羊只多種疫苗組合分點同時免疫效果對比試驗

許 偉 ， 賀 文 ， 王 力 ， 馬 杰 ， 董小強

(1.甘肅省慶陽市動物疫病預防控制中心 ， 甘肅 慶陽 745000 ； 2.甘肅省慶城縣動物疫病預防控制中心 ， 甘肅 慶城 745100)

隨著本市肉羊產業的快速發展，養殖數量逐年增加，由于羊只調引頻繁，口蹄疫、小反芻獸疫等重大動物疫病傳染風險不斷增大；羊傳染性胸膜肺炎、羊痘、羊梭菌病和布魯氏菌病等人獸共患病呈地方性散發，嚴重影響本市肉羊養殖的健康發展，因此，做好免疫工作是當前本市羊只疫病防控的迫切需要，目前，羊只強制免疫的疫苗有口蹄疫、小反芻獸疫、布病S2株，因病設防的疫苗有山羊支原體肺炎、羊痘、羊三聯四防，如果單種疫苗每種間隔7 d免疫注射，不僅免疫工作時間跨度長，而且增加了基層防疫人員免疫注射工作量和工作強度。為提高免疫工作效率，強化免疫效果，探索不同疫苗組合的免疫方法對其抗體產生的影響，試驗將口蹄疫、小反芻獸疫，山羊支原體肺炎、羊痘4種疫苗每2種或3種進行不同組合，每組同時分點注射進行免疫效果檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 在慶城縣葛崾峴鄉一家規模羊場選取3月齡以上未注射過任何疫苗的健康羊230只作為試驗羊，試驗羊只臨床檢查健康，無臨床疾病表現，試驗羊按照規范進行飼養管理，精飼料為配合飼料，粗飼料為青干草，免疫前對試驗羊進行基礎抗體滴度測定，布魯菌病抗體陰性，口蹄疫、小反芻獸疫、羊傳染性胸膜肺炎、羊痘感染抗體陰性，免疫抗體滴度低于1∶16的選擇為試驗對象。

1.2 試驗疫苗 使用疫苗名稱、生產廠家、批號見表1。

表1 試驗疫苗及免疫方法

1.3 試驗分組 將選取的230只試驗羊，隨機分為9組。A1～A5組為試驗組，每組30只(見表2)。B1～B4組為對照組，每組20只(見表3)。各組免疫后過敏和死亡情況見表2和表3。

表3 對照組分組免疫注射情況 (只)

表2 試驗組分組免疫注射情況 (只)

1.4 免疫方法 2種和3種疫苗組合同時分點免疫方法，A1組和A4組分別注射于羊頸部兩側肌肉，A2組和A3組分別注射于羊頸部一側肌肉和尾根內側皮下，A5組分別注射于羊頸部兩側肌肉及尾根內側皮下,B1～B3組頸部肌肉注射，B4組尾根內側皮下注射。注射時嚴格消毒，規范操作，免疫劑量嚴格按照說明書要求注射(見表1)。

1.5 樣品采集 免疫21 d后，分別對試驗組A1～A5組和對照組B1～B4組共230只試驗羊前腔靜脈采血230份，每份5 mL，無菌分離血清后進行實驗室免疫抗體檢測。

1.6 檢測試劑 口蹄疫O型、A型液相阻斷ELISA檢測試劑盒，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，O型批號:20190305101-3、A型批號:20190314103-2。小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，中國動物衛生與流行病學中心生產，批號:2019001。山羊傳染性胸膜肺炎M0正向間接血凝診斷試劑盒，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號:20180515。羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號:20181121119。

2 結果

免疫結果檢測結果見表4、表5。

表5 對照組免疫抗體檢測結果匯總

表4 試驗組免疫抗體檢測結果

口蹄疫免疫抗體檢測：嚴格按照試劑盒說明書進行操作，口蹄疫O型-A型液相阻斷ELISA試驗抗體效價≥27為免疫合格。試驗組A1組A型口蹄疫合格24份、O型口蹄疫合格29份，合格率分別為80.0%、96.67%；A2組A型口蹄疫合格27份、O型口蹄疫合格30份，合格率分別為90.0%、100%；A5組A型口蹄疫合格28份、O型口蹄疫合格30份，合格率分別為93.3%、100%。對照組B1組A型口蹄疫合格18份、O型口蹄疫合格19份，合格率分別為90.0%、95.0%。

小反芻獸疫免疫抗體檢測：嚴格按照試劑盒說明書進行操作，小反芻獸疫阻斷ELISA阻斷率(PB)>50， 判定為陽性。試驗組A1組合格30份，合格率100%;A3組合格26份，合格率86.67%，A4組合格27份，合格率90.0%;A5組合格28份，合格率93.3%。對照組B2組合格19份，合格率95.0%。

山羊支原體肺炎免疫抗體檢測：嚴格按照試劑盒說明書進行操作，正向間接血凝實驗抗體效價≥23為免疫合格。試驗組A4組合格30份，合格率100%。對照組B4組，合格20份，合格率100%。

羊痘免疫抗體檢測：嚴格按照試劑盒說明書進行操作，羊痘免疫間接ELISA抗體檢測OD450值≥0.25為抗體陽性。試驗組A2組合格29份，合格率96.4%；A3組合格23份，合格率76.7%；A5組合格30份，合格率100%。對照組B3組合格18份，合格率90.0%。

3 討論

3.1 對各組羊只免疫后副反應觀察和抗體水平檢測。結果表明：口蹄疫和小反芻獸疫；口蹄疫和羊痘；小反芻獸疫和羊痘；小反芻獸疫和山羊支原體肺炎；口蹄疫、小反芻獸疫和羊痘疫苗組合分點同時注射副反應率、副反應臨床癥狀、免疫產生的抗體水平與單苗注射相比，差異不顯著，不同疫苗產生的抗體之間相互干擾、拮抗作用不明顯，抗體合格率在70%以上，均能達到國家規定的免疫抗體合格標準，因此該免疫接種方法在實際工作中可推廣應用。

3.2 免疫試驗過程中試驗組A4組小反芻獸疫和山羊支原體肺炎，A5組口蹄疫、小反芻獸疫和羊痘，在免疫過程中個別羊只出現副反應并死亡，經臨床觀察分析，有可能是疫苗的劑量過大、個體差異所致，我們在今后的工作中，還需進一步做好小范圍的免疫試驗，以確保2種和3種疫苗分點同時注射免疫的安全可靠性。