基于“白芍不同炮制方法的對比研究”探討《中藥炮制學》實驗教學改革

杜洪志，柴慧芳，李 瑋，陳志琳，迮薇薇，王建科

(貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025)

中藥炮制學是中醫藥高等院校中藥學、中藥制藥、中醫學等相關專業的必修課，該課程以研究中藥炮制原理及理論、改進炮制工藝、制定飲片質量標準等為主要任務，是保證臨床用藥的安全有效、穩定可控的重要學科。炮制技術是我國具有自主知識產權、保證飲片質量的關鍵技術，該技術的傳承與創新，除了要有扎實的理論作指導，更要有熟練的實踐操作技能和準確的判斷標準[1]。

中藥材經炮制后得到中藥飲片，其質量的好壞直接關系到臨床療效，飲片質量又包括內在質量和外在質量[2]，外在質量主要通過成品性狀來評價，內在質量主要以有效成分或組分含量的高低進行質量控制。然而，中藥炮制中影響成品質量的因素較多(如火力、火候、操作、輔料等)。因此，對于初學者來說，不同炮制方法，如何有效、直觀地判斷飲片質量，其內在質量和外在質量有著怎樣的聯系，是本門課程實驗教學改革中存在的問題和研究方向。

基于此，本文以中藥炮制學中設計性實驗——白芍不同炮制方法的對比研究為例，通過教學設計、文獻檢索、課程安排、結果分析、討論交流、教學反饋等實驗教學思路，逐步建立學生對中藥炮制中質量變化的感官判斷標準，提高對該門課程的學習興趣，進一步培養學生的綜合實踐能力和自主創新精神[3]。本研究結果為探討中藥炮制學實驗教學改革與學生科研能力培養提供依據和參考。

1 課程教學背景

中藥炮制學是遵循中醫藥理論體系，在繼承中藥傳統炮制技術和理論的基礎上，研究中藥炮制的理論、工藝、規格、質量標準、歷史沿革及其發展方向的學科，具有實踐性強、知識面廣的特點。中藥炮制學的學習與研究既要繼承傳統中藥炮制技術與經驗，領會炮制精神，又要秉持創新發展理念，結合現代研究方法，改進炮制工藝，汲取精華，創新炮制技術，進一步提高中藥飲片質量。

2 研究內容

2.1 教學內容

以白芍為研究對象，采用HPLC法，探討白芍不同炮制方法對芍藥苷和芍藥內酯苷的影響，通過學生設計實驗方案，開展實驗研究。

2.2 實施方案

2.2.1 實驗安排與設計 選擇30人進行實驗。自由組合成4組，每組約7～8人，指定組長，統一負責安排小組具體實驗任務。通過查閱文獻資料，撰寫相關文獻綜述，根據實驗要求和研究思路，設計相關實驗方案，再由指導老師審核其方案的可行性，審核通過后，開始實驗研究，實驗過程中為學生提供相關的研究平臺和條件，并對學生進行實時指導和分析。

2.2.2 儀器與試藥 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津：二元泵、SPD-20A檢測器)；Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；千分之一電子天平(型號JT-5003，余姚市金諾天平儀器有限公司)；真空干燥箱(型號DZ-2BC，天津市泰斯特儀器有限公司)；超聲波清洗儀(型號HS10260D，天津恒奧科技公司)。

芍藥內酯苷(批號：GZDD-0690，≥99%，貴州迪大科技有限責任公司)；芍藥苷(批號：GZDD-0045，≥99%，貴州迪大科技有限責任公司)；乙醇、磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水。

白芍藥材購自四川省，經貴州中醫藥大學藥用植物與栽培教研室魏升華教授鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。

