恒溫?cái)U(kuò)增HPV檢測(cè)技術(shù)對(duì)子宮頸癌的篩查作用

魏偉華，劉新海，丘創(chuàng)華

1.廣東省深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518115；2.廣東省深圳市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518035

宮頸癌為婦科常見(jiàn)惡性腫瘤，可嚴(yán)重危害女性身體健康，需引起臨床重視。宮頸癌發(fā)生及發(fā)展較為漫長(zhǎng)，從癌前病變發(fā)展至宮頸癌可需10～20年左右，期間采取有效手段對(duì)患者進(jìn)行篩查及干預(yù)，可有效阻斷癌前病變發(fā)展為宮頸癌，降低宮頸癌發(fā)病率及患者病死率[1]。目前臨床對(duì)宮頸癌多采用細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢查，但其對(duì)技術(shù)及人員要求較高，在衛(wèi)生資源有限的地區(qū)難以推廣[2]。大量研究顯示[3]，人乳頭瘤病毒（HPV）為宮頸癌發(fā)生的必要條件，超過(guò)99.0%的宮頸癌患者可檢測(cè)到HPV DNA，而HPV檢測(cè)結(jié)果呈陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌，因此HPV檢測(cè)技術(shù)在宮頸癌篩查中具有較高應(yīng)用價(jià)值。該研究選取2017年6月—2018年7月該院收治的1 000名女性為研究對(duì)象，將Isotncga用于子宮頸癌檢查中，旨在評(píng)價(jià)其篩查作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取進(jìn)行宮頸癌篩查1 500名女性，年齡29～63歲，平均（46.78±2.78）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均宮頸完整，均有性生活史；所有患者均無(wú)盆腔放射治療史、子宮切除史或手術(shù)史，所有患者均對(duì)該研究知情，且簽訂同意書(shū)，并通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期或哺乳期女性；有檢查禁忌證狀者；對(duì)研究不同意者。

1.2 方法

所有患者均行Isotncga檢查，檢查前3 d不進(jìn)行陰道沖洗，不應(yīng)用陰道內(nèi)藥物，檢查24 h內(nèi)囑患者嚴(yán)禁性生活，于月經(jīng)期結(jié)束后3～7 d檢查。以宮頸細(xì)胞采樣刷收集宮頸脫落細(xì)胞，并保存于PreserCyt細(xì)胞保存液內(nèi)，對(duì)細(xì)胞保存液內(nèi)標(biāo)本行預(yù)處理，對(duì)粘液、炎癥細(xì)胞及血液與上皮細(xì)胞進(jìn)行分離，制成薄層細(xì)胞涂片，以95%酒精固定后行巴氏染色。吸取1 mL標(biāo)本高速離心10 min，取上清液后加入裂解液100μL，將其充分搖勻。將標(biāo)本置入干濕恒溫器（杭州奧盛）內(nèi)以95℃的溫度對(duì)其進(jìn)行加熱，時(shí)間15 min。取2μL處理好的標(biāo)本放入反應(yīng)液內(nèi)，并加入陰性及陽(yáng)性質(zhì)控。放置反應(yīng)管于熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)，將恒溫反應(yīng)程序設(shè)置為60℃、75 min。應(yīng)用人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交法）對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。分離提取DNA，隨后應(yīng)用熒光定量PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增。

病理學(xué)檢查：將HPV檢測(cè)呈陽(yáng)性的女性行進(jìn)一步陰道鏡下可疑部位多點(diǎn)活檢，于月經(jīng)干凈后行常規(guī)陰道鏡檢查，鏡下仔細(xì)觀察宮頸病灶形態(tài)、邊界、血管、表面構(gòu)型、顏色等征象，對(duì)病變最嚴(yán)重的部位行多點(diǎn)活檢，若檢查無(wú)異常現(xiàn)象，則取移行帶第3、6、9、12點(diǎn)。病理檢查結(jié)果分為慢性宮頸炎、輕度不典型增生（CINⅠ）、中度不典型增生（CINⅡ）、重度不典型增生（CINⅢ）、鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)HPV分型檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察，觀察不同年齡段女性HPV陽(yáng)性率差異，將病理診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，與HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。陰性判定標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本在熒光檢測(cè)通道擴(kuò)增過(guò)程中，無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)的熒光信號(hào)，內(nèi)參在VIC熒光檢測(cè)通道循環(huán)制≤65 min。陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：內(nèi)參在熒光通道擴(kuò)增過(guò)程中有或無(wú)明顯呈指數(shù)增長(zhǎng)的熒光信號(hào)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV分型檢測(cè)結(jié)果分析

