.4? 加標回收率

準確稱定5.000 0 mg的蘆丁對照品加入減肥方待測藥品中，準備5組相同實驗，80 ℃水浴加熱乙醇回流2 h，按照“2.1”提取制備，根據吸光度，計算加標回收率R_SD%^[13]。

3? 結果與分析

3.1 ?回歸方程

根據圖1，減肥降脂復方中黃酮質量分數與其制備溶液的質量濃度具有一定量效關系，線性關系為y=? 0.502 9x+0.007 5，R²=0.998 3，說明減肥降脂復方中的黃酮質量分數在0.20～1.20 mg/g內線性良好。

3.2? 精密度實驗

連續5次檢測制備好的溶液的吸光度，減肥降脂復方中黃酮的質量分數分別為43.56、45.71、43.52、44、43.92 mg·g^-1，相對標準偏差為1.80%（n=5），結果表明，該方法測定減肥降脂復方中總黃酮質量分數精密度良好（表1）。

3.3? 穩定性實驗

連續5次檢測待測溶液的吸光度，總黃酮的質量分數依次為44.01、42.27、44.11、43.76、43.51 mg·g^-1，R_SD=1.50%（n=5），說明該方法測定減肥降脂復方溶液黃酮的質量分數放置一段時間后實驗數據仍有意義（表2）。

3.4? 重復性實驗

在相同條件下提取制備減肥降脂復方的待測液，測定5次，吸光度分別為0.460 1、0.461 8、0.465 1、0.459 8、0.464 3，相對標準偏差=0.46%（n=5），黃酮質量分數分別為45.00、45.17、45.50、44.97、45.42 mg·g^-1，結果說明該方法測定樣品中總黃酮的質量分數穩定，實驗方法較準確，均在誤差范圍內（表3）。

3.5? 加標回收率實驗

根據表4，樣品的平均回收率為102.20 %，連續5次所測得吸光度分別為0.463 9、0.460 1、0.454 6、0.463 3、0.457 4，加入標準品后，黃酮質量分數分別為45.96、45.51、44.99、45.83、45.24 mg·g^-1，符合回收率的標準要求，相對標準誤差為0.77%，符合R_SD≤5%的要求，說明回收率較高^[14]，滿足分析要求（表4）。