塵肺患者高毒力肺炎克雷伯菌分析

洪曉平 胡順生

（國家電網(wǎng)公司職業(yè)病防治院檢驗(yàn)科 浙江 建德 311600）

1.材料與方法

1.1 菌株來源

收集2017 年1 月—2019 年8 月期間來自全國各地到本單位休養(yǎng)的矽肺患者痰培養(yǎng)中肺炎克雷伯菌菌株，隨機(jī)選送21 株肺炎克雷伯菌樣本。

1.2 試劑與儀器

梅里埃ATB、ATB 鑒定板條和藥敏板條；梅里埃哥倫比亞血瓊脂平板；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)試劑盒(日本Takara)，小量質(zhì)粒抽提試劑盒（美國Axygen公司），PCR擴(kuò)增儀及紫外線成像系統(tǒng)，DYY-11 型電泳儀。

1.3 PCR 檢測毒力基因

利用煮沸法提取DNA 模板。50ulPCR 體系為4 種dNTP 終濃度各位200umol/L、引物終濃度各為0.4umol/L、純化擴(kuò)增K1K2K5K20K54K57，rmpA、magA、magA。

2.結(jié)果

21 株肺炎克雷伯菌毒力實(shí)驗(yàn)中，高毒力基因rmpA 陽性率為85.7%（18/21），aeroA 陽性率為95.2（20/21），magA 陽性率為28.6%（6/21）。莢膜分型以K1/K2/K57 為主占66.7%（14/21），K5、k20、K54 均為1 株，還有4 株不屬于所檢測的6 個(gè)型別中，見表。

表 21 株肺炎克雷伯菌毒力基因檢測和莢膜分型

3.討論

矽肺病人是以塵肺組織彌漫性纖維化為主的全身性疾病，粉塵對(duì)肺組織的一系列毒性損害，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞死亡，最終引起肺廣泛性纖維化改變，這些病理改變使呼吸系統(tǒng)的清障、自凈功能下降，機(jī)體免疫功能減退，極易引起肺部細(xì)菌感染。

隨機(jī)選送的21 株肺炎克雷伯菌經(jīng)PCR 檢測均為高毒力肺炎克雷伯菌，由此可以推斷矽肺患者的肺炎克雷伯菌也應(yīng)該以產(chǎn)高毒力為主，究其原因可能是矽肺患者由于本身受粉塵損害導(dǎo)致肺部纖維化的改變，從而更易得高毒力肺炎克雷伯菌的定植，對(duì)周薇、黃文芳等人提出的高毒力型肺炎克雷伯菌感染是否具有地域易感性還是體質(zhì)易感性[1]這一觀點(diǎn)的進(jìn)一步補(bǔ)充。

我們對(duì)隨機(jī)選送的21 株肺炎克雷伯菌進(jìn)行常見的K1、k2、k5、K20、K54、k57 基因擴(kuò)增檢測，發(fā)現(xiàn)以K1/K2/K57 為主占66.7%（14/21），K5、k20、K54 均為1 株，還有4 株不屬于所檢測的6 個(gè)型別中，故可推斷矽肺患者人群所定植的肺炎克雷伯菌其黏液性極強(qiáng)；已有的研究認(rèn)為，K1、K2 型肺炎克雷伯菌具有強(qiáng)大的莢膜合成能力，能抵抗吞噬細(xì)胞的吞噬作用，具有毒力強(qiáng)的特點(diǎn)，被認(rèn)為是肝臟侵襲性感染的重要病原菌，故認(rèn)為此類矽肺患者人群一旦抵抗力低下，其高定植的高毒力性肺炎克雷伯菌立刻會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)闂l件致病菌，如果炎癥不及時(shí)控制，會(huì)導(dǎo)致矽肺患者感染嚴(yán)重，并可能會(huì)導(dǎo)致死亡。

高毒力肺炎克雷伯菌粘稠性狀是莢膜大量合成的結(jié)果，與此相關(guān)的是黏液表型調(diào)控基因rmpa 的表達(dá)，rmpa 基因編碼Rmpa功能蛋白，輔助莢膜合成，參與對(duì)黏液性狀的調(diào)控。敲除rmpa基因的菌株，莢膜合成能力降低甚至缺失，失去高黏液表型的特征，使致病力降低[2]，而aeroA 基因在高毒力肺炎克雷伯菌的毒力方面也起著重要的作用，本文隨機(jī)選送的21 株高粘度肺炎克雷伯菌中含rmpa 菌株高達(dá)85.7%（18/21），含aeroA 菌株高達(dá)95.2%（20/21），由此可見矽肺患者高毒力肺炎克雷伯菌高粘度、高毒力概率均很高。除rmpa 基因外，黏液相關(guān)基因magA也與莢膜合成有關(guān)，同時(shí)magA 基因僅位于K1 型高毒力肺炎克雷伯菌中，也可作為PCR 法檢測莢膜血清型K1 的目的基因[3]，而本文中6 株magA 均存在于K1 型中，驗(yàn)證了magA 可以作為檢測K1 型的目的基因。

總而言之，矽肺患者是由于吸入生產(chǎn)粉塵導(dǎo)致的廣泛性纖維化的肺部疾病，更容易患高毒力肺炎克雷伯菌的高定植，是個(gè)不容忽視的群體，臨床有此類矽肺患者因感染入院，在抗感染方面應(yīng)充分考慮其特殊性，加強(qiáng)對(duì)患者的治療，控制嚴(yán)重侵襲性感染的發(fā)生。