急性淋巴細胞白血病患者miR-429表達分析

余蕙君 黃婷婷 潘楠楠

【摘要】 目的 探討急性淋巴細胞白血病患者miR-429表達情況。方法 選取30例急性淋巴細胞白血病患者作為觀察組， 另選同期30例健康體檢者作為對照組。比較兩組研究對象miR-429表達水平;比較觀察組miR-429不同表達水平患者年齡、性別、白細胞計數(shù)、血紅蛋白、乳酸脫氫酶、骨髓原始細胞比例、危險分級、生存時間。結(jié)果 觀察組miR-429表達水平（2.48±0.15）高于對照組的（0.92±0.06）， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組30例患者中miR-429低表達16例， 高表達14例。miR-429高表達患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達患者白細胞計數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細胞比例、危險分級均高于miR-429低表達患者， 生存時間短于miR-429低表達患者， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 miR-429表達和急性淋巴細胞白血病患者的預(yù)后有密切關(guān)系， 可以作為評價預(yù)后的參考指標。

【關(guān)鍵詞】 急性淋巴細胞白血病;miR-429;預(yù)后;白細胞;骨髓原始細胞比例;危險分級

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.20.016

【Abstract】 Objective ? To discuss the expression of miR-429 in acute lymphoblastic leukemia patients. Methods ? There were 30 acute lymphoblastic leukemia patients selected as the observation group， and concurrent 30 healthy examinees as the control group. The expression of miR-429 of the two groups was compared. The age， gender， white blood cell count， hemoglobin， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio， risk classification， and survival time of patients with different expression levels of miR-429 in the observation group were compared. Results ? The expression of miR-429 （2.48±0.15） of the observation group was higher than that of the control group （0.92±0.06）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Among the 30 patients in the observation group， 16 cases had low expression of miR-429 and 14 cases had high expression of miR-429. There was no statistically significant difference in age， gender， hemoglobin of miR-429 high expression patients compared with miR-429 low expression patients （P>0.05）. White blood cell count， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio and risk classification of patients with high expression of miR-429 were higher than those of patients with low expression of miR-429， and survival time was shorter than that of patients with high expression of miR-429， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? The expression of mir-429 is closely related to the prognosis of patients with acute lymphoblastic leukemia， which can be used as a reference index to evaluate the prognosis.

【Key words】 Acute lymphoblastic leukemia; miR-429; Prognosis; White blood cells; Bone marrow primordial cells ratio; Hazard classification

急性淋巴細胞白血病屬于血液系統(tǒng)疾病， 是患者的骨髓造血干細胞、淋巴祖細胞發(fā)生異常分化和惡性增殖， 其臨床癥狀是貧血、發(fā)熱和感染[1]。急性淋巴細胞白血病可以分為B淋巴細胞白血病、T淋巴細胞白血病， 屬于兒童、青少年高發(fā)性腫瘤[2]。急性淋巴細胞白血病的臨床治療效果有一定程度的提高， 但是仍有患者的預(yù)后很差， 有效的探尋其發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的敏感指標， 對于提高治療效果有重要意義。miRNA是一種內(nèi)源性非編碼RNA分子， 其包含18～24個內(nèi)源性堿基， 可以特異性調(diào)節(jié)目的基因表達， 對于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要影響。miR-429在不同類型腫瘤疾病中均有異常性表達， 其和疾病的惡性程度有關(guān)聯(lián)性。資料顯示[3]， 肺癌患者的病灶組織中miR-429水平較低時， 其臨床效果較好， 提示其可以作為腫瘤預(yù)后的觀察指標。但是目前關(guān)于急性淋巴細胞白血病患者miR-429表達的研究， 卻鮮有報道。本研究分析30例急性淋巴細胞白血病患者的臨床資料， 擬探討急性淋巴細胞白血病患者miR-429表達情況， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2016年3月～2018年3月的30例急性淋巴細胞白血病患者作為觀察組， 其中男13例， 女17例;同時選取同期30例健康體檢者作為對照組， 其中男20例， 女10例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。納入標準：①兩組研究對象的一般資料完整;②經(jīng)過骨髓細胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)對患者進行確診。排除標準：①已經(jīng)在其他醫(yī)療結(jié)構(gòu)接受急性淋巴細胞白血病患者;②心、肝、腎嚴重功能不全者;③藥物過敏者;④未按照要求完成治療者。

1. 2 儀器與方法

1. 2. 1 試劑與儀器 ①胎牛血清;②TRLZOL試劑;③淋巴細胞分離液;④逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）試劑盒;⑤細胞培養(yǎng)板;⑥AriaMx定量PCR儀;⑦高速冷凍離心機;⑧ZCZY-CS8搖床。

