外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點多態性與冠心病分型和病變程度的關系

馮茹，詹中群，蔡婕

中國科學院大學深圳醫院(光明)，廣東深圳518106

冠心病(CHD)是臨床常見的心血管疾病，在全球范圍內具有較高的發病率、病死率和致殘率[1，2]?！吨袊难懿蟾?018》顯示，近年來隨著人口老齡化加劇、生活節奏加快和生活方式改變等，我國CHD的發病率逐年上升，已成為嚴重威脅居民健康和生活質量的重大公共衛生問題之一[3]。細胞色素P450(CYP)是人體內一種重要的藥物代謝酶，能夠參與多種內源性和外源性化合物代謝。目前，在人類基因組中已經發現了57種CYP基因，根據基因序列同源性，將其分為18個家族、44個亞家族。CYP2C8是CYP2C亞家族中4個已知成員之一，約占CYP2C亞家族的26%，在肝臟中含量較高[4]。CYP2C8不僅能夠參與甾體、花生四烯酸等內源性化合物的代謝，還能夠參與催化大約5%的臨床藥物；CYP2C8基因存在明顯的多態性，其基因多態性能夠影響這些內源性和外源性化合物的代謝清除[5]。有研究報道，CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點多態性與俄羅斯人CHD的發病有關[6]。但國內鮮見相關報道。為此，本研究探討了外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點多態性與CHD分型和病變程度的關系，以期為CHD防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2018年1月中國科學院大學深圳醫院(光明)收治的胸悶、胸痛患者317例，經冠狀動脈造影檢查證實CHD患者233例(觀察組)，其中急性心肌梗死(AMI)123例、不穩定型心絞痛(UAP)74例、穩定型心絞痛(SAP)36例，非CHD患者84例(對照組)。研究對象均為初診，入院前未服用過相關治療藥物且病歷資料完整，并排除合并結構異常性心臟病、嚴重心力衰竭或心率失常等其他心臟疾病者以及合并惡性腫瘤者。觀察組男132例、女101例，年齡(64.8±8.4)歲，合并糖尿病69例、高血壓105例，有吸煙史104例、飲酒史79例；對照組男49例、女35例，年齡(63.4±5.1)歲，合并糖尿病11例、高血壓25例，有吸煙史32例、飲酒史19例。AMI患者中，男73例、女50例，年齡(65.3±6.5)歲，合并糖尿病38例、高血壓60例，有吸煙史56例、飲酒史45例；UAP患者中，男43例、女31例，年齡(64.0±7.1)歲，合并糖尿病22例、高血壓30例，有吸煙史33例、飲酒史23例；SAP患者中，男16例、女20例，年齡(65.2±7.3)歲，合并糖尿病9例、高血壓15例，有吸煙史15例、飲酒史11例。以上臨床資料觀察組與對照組以及CHD不同類型之間具有可比性。本研究經中國科學院大學深圳醫院(光明)醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點多態性檢測 所有研究對象入組后，采集清晨空腹肘靜脈血5 mL，置于真空抗凝管中，1 500 r/min離心15 min，留取上層血清，置于EP管中，-80 ℃保存。待標本成批后，置于37 ℃水浴鍋中融化，按照PUREGENE DNA提取試劑盒說明快速提取基因組DNA，經紫外分光光度計鑒定，提取的基因組DNA濃度和純度合格，可用于后續實驗。通過Haploview軟件、文獻查閱等方法選擇CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點。所有引物由北京六合華大基因科技有限公司通過Array Designer軟件設計合成。CYP2C8基因rs7909236位點上游引物5′-CACCCCTGGTATGCACTGTGCCGTG-3′、下游引物5′-ACTGATTCTTGGGCAAGTTCAAATA-3′，rs1934953位點上游引物5′-ACTGGTACCTGGCTTCTCTCAGCCGGGGTC-3′、下游引物5′-CTAGCTAGCTAGGGGGCGGCATGTAGTGGTG-3′。按PCR擴增試劑盒說明配制反應體系。PCR擴增反應條件：95 ℃預變性5 min，94 ℃變性45 s、55 ℃退火45 s、72 ℃延伸1 min共40個循環，最后72 ℃延伸10 min。利用單核苷酸多態性基因分型檢測試劑盒對選取的位點進行單核苷酸多態性分析。

1.3 Gensini積分和冠狀動脈病變支數檢測 CHD患者入院后經冠狀動脈造影檢查，明確冠狀動脈病變支數、位置和管腔狹窄程度，通過病變位置和管腔狹窄程度計算Gensini積分。管腔狹窄≤25%計1分，管腔狹窄>25%～50%計2分，管腔狹窄>50%～75%計4分，管腔狹窄>75%～90%計8分，管腔狹窄>90%～99%計16分，管腔狹窄>99%計32分；不同節段冠狀動脈管腔狹窄評分乘以相應系數：左主干病變管腔狹窄評分×5，左前降支近段管腔狹窄評分×2.5、中段管腔狹窄評分×1.5、遠段管腔狹窄評分×1、第一對角支管腔狹窄評分×1、第二對角支管腔狹窄評分×0.5，左回旋支近段管腔狹窄評分×2.5、遠段和后降支管腔狹窄評分均×1、后側支管腔狹窄評分×0.5，右冠狀動脈近、中、遠段和后降支管腔狹窄評分均×1。冠狀動脈各節段管腔狹窄積分之和即為Gensini積分。

