雞新城疫病毒毒種保存期試驗

新城疫（ND）俗稱“雞瘟”，由新城疫病毒（NDV）的強毒株引起多種禽類急性、高度接觸性、致死性傳染病，人類偶爾亦可感染，給世界禽業養殖帶來了毀滅性打擊，造成極為嚴重的影響[1]。一年四季均可以發生此病。主要的傳播方式是接觸傳播，主要的傳染源是患病雞、帶毒雞的分泌物。

本實驗取雞新城疫檢驗和基礎種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于不同的保存時間隨機抽樣，進行病毒含量測定、無菌檢驗及對雞毒力測定，確定凍干毒種-70℃條件下的保存期；將檢驗和生產種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存后不同時間隨機取出，進行病毒含量測定、無菌檢驗及對雞毒力測定，確定濕毒-20℃條件下的保存期，現將試驗結果報告如下。

1 材料

1.1 毒種（表1）

表1 毒種

1.2 檢驗用培養基無菌檢驗用硫乙醇酸鹽培養基（T.G）、酪胨瓊脂（G.A）和葡萄糖蛋白胨（G.P），自己制備；支原體檢驗用Frey氏培養基，購自中國獸醫藥品監察所。

1.3 SPF雞及SPF雞胚由哈藥集團生物疫苗有限公司五常SPF雞場提供。

2 方法

2.1 準備將檢驗和基礎種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于保存當日和保存后12、24、36、48、60、72、75和78個月隨機抽樣，分別進行病毒含量測定、無菌檢驗及對雞毒力的測定；檢驗和生產種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存當日和保存后3、6、9、12、15和18個月，隨機抽樣分別進行病毒含量測定、對雞毒力測定和無菌檢驗。

2.2 病毒含量將毒種用生理鹽水作10倍系列稀釋，取10-7、10-8、10-93個稀釋度，各尿囊腔內接種10日齡SPF雞胚5枚，每胚0.1mL，置36～37℃繼續孵育，24h以前死亡的雞胚棄去不計，記錄24～72h雞胚死亡情況，按Reed-Muench法計算ELD50。

2.3 對雞毒力用60和90日齡SPF雞10只，各肌肉注射病毒液0.1mL（含105.0ELD50），觀察14d，記錄雞死亡結果。

2.5 無菌檢驗按照現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗。

3 結果

3.1 凍干毒種保存期試驗結果

3.1.1 不同保存時間凍干毒種病毒含量及血凝價測定結果（表2）

表2 病毒含量及血凝價測定結果

3.1.2 不同保存時間檢驗用凍干毒種對雞毒力試驗結果（表3）

表3 對雞毒力量測定結果

3.1.3 不同保存時間凍干毒種無菌檢驗試驗結果（表4）

表4 無菌檢驗結果

(續表)

從表2～4結果可以看出，檢驗種子和基礎種子批凍干毒種于-70℃保存75個月，病毒含量和血凝價與保存當日無明顯差異，無細菌和霉菌污染；檢驗用凍干強毒種于-70℃保存75個月與保存當日均可致60和90日齡雞9/10～10/10死亡；無細菌和霉菌污染。

3.2 濕毒保存期試驗結果

3.2.1 不同保存時間檢驗和生產毒種濕毒病毒含量測定結果（表5）

從表5結果可以看出，檢驗和生產種子批濕毒于-20℃保存15個月，病毒含量和血凝價與保存當日無明顯差異，保存18個月病毒含量下降1個滴度以上，血凝價均為1：256。

表5 病毒含量及血凝價測定結果

3.2.2 不同保存時間檢驗用濕毒種對雞毒力試驗結果（表6）

表6 對雞毒力量測定結果

從表6結果可以看出，檢驗種子批濕毒于-20℃保存15個月與保存當日均可致60和90日齡雞9/10～10/10死亡，保存18個月僅可致6/10～7/10死亡。

3.2.3 不同保存時間毒種濕毒無菌檢驗測定結果（表7）

表7 濕毒無菌檢驗結果

(續表)

從表7結果可以看出，檢驗和生產種子批濕毒于-20℃保存18個月與保存當日均無細菌、霉菌污染。

4 結論

4.1 雞新城疫病毒檢驗用凍干毒種于-70℃保存75個月，病毒含量、血凝價與保存當日無明顯變化，且無細菌和霉菌污染；檢驗用凍干強毒種對雞的毒力與保存當日無明顯差異，無細菌和霉菌污染；濕毒于-70℃保存15個月，病毒含量、血凝價與保存當日無明顯變化，且無細菌和霉菌污染；檢驗用凍干強毒種對雞的毒力與保存當日無明顯差異，無細菌和霉菌污染。保存78個月病毒含量下降1個滴度以上，檢驗強毒對雞的毒力下降。

4.2 雞新城疫病毒檢驗與生產種子批濕毒于-20℃保存15個月，病毒含量、血凝價、對雞的毒力與保存當日無明顯差異，無細菌、霉菌污染；保存18個月病毒含量下降1個滴度以上，檢驗強毒對雞的毒力下降。