1. 2. 2 方法 對兩組研究對象的骨髓樣本進行采集， 將單個核細胞分離， 樣本液4.0 ml/份+相等體積淋巴細胞分離液， 4 ℃， 450 × g進行離心， 時間為20 min，?制備樣本細胞液。RT-PCR檢測：提取細胞內(nèi)的總RNA， 以分光光度法對RNA質(zhì)量進行評估， 以反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。設(shè)置逆轉(zhuǎn)錄條件：①50℃ 15 min;②92℃ 2 min， 反應(yīng)產(chǎn)物放置在-20℃冷凍保存。設(shè)計miR-429引物。設(shè)置反應(yīng)條件：①以95℃預(yù)變性處理， 時間為5 min;②95℃變性處理， 時間為15 s， 56℃復(fù)性， 時間為20 s， 72℃延伸時間為45 s。從變性直到延伸32個循環(huán)， 采用2-△△CT法對miR-429相對的表達水平。2-△△CT>2.5， 提示miR-429高水平表達， 2-△△CT≤2.5， 提示miR-429低水平表達。

1. 3 觀察指標 ?比較兩組研究對象miR-429表達水平;比較觀察組miR-429不同表達水平患者年齡、性別、白細胞計數(shù)、血紅蛋白、乳酸脫氫酶、骨髓原始細胞比例、危險分級、生存時間。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗;等級計數(shù)資料采用秩和檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組研究對象miR-429表達水平比較 觀察組miR-429表達水平高于對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 miR-429 水平與急性淋巴細胞白血病患者療效的關(guān)系 觀察組30例患者中miR-429低表達16例， 高表達14例。miR-429高表達患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達患者白細胞計數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細胞比例、危險分級均高于miR-429低表達患者， 生存時間短于miR-429低表達患者， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

急性淋巴細胞白血病作為血液系統(tǒng)腫瘤性疾病， 其主要癥狀是貧血、感染和出血， 并且對于肝臟、脾臟和骨骼等形成浸潤， 危害患者的身體健康和生命安全。升高的miR-429 表達水平會造成急性淋巴細胞白血病細胞增殖， 提高其遷移能力和耐藥性， 說明急性淋巴細胞白血病病情變化可能和miR-429 表達水平有一定的關(guān)聯(lián)性。有研究表明[4]， miR-429 表達水平和卵巢癌細胞的侵襲力、遷移能力有相關(guān)性， 也和病灶的惡性程度相關(guān)。急性淋巴細胞白血病臨床特征比較復(fù)雜， 其通過單一性少量的臨床指標來指導(dǎo)臨床治療， 受到一定的限制。

miR-429 表達水平和急性淋巴細胞白血病的臨床療效有一定的相關(guān)性， 對其監(jiān)測利于觀察急性淋巴細胞白血病的臨床效果。本研究中， 觀察組miR-429表達水平高于對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組30例患者中miR-429低表達16例， 高表達14例。miR-429高表達患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達患者白細胞計數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細胞比例、危險分級均高于miR-429低表達患者， 生存時間短于miR-429低表達患者， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示急性淋巴細胞白血病臨床造血干細胞分化障礙和miR-429 表達水平有一定的關(guān)系， miR-429高表達還可以增加腫瘤細胞的惡性程度， 提高患者的危險分級， 降低機體免疫功能和代謝水平的損傷， 進而影響白細胞水平、乳酸脫氫酶。體外的細胞研究表明[5-7]， miR-429 高表達水平對于急性淋巴細胞白血病患者的PI3K-AKT信號通路形成干擾， 進而影響白血病細胞的增殖， 促使白細胞對于藥物形成耐藥性， 影響臨床療效。既往研究中， 治療效果不佳或者生存期較短的急性淋巴細胞白血病患者miR-429 處于高表達水平， 而生存期較長的患者， miR-429 處于低表達水平， 此結(jié)果和本研究基本一致。

綜上所述， miR-429表達和急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后有密切關(guān)系， 可以作為評價預(yù)后的參考指標。

參考文獻

[1] 張麗翠， 鐘晨， 馬雅靜， 等. 急性淋巴細胞白血病患者 miR-429 表達水平及其預(yù)后價值. 中國實驗血液學(xué)雜志， 2020， 28（1）：119-124.

[2] 吳嘉美， 劉夢瑤， 許何麗， 等. hsa-miR-429的靶基因預(yù)測及功能分析. 解剖學(xué)進展， 2019， 25（3）：312-315.

[3] 郭春梅， 劉淑清， 孫明忠. miR-429與腫瘤. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報， 2018， 34（8）：826-832.

[4] 何楓， 顏連啟， 李小磊. miR-429在疾病中的研究進展. 江蘇醫(yī)藥， 2017， 43（17）：1266-1269.

[5] 黃文劍， 吳琍， 侯琳， 等. 乳癌組織miR-429基因表達及甲基化檢測. 青島大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2018， 54（1）：26-29.

[7] 李金媚. miR-373與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移研究進展. 中華實用診斷與治療雜志， 2015， 29（10）：946-948.

[8] 陳志偉， 郭琳琳， 吳嘉美， 等. miR-1271-5p促進大鼠心肌細胞增殖. 解剖科學(xué)進展， 2018， 24（2）：153-155.

[收稿日期：2020-04-09]