2 結果

2.1 兩組外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型分布觀察值與期望值比較 兩組外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型頻率觀察值與期望值比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，表明兩組外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，具有群體代表性。見表1。

表1 兩組外周血CYP2C8基因型rs7909236、rs1934953位點基因型分布觀察值與期望值比較[例(%)]

2.2 CHD不同分型者外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型分布比較 CHD不同分型者外周血CYP2C8基因rs7909236位點各基因型比較差異無統計學意義(P>0.05)。AMI患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型頻率均高于SAP、UAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型頻率(P均<0.05)。見表2。

表2 CHD不同分型者外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型分布比較[例(%)]

2.3 CHD患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點不同基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較 SAP患者和UAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點TT、TC、CC基因型者Gensini積分和冠狀動脈病變支數比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。AMI患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點TT、TC、CC基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較差異均有統計學意義(F/χ2分別為23.841、14.327，P均<0.05)。見表3～5。

表3 SAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點不同基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較

表4 UAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點不同基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較

表5 AMI患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點不同基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較

3 討論

近年來，隨著人口老齡化加劇、生活節奏加快和生活方式改變等，我國CHD的發病率明顯上升并呈年輕化趨勢，已成為嚴重威脅居民健康和生活質量的重大公共衛生問題之一[3]。

CYP是人體內一種重要的藥物代謝酶，參與大約75%的藥物代謝反應。大部分藥物代謝反應是通過抑制或誘導CYP亞型實現的[7]。目前，在人類基因組中已經發現了57種CYP基因，根據基因序列同源性，將其分為18個家族、44個亞家族。有研究報道，CYP2C亞家族在CHD的發生、發展過程中具有重要作用[8，9]。Ercan等[10]對rs1799853(CYP2C9*2)、rs4986893(CYP2C19*3)位點研究發現，含有雜合子的CYP2C9*2基因型吸煙者罹患CHD的風險升高3.7倍，CYP2C19*3基因突變(rs4986893)可增加冠狀動脈粥樣硬化的發生風險。CYP2C19是花生四烯酸代謝途徑上的關鍵酶之一，催化花生四烯酸生成環氧二十碳三烯酸(EET)。EET被認為是一種維持正常內皮細胞和血管功能的內皮源性超極化因子，能夠通過激活鉀離子、鈣離子通道，使內皮下平滑肌細胞超極化，從而產生擴血管作用；同時，EET還能通過轉錄因子、核因子κB和κB激酶抑制血小板聚集、抑制白細胞黏附至血管壁、減少血管細胞黏附分子表達[11，12]。以上研究提示，CYP2C亞家族能夠參與冠狀動脈粥樣硬化的發生、發展。

CYP2C8是CYP2C亞家族中4個已知成員之一，約占CYP2C亞家族的26%。CYP2C8不僅能夠參與甾體、花生四烯酸等內源性化合物的代謝，還能夠參與催化大約5%的臨床藥物。有研究報道，CYP2C8不同基因型可預測自身免疫性疾病患者服用羥氯喹后肝功能異常的發生率，攜帶CYP2C8基因rs10882526位點AG基因型和G等位基因的患者，肝功能異常的發生率明顯升高[13]。有研究發現，吡格列酮可逆轉K562/ADR細胞對阿霉素的耐藥性，其機制與CYP2C8蛋白表達下調密切相關[14]。CYP2C8不同基因型與腫瘤的發生、發展亦具有一定相關性。有研究報道，CYP2C8基因rs1058930位點多態性能夠增加女性乳腺癌的患病風險[15]；在肝細胞癌中CYP2C8表達降低，有可能成為預測肝細胞癌患者預后不良的潛在生物標志物[16]。有研究發現，血管內皮細胞CYP2C8高表達能夠降低動脈粥樣硬化小鼠腫瘤壞死因子α活性，從而抑制動脈粥樣硬化形成[17]。俄羅斯的一項研究發現，CYP2C8基因多態性與俄羅斯人CHD的易感性有關[6]。但國內關于CYP2C8基因多態性與CHD易感性或病變程度的關系鮮見報道。

本研究觀察了外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點多態性與CHD分型和病變程度的關系。Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗發現，兩組外周血CYP2C8基因rs7909236、rs1934953位點基因型頻率觀察值與期望值比較差異均無統計學意義，具有群體代表性。CHD不同分型者外周血CYP2C8基因rs7909236位點各基因型比較差異無統計學意義，表明外周血CYP2C8基因rs7909236位點多態性與CHD的發生、發展無明顯相關性。AMI患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型頻率均高于SAP、UAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型頻率，提示外周血CYP2C8基因rs1934953位點多態性可能與CHD的發生、發展有關。進一步研究發現，SAP患者和UAP患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點TT、TC、CC基因型者Gensini積分和冠狀動脈病變支數比較差異均無統計學意義；AMI患者外周血CYP2C8基因rs1934953位點TT、TC、CC基因型者Gensini積分、冠狀動脈病變支數比較差異均有統計學意義。提示外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型能夠參與AMI病情進展，而外周血CYP2C8基因rs1934953位點多態性可能與SAP、UAP病情進展無明顯相關性。

綜上所述，外周血CYP2C8基因rs1934953位點CC基因型與AMI及其病變程度有關，而外周血CYP2C8基因rs7909236位點多態性可能與CHD分型和病變程度無關。由于本研究存在一定局限性，如樣本量少、覆蓋范圍小，其結論的準確性尚需要多中心、大樣本量研究加以驗證。