2.2.3 方法與結果 炮制方法：①生品：取白芍片，大小分檔，除去雜質，即可。②炒黃：取凈白芍片，置預熱鍋中，用文火炒至表面微黃色至黃色，取出，攤開放涼。③炒焦：取凈白芍片，置預熱鍋中，用中火炒至表面棕黃色至焦黃色，取出，攤開放涼。④土炒：取灶心土(或黃土)細粉置鍋中，用中火加熱至靈活狀態，加入凈白芍片，拌炒至白芍表面均勻掛土粉時，微顯焦黃色，取出，篩去土粉，攤開放涼。每100 kg白芍片，灶心土(或黃土)30 kg。⑤麩炒：取凈白芍片備用，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即投入白芍片，不斷翻動，炒至顏色為亮黃色時，取出，篩去麥麩，攤開放涼。每100 kg白芍片，麥麩10 kg。⑥酒炙：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤至透，待酒被吸盡后，置炒制容器內，用文火加熱，炒至近干，取出晾涼。每100 kg白芍片，黃酒10 kg。⑦酒潤麩炒：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤至透，待酒被吸盡后，晾涼備用，每100 kg白芍片，黃酒10 kg；取晾干后的酒潤白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即倒入白芍片，不斷翻動，炒至顏色變亮黃色時，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg酒潤白芍片，麥麩10 kg。⑧醋炙：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤至透，待醋被吸盡后，置炒制容器內，用文火加熱，炒干，取出晾涼。每100 kg白芍片，米醋15 kg。⑨醋潤麩炒：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤至透，待醋被吸盡后，晾涼備用。每100 kg白芍片，米醋15 kg；取晾干后的醋潤白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即投入白芍片，不斷翻動，炒至顏色變亮黃色至深黃色時，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg醋潤白芍片，麥麩10 kg。不同炮制方法樣品見圖1。

注：A.生品；B.炒黃；C.炒焦；D.土炒；E.麩炒；F.酒炙；G.酒潤麩炒；H.醋炙；I.醋潤麩炒。

芍藥苷和芍藥內酯苷的含量測定：①對照品溶液的制備：分別精密稱取干燥至恒重質量的芍藥內酯苷、芍藥苷對照品適量，加甲醇溶解，制成含芍藥內酯苷0.038 mg/mL、芍藥苷0.062 mg/mL的混合對照品溶液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

②供試品溶液的制備：取白芍粉末約0.1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入70%乙醇45 mL，稱定重量，超聲提取(功率300 W，50 kHz)30 min，取出放冷，稱重，加70%乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

③色譜條件：Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)為流動相進行洗脫；檢測波長為230 nm；柱溫30 ℃；流速為1 mL/min；進樣體積為10 μL。理論塔板數不低于2 000。對照品及樣品色譜見圖2。

注：A.芍藥內酯苷對照品；B.芍藥苷對照品；C.白芍樣品。

④方法學考察：精密吸取混合對照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL注入高效液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標(Y)，進樣體積為橫坐標(X)進行線性回歸，得芍藥內酯苷回歸方程為：Y=1×106X-6128，R2=1；芍藥苷回歸方程為：Y=1×106X-31340，R2=0.999 9；結果表明芍藥內酯苷在0.076～0.684 μg，芍藥苷在0.124～1.116 μg范圍內呈良好的線性關系。

通過精密度試驗，穩定性試驗，重復性試驗，RSD均小于3%，符合相關要求，通過加樣回收率試驗，平行制備6份樣品，減半稱樣，平均回收率為100.93%，RSD值為2.13%。

樣品含量測定：按照“2.2.3”項下供試品溶液的制備方法制備樣品，精密吸取白芍樣品溶液，按照“2.2.3”項下色譜條件進樣分析，測定白芍不同炮制方法樣品中芍藥苷和芍藥內酯苷的含量，采用外標工作曲線法進行含量計算。每個樣品平行3份樣，分別計算平均百分含量(%)及相關RSD值。含量測定結果見表1。

表1 白芍不同炮制方法中芍藥苷和芍藥內酯苷含量測定結果 (n=3)

由研究結果可知，白芍經過炮制后，芍藥苷的含量均有所降低，而不同炮制方法中，以醋炙法含量最高，以炒焦法含量最低，而芍藥內酯苷的含量，除醋炙外，均有所下降，但下降的趨勢不明顯。結果表明，不同炮制方法對白芍內在成分芍藥苷、芍藥內酯苷有一定影響，芍藥苷受炮制方法的影響較大。

2015版《中國藥典》白芍的炮制方法為酒白芍和炒白芍，根據研究結果，酒炙后芍藥苷和芍藥內酯苷含量均有所下降，炒白芍主要以炒黃為主，若溫度過高，時間過長(如炒焦)，對內在成分芍藥苷的影響較大；而醋炙后，與生品比較，芍藥苷含量下降相對較少，芍藥內酯苷含量甚至有所升高，而醋炙的炮制目的是緩和寒性，增強養血斂血、疏肝解郁之功，表明不同炮制方法與內在成分之間有一定的相關性，然其關聯性如何判定，內在成分的變化是否與炮制目的、功效的變化相關，有待進一步研究論證。