該組1 000名行宮頸癌篩查的女性，HPV DNA檢測(cè)出危險(xiǎn)患者251名，檢出率為25.10%，見(jiàn)表1。

表1 HPV分型檢測(cè)結(jié)果分析Table 1 Analysis of HPV typing test results

2.2 不同年齡段HPV陽(yáng)性率分析

30～39歲、40～49歲、50～59歲、＞60歲各年齡段HPV陽(yáng)性率分別為26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49歲HPV陽(yáng)性率最高，與其他各年齡段相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2不同年齡段HPV陽(yáng)性率分析Table 2 HPV positive rate analysis of different ages

2.3 HPV檢測(cè)技術(shù)與病理檢查結(jié)果比較

HPV檢測(cè)技術(shù)檢出慢性宮頸炎102例、CINⅠ52例、CINⅡ41例、CINⅢ29例、SCC27例，與病理檢查結(jié)果相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

宮頸癌為臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，多項(xiàng)研究[4-5]表示該病發(fā)病病因與HPV感染相關(guān)，HPV-DNA檢測(cè)為直接針對(duì)病因的檢查手段，可有效對(duì)HPV感染女性進(jìn)行篩查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并采取適當(dāng)措施干預(yù)，利于降低宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，降低患者病死率。WHO指出，可將HPV-DNA檢測(cè)作為宮頸癌早期篩查方法，其中16、18型為引發(fā)宮頸癌常見(jiàn)的類(lèi)型，約76.58%的宮頸鱗癌可檢測(cè)出HPV16，而7.51%可檢測(cè)出18型[6]。我國(guó)臨床宮頸癌篩選指南指出，對(duì)HPV檢測(cè)為16、18型的患者需轉(zhuǎn)診陰道鏡，其他感染患者不需轉(zhuǎn)診，只需定期復(fù)查[7]。理想的宮頸癌篩查手段需滿足價(jià)格實(shí)惠、操作可行等需求，還需單獨(dú)提供16、18型信息及其他高危型檢測(cè)結(jié)果及內(nèi)參檢測(cè)信息，利于提升宮頸癌篩查效率，為臨床診治提供有力依據(jù)。

表3 HPV陽(yáng)性與病理檢查結(jié)果比較[n（%）]Table 3 Comparison of HPV positive and pathological examination results[n(%)]

以PCR為基礎(chǔ)的HPV分型檢測(cè)技術(shù)為臨床篩查宮頸癌的主要手段，敏感性較高，在臨床應(yīng)用廣泛，但其需反復(fù)熱變性，要求設(shè)備精良，且操作過(guò)程中容易被污染，擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，存在一定局限性。Isotncga檢測(cè)技術(shù)為一種新型體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，具有高效、恒溫、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，且不用借助精良昂貴的設(shè)備儀器，在臨床逐漸應(yīng)用廣泛[8]。Isotncga為基于恒溫DNA擴(kuò)增原理的檢查技術(shù)，為DNA提取、擴(kuò)增一體化，可對(duì)HPV 16、18型進(jìn)行特異性區(qū)分[9]。Isotncga取材方便，不僅可對(duì)已明確出現(xiàn)宮頸病變的女性進(jìn)行檢測(cè)，還可對(duì)可能患病的女性進(jìn)行預(yù)測(cè)，便于臨床盡早采取手段干預(yù)，阻斷癌前病變發(fā)展為宮頸癌，降低患者患病率及病死率[10-12]。該次研究結(jié)果顯示，30～39歲、40～49歲、50～59歲、＞60歲各年齡段HPV陽(yáng)性率分別為26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49歲HPV陽(yáng)性率最高，＞60歲年齡段HPV陽(yáng)性率發(fā)病率最低，這與曹慧玲等[13]學(xué)者在相關(guān)研究中得出，在對(duì)女性宮頸癌的篩查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，各個(gè)年齡段中HPV陽(yáng)性率發(fā)病率為30～39歲25.14%、40～49歲39.66%、50～59歲24.38%、＞60歲5.05%，最高發(fā)病率年齡段是40～49歲，與該文所得結(jié)果相近。HPV-DNA檢測(cè)慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC與病理檢查結(jié)果相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示Isotncga在宮頸癌篩查中具有較高應(yīng)用價(jià)值，可獲得與病理診斷等同的結(jié)果。

綜上所述，恒溫?cái)U(kuò)增HPV檢測(cè)技術(shù)在子宮頸癌中篩查作用理想，具有較高陽(yáng)性率。