2.3 實驗總結和討論

每個實驗小組根據實驗結果，并結合相關炮制方法、炮制目的、關鍵工藝、影響成品性狀的因素、注意事項等進行總結和討論，并書寫實驗報告。指導老師根據研究結果，并結合實驗過程進行評價，再將相關的注意事項、重點和難點、炮制前后藥性的變化與成分變化的相關性等進行具體分析，使學生對中藥炮制的認識更加明確，進一步提高學生的學習興趣，加深對知識點的掌握。

3 教學效果反饋

通過學生參與設計實驗方案、撰寫研究綜述、實驗前期培訓、后期數據處理分析等過程，進一步提高了學生創新學習和自主學習的能力。

(1)經過整個實驗，使學生明白白芍的炮制方法，并掌握不同炮制方法的注意事項。

(2)通過HPLC色譜分析，使學生掌握白芍炮制前后芍藥苷、芍藥內酯苷的變化及HPLC色譜分析操作注意事項。

(3)針對同一藥材，通過不同炮制方法的比較，使學生對不同炮制工藝的成品性狀有非常直觀地認識和了解，再結合內在成分的變化，對相關影響質量的因素更為清晰，掌握重要知識點更為牢固。

(4)貴州特色炮制方法主要為潤藥后麩炒(如酒潤麩炒、蜜潤麩炒等)，經過開展該實驗，為設計其他藥材炮制方法奠定了良好的實驗基礎。

4 實驗教學反思

4.1 存在的問題

(1)中藥炮制學實驗課多采用課前講解、學生實驗、教師巡回指導的教學方法。整個過程被動接受，學習興趣不高，沒有較好發揮學生的創造性思維。

(2)具體實驗操作中，只能對中藥飲片的外觀性狀有一個感官認識，不同炮制方法對其內在質量的影響不清楚。

(3)由于對中藥炮制認識不夠，相關炮制方法關鍵工藝點不清晰，使得不能較好地傳承與創新“中藥炮制”這一特色技術。

4.2 解決措施

根據中藥炮制存在的問題，結合本次設計性實驗“白芍不同炮制方法的對比研究”，若能在中藥炮制學的實驗教學中，引入科研思維，融入科研實驗，逐漸闡明炮制關鍵工藝點，將會有效提升學生學習興趣，提高創新思維能力。

(1)做好實驗設計，豐富課堂教學。學生作為中藥炮制的初學者，不清楚這門傳統學科存在的相關問題，這就需要指導老師做好實驗設計并進行引導，層層深入，結合不同教學方法豐富實驗課堂，逐漸激發學生的學習興趣，開拓學生思維，激發自主探究的欲望。

(2)積極引導，傳承與創新。提高學生的學習能力，首先要激發學生學習的主動性、積極性。根據學生提出的實驗方案，教師要結合具體實驗平臺對實驗的可行性進行判斷，針對擬解決的關鍵問題著重論述，積極引導學生。經過一到兩次的實驗設計，使學生對其他同類藥材的炮制研究有了實驗思路，為其他藥材的深入研究奠定了良好的實驗基礎，開拓了學生的創新思維能力[4]。

(3)提供良好平臺，提高綜合實踐能力。實驗課堂主要是為了提高學生的綜合實踐能力，然而，實踐能力的提高，與實驗平臺密切相關。當前，高校學生實驗課不僅僅是簡單的驗證性實驗，要培養學生對實驗現象的深刻認識，闡明實驗原理，科學解釋實驗現象，則需要良好的實驗平臺。特別是中藥炮制這類傳統與現代緊密結合的學科，很多炮制目的只有理論，沒有實驗數據支撐，此時，更需要學生積極探索，整體感知實驗內容，進一步培養刻苦鉆研、積極探索的精神[5]。

5 結語

中藥炮制學是一門傳統與現代密切結合的綜合性專業技術學科，藥材經過炮制成飲片后才能入藥是中醫藥學的一大特色，中藥飲片質量的好壞直接影響著中醫臨床療效。因此，秉承中藥炮制“傳承創新”的教學理念，改進教學方法，提高學生對中藥炮制的認識，領會炮制精神，有效培養相關的專業技術人才是中藥飲片行業、中醫藥行業的迫切需要。而在具體實踐教學中，要加強教學改革，積極探討，并結合中藥炮制學科特色，靈活地將科研和教學有機結合[6]，進一步激發學生創造性思維，培養學生積極探索精神，提高學生自主學習能力，讓新時代中醫藥專業的大學生成為知識的主動獲取者和解決實際問題的設計者，為中醫藥事業發展貢獻一